Лабораторная диагностика использует сразу несколько тестов на сифилис для получения максимально точного результата. Это занимает больше времени, но зато даёт наиболее точный ответ.

Чаще всего результат анализа РИФ представляют цифрами. Расшифровка имеет следующие обозначения:

• резко положительный результат обозначается 4 плюсами (++++);
• положительный результат обозначается 3 плюсами (+++);
• слабоположительный результат 2 плюсами (++);
• сомнительный результат 1 плюс (+);
• отрицательный результат обозначается 1 минусом (-).

Результат РИФ на сифилис также представляется в процентном варианте, который зависит от количественного показателя связанных бактерий:

• при отрицательном результате иммобилизация до 20%;
• при слабоположительном результате иммобилизация варьирует от 20 до 50%;
• при положительном результате иммобилизация выше 50%.

Если результат выдал положительный ответ, то это констатирует наличие заболевания.

Если результат слабоположительный , то это указывает на единичное количество остаточных антител в крови.

Отрицательный результат говорит об отсутствии бледной трепонемы, а это означает, что пациент здоров.

Опытные врачи нашей клиники проведут диагностику сифилиса быстро и с высокой точностью показаний. Мы социально ориентированы на все слои населения, поэтому стоимость анализа РИФ недорогая . Цена представлена в таблице на нашем сайте.

В серологической диагностике сифилиса, очень важно получить достоверный и точный результат.

Чтобы повысить качество данных, предпринимаются определенные действия:

• Исследуемая сыворотка разводится в 200 раз (1:200), чтоб избежать ложноположительных реакций. Тогда говорят, что проводится анализ на сифилис РИФ 200 .
• В другом варианте, при разведении сыворотки 1:5, дополнительно используется специальный абсорбент, который собирает на себе «лишние» антитела, чтоб они не искажали результаты.

На руку исследователям играют и размеры трепонем. Крупные микробные тела спирохет хорошо заметны при люминесцентной микроскопии. Если на них «прицепляются» меченные люминофором белки из сыворотки. Использование стандартизированного антигена и сывороток, позволяет до максимума повысить чувствительность и специфичность РИФ в диагностике сифилиса.

Частные варианты анализов РИФ: РИФ абсорбция

Один из альтернативных способов называется РИФ-Абс. От обычной методики он отличается низким разведением исследуемой сыворотки – 1:5 против 1:200, как обычно.

В концентрированном образце содержится очень много активных белковых молекул.

Чтоб избежать и повысить чувствительность, сыворотку обрабатывают специальным абсорбентом из фрагментов сифилитических спирохет. Сорбент собирает на себе излишне активные антитела и потом уже образец обрабатывают промышленной, меченной люминофором сывороткой. Благодаря такой предварительной подготовке, отсеиваются все лишние молекулы, которые могли бы повлиять на результаты теста.

Ставят ее по таким показаниям:

• Положительная на фоне клинического благополучия и отсутствии рисков заражения в анамнезе.
• Позитивная РВ у больных, страдающих хроническими заболеваниями.
• Отрицательная РВ при появлении подозрительных в отношении сифилиса симптомов.

Первые позитивные результаты появляются уже на 15-16 день с момента инфицирования. Если реакция из положительной становится отрицательной, это сигнализирует о полном излечении от сифилиса. Вероятность ложноположительного результата составляет меньше 0,4%.

Такая ситуация может произойти при обследовании онкобольных, алкоголиков, беременных женщин и страдающих расстройствами иммунитета людей.

Определенная доля приходится и на технические ошибки, так как постановка достаточно сложная. Бывают случаи, когда необходимо отличить врожденную патологию от приобретенной. Сделать это можно, если поискать разные виды антител в крови пациента.

Антитела к сифилису класса M (IgM), появляются вскоре после заражения и по времени намного опережают IgG. Выявить их позволяет анализ на сифилис РИФ абсорбции IgM. Если результаты постановки этой реакции будут положительными, то можно говорить о недавнем заражении. Так случаи реинфекции можно отличить от рецидива или выявить заражение ребенка после родов.

По итогам такой методики анализов РИФ, также делают вывод об эффективности лечения раннего сифилиса.

При подозрении на сифилис обращайтесь к опытному венерологу.

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — . При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

Антитела к бледной трепонеме и серологическая диагностика

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Антитела к бледной трепонеме IgM

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после , через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела к бледной трепонеме IgG

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Неспецифические антитела

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Ложноположительные анализы на сифилис

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Лабораторная диагностика сифилиса с применением серологических реакций

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

1. Нетрепонемные тесты

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

3. Тесты на сифилис с использованием рекомбинантных антигенов

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Диагностика сифилиса с применением нетрепонемных тестов

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления . Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, . Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с , в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция связывания комплемента (РСК кард, КСК с КА, реакция Вассермана)

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации (МРП)

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ)

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

Иммуноферментный анализ на сифилис (ИФА)

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Микробиологическая диагностика

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

ПЦР на сифилис

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.

Ставиться на совокупности данных анамнеза,конфронтации,клинической картины и лабораторных данных,включающих обнаружение возбудителя и результатов серологического обследования.Подтверждение диагноза лабораторными данными обязательно.

Методы диагностики,подтверждающие наличие сифилиcа

Методы диагностики, подтверждающие наличие различных форм и осложнений сифилиса

Также применяются и рутинные методы исследования - общие анализы крови и мочи,биохимический анализ крови и.т.д.

Что такое серологическая диагностика сифилиса

В большинстве случаев обнаружить возбудителя сифилиса невозможно или обнаружение
его затруднительно.Поэтому для диагностики сифилиса применяют так называемое серологическую диагностику,основанную на определении различных видов и классов антител,которые организм выработал с целью своей защиты от сифилитической инфекции т.е определяется не возбудитель инфекции,а как организм прореагировал на его появление.
Серологическое исследование (от от лат. serum - сыворотка) представляет собой лабораторный анализ плазмы каппилярной или венозной крови основаный на иммунологической реакции антиген-антитело.
В качестве антигенов используют фабрично изготовленные препараты,аналогичные по своей структуре антигенам липидов,появляющихся в организме при разрушении тканей бледной спирохетой,липидам ее мембран и специфическим молекулярным соединениям,входящих в состав мебраны бледной спирохеты (для этих целей используются очищенные и ультраозвученные штаммы трепонем или выделенные от них рекомбинантные антигены).
В лабораторных условиях к антигенам добавляется сыворотка крови обследуемого.Если в сыворотке (плазме) крови присутствуют антитела происходит реакция антиген-антитело и ее результаты обнаруживаются различными методами (положительный результат) при отсутствии антител реакция не происходит (отрицательный результат).Серологическую диагностику сифилиса осуществляют в следующих случаях.

Скрининг на сифилис

Массовое обследование определенных групп населения.Для скрининга применяются дешевые,простые и быстрые по исполнению тест системы,основанные на нетрепонемных тестах.Скринингу на сифилис подвергаются:

• Беременные женщины
• Доноры крови и органов для трансплантации
• Некоторые профессиональные контингенты (работники питания,образования,здравоохранения)
• Военнослужащие
• Лица,отбывающие наказание в местах лишения свободы
• Больные,готовящиеся к оперативному хирургическому вмешательству
• Лица,поступившие на стационарное лечение (обязательная вассерманизация - в России,странах СНГ и некоторых других странах)

Диагностика сифилиса

Для диагностики сифилиса применяются комбинация нетрепонемных и трепонемных тестов на сифилис или только трепонемные (подтверждающие) реакции.Серологическое обследование на сифилис назначается в следущих случаях:

• Лицам,имеющих клинические признаки сифилиса
• Лицам с любыми генитальными язвами
• Лицам - половым партнерам больных сифилисом,а также в случае близкого бытового контакта с больным вторичным сифилисом
• Детям,родившимся от больных сифилисом матерей
• Лицам с подтвержденным диагнозом других половых инфекций
• Для подтверждения результатов скрининга (отборочных реакций)

Контроль за лечением сифилиса

Применяются нетрепонемные тесты,так трепонемные тесты остаются положительными продолжительное время после лечения,а иногда всю жизнь.

Что такое нетрепонемные тесты

Нетрепонемные тесты определяют антитела класса IgG и IgM к липидам(фосфолипидам),
липопротеинам, высвобождаемых из поврежденных клеток хозяина, вследствии сифилитической инфекции и липидам,входящим в состав мембраны бледной трепонемы. Антилипидные антитела могут появляться не только вследствие сифилиса или других трепонематозов , но и в ответ на на некоторые острые и хронические заболевания, при которых наблюдается разрушение тканей.Антилипидные антитела (реагины) образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования.В основном нетрепонемные тесты применяются в двух случаях:

• Нетрепонемные тесты, в связи с дешевизной,доступностью простотой и быстрым сроком исполнения, применяются для скрининга сифилиса как отборочные реакции.
• По изменению количественных нетрепонемных тестов судят о степени эффективности лечения сифилиса и устанавливают его излеченность.Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами для установки диагноза сифилиса и проводятся до начала лечения,в процессе лечения и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

В качестве антигена для проведения нетрепонемных тестов используется стандартный кардиолипин-лецитин -холестероловый антиген (который является одним из компонентов тканей человеческого организма и содержит липиды, характерные для бледной трепонемы) для проведения микрореакции преципитации,в случае определения реагинов реакцией связывания комплимента(реакции Вассермана),помимо кардиолипинового антигена применяют еще и ультразвуковой дезинтеграт культуральных трепонем (трепонемный антиген).К нетрепонемный тестам относят:

• RPR (Rapid Plasma Reagins) тест быстрых реагинов (российский аналог микрореакция преципитации МР)
• VDRL (Venereal Disease Research laboratory)
• Реакция связывания комплимента (реакция Вассермана)

Недостатки нетрепонемных тестов

• Ложноотрицательные результаты - при исследовании неразведенных образцов сыворотки, содержащих большое количество антител,за счет так называемого феномена прозоны. Это явление может наблюдаться на ранних стадиях сифилиса и у пациентов с сопутствующей ВИЧ-инфекцией.
• Недостаточная чувствительность для диагностики поздней стадии сифилиса
• Ложноположительные результаты (биологические ложноположительные реакции) при наличии других острых или хронических заболеваний.

Что такое трепонемные тесты

Как и при нетрепонемных тестах при проведении трепонемных тестов используется иммунологическая реакция антиген-антитела.Но в качестве антигенов применяются трепонемные антигены - либо интактные трепонемы либо очищенные и ультраозвученные трепонемы либо рекомбинантные антигены.Для проведения и обнаружения результатов реакции антиген-антитела используют более сложные и дорогие различные методы.Наиболее часто используются следующие трепонемные тесты.

• Реакция иммунофлюоресценции (РИФ -FTA) в различный модификациях
• Реакция пассивной агглютинации (РПГА - TPHA)
• Иммуноферментный анализ (ИФА -EIA) в том числе рекомбинатный ИФА
• Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)
• Иммуноблотинг

Что такое иммуноблотинг

Иммуноблотинг (Western blot) для определения специфических IgM либо IgG является одним из современных и точных методов диагностики сифилиса.При проведении иммуноблотинга T.pallidum подвергаются электрофорезу, в результате чего происходит разделение белковых иммунодетерминант. Затем проводится обработка разделенных точек - blots исследуемой сывороткой и антителами к IgG либо IgM, помеченных ферментами или радиоактивными веществами. Выявленные с помощью иммуноблотинга определенные иммунодетерминанты являются диагностическими признаками сифилиса.
IgG-иммуноблотинг (IgG Western blot)по чувствительности и специфичности соответствует РИФ-абс.IgM -иммуноблотинг (IgM Western blot) применяется как диагностический тест при врожденном сифилисе.

Какая динамика серологических реакций при сифилисе

Антилипидные (неспецифические) антитела образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования.Специфические противотрепонемных антител класса IgM,обнаруживатся в конце второй недели заболевания. IgG к трепонемным антигенам появляются приблизительно через 4 недели после начала заболевания.К моменту появления клинических симптомов сифилиса в сыворотке крови пациентов можно выявить как специфические IgM, так и специфические IgG (суммарные антитела).Параметры иммунного ответа могут изменяться в результате проводимого лечения.Адекватное лечение раннего сифилиса приводит к быстрому снижению титров неспецифических антител и специфических IgM, при этом специфические IgG обычно сохраняются в сыворотке крови в течение длительного периода времени,а иногда и всю жизнь.

Сроки появления положительных серологических реакций при сифилисе

Частота положительных результатов серореакций при разных стадиях сифилиса

Как интерпретировать тесты на сифилис

В мировой медицинской практике для диагностики сифилиса используют три реакции: нетрепонемный тест - RPR или VDRL и два трепонемных тестов - реакцию иммунофлюоресценции (РИФ-FTA) и реакцию пассивной гемоагглютинации (РПГА - TPHA)

В России для диагностики сифилиса еще применяют реакцию связывания комплимента (реакцию Вассермана) и реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Первичный сифилис

При первичном серонегативном периоде сифилиса бывают положительные РИФ и Ig ИФА как наиболее чувствительные серореакции. Однако это не является основанием для постановки таким больным диагноза первичного серопозитивного сифилиса.У ряда больных в этом периоде бывает изолированный положительный результат при постановке реакции Вассермана с трепонемными или с кардиолипиновым антигенами. В конце 3-й или в течение 4-й недели после появления шанкра становятся положительными стандартные серологические реакции - с этого момента начинается первичный серопозитивный период сифилиса. На 1-2-й неделе первичного серопозитивного сифилиса отмечается увеличение степени позитивности серореакции (1+, 2+, 3+) и нарастание титра реагинов (1:5, 1:10, 1:20). РИФ и ИФА уже у всех больных дают резко положительный результат, но РИБТ, как правило, отрицательная или процент иммобилизации очень низок. Диагноз первичного серопозитивного сифилиса ставится и тем больным, у которых осадочные реакции и реакция Вассермана с неспецифическими антигенами дали даже однократный слабоположительный результат. При дальнейшем течении первичного сифилиса все серологические реакции становятся резко положительными (4+); титр реагинов достигает 1:80, 1:160, РИФ продолжает быть резко положительной, но РИБТ у большинства больных еще остается отрицательной или может стать слабоположительной.

Вторичный сифилис

При вторичном свежем сифилисе резко положительный результат по всем стандартным серологическим реакциям наблюдается почти в 100% наблюдений; титр реагинов наиболее высок - 1:160; 1:240 или 1:320. РИФ - 4+; РИБТ дает положительнй результат более чем у половины больных, однако процент иммобилизации трепонем невысок (40-60%).
При вторичном рецидивном сифилисе положительный результат по стандартным серологическим реакциям отмечается в 96-98% наблюдений. Отрицательные результаты могут иногда объясняться малосимптомным рецидивным течением, наличием астенизации и сочетанием сифилиса и ВИЧ-инфекции. РИБТ дает положительный результат у 85-90% больных при выраженной степени иммобилизации - 80-90-100%.

Третичный сифилис

Третичный сифилис характеризуется положительными результатами по стандартным серологическим реакциям в 50-90% наблюдений и положительной РИБТ у 92-100% пациентов с высоким процентом иммобилизации.

Скрытый сифилис

Диагноз скрытого серопозитивного сифилиса, как указывалось выше, устанавливают только по положительным серореакциям в крови с обязательным подтверждением их по РИБТ, так как только РИБТ (и в меньшей степени РИФ) позволяет отдифференцировать ложноположительные серореакции (даже с позитивностью в 2+ или 3+) от истинно положительных.

Нейросифилис и висцеральный сифилис

Разные формы сифилиса нервной системы и висцерального сифилиса имеют различную частоту и выразительность стандартных серореакции. Так, прогрессивный паралич в 100% случаев сопровождается резко положительными всеми стандартными серологическими реакциями. Сифилис сосудов мозга, спинная сухотка, сифилитическое поражение сердечно-сосудистой системы сопровождаются положительными серореакциями лишь в 40-50-60% наблюдений. Однако РИБТ почти при всех перечисленных патологических состояниях дает резко положительный результат (90-100% иммобилизации).

Врожденный сифилис

При диагностировании врожденного сифилиса в первые 2 мес после рождения стандартные серологические реакции у ребенка не определяют, т. к. они могут быть положительными за счет пассивной передачи реагинов через плаценту. По этой же причине не имеет значение и положительный результат РИБТ. Пассивно переданные от матери ребенку имобилизины самопроизвольно исчезают в течение 6 мес после рождения. Если ребенок инфицируется незадолго до родов, то в этом случае РИБТ будет еще отрицательной (в связи с более поздним образованием иммобилизинов), несмотря на наличие в организме ребенка сифилитической инфекции.
При врожденном сифилисе детей грудного возраста с активными проявлениями стандартные серореакции могут быть отрицательными в 1% наблюдений.При врожденном сифилисе раннего детского возраста отрицательные стандартные серореакции варьируют от 15 до 20%, но в этих случаях РИБТ дает положительные данные у 90-98% детей.При позднем врожденном сифилисе даже при наличии активных проявлений стандартные серореакции констатируются лишь у 70-80% обследованных, но зато РИБТ четко положительная у 100% больных с высоким титром иммобилизинов.

Положительные серореакции при отсутствии симптомов сифилиса

Это самый сложный вопрос в сифилидологии - положительные серореакции на сифилис при отсутствии клинических симптомов.
Различают пять ситуаций

Скрытый сифилис

• нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) - положительные (хотя при позднем скрытом сифилисе - давность заболевания более 2 лет -могут быть отрицательные)
• нет документированного свидетельства о полученном адекватном лечении сифилиса

Серопозитивность после лечения сифилиса

• нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) - положительные,отмечается снижение титров в течении года в 4 и более раза

Серорезистентность после лечения сифилиса

• трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные или отрицательные - значения не имеет
• нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) - положительные,отмечается их стабильность или снижение титров в течении года менее чем в 4 раза
• есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении сифилиса

Излеченный сифилис

• трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) положительные
• нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) - отрицательные
• есть документированное свидетельство о полученном адекватном лечении сифилиса

Если нет документированного свидетельства о полученном адекватном лечении сифилиса в прошлом см.ситуация №1 или дополнительно:
-исключить ранний сифилис (серонегатив)- контрольный трепонемный и нетрепонемный тест через 2 недели
-исключить поздний скрытый сифилис - исследование ликвора,клинико-рентгенологическое исследование
-исключить ложноположительный трепонемный тест (провести 2-3 трепонемных теста,включая РИБТ) в динамике
-исключить невенерический трепанематоз
-провести лечение позднего скрытого сифилиса по существующим методикам.

Ложноположительные реакции на сифилис

• трепонемные тесты (РПГА,РИФ,ИФА с трепонемным антигеном) отрицательные
• нетрепонемные тесты (МР -RPR,VDRL) - положительные
• наличие документированных свидетельств о полученном адекватном лечении сифилиса не имеет значения



• The value of darkfield microscopy in the differential diagnosis of secondary syphilis (Calif West Med. 1926) Full text
• Результаты сравнительного изучения диагностической эффективности ряда современных нетрепонемных и трепонемных тестов
• Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis (Clin Microbiol Rev. 1995)

РИФ, РИБТ, РПГА

РИФ - реакция иммунофлюоресценции - трепонемный тест. Является одним из самых чувствительных анализов на сифилис. РИФ становится положительной через 10-20 дней после инфицирования, что относит ее к методам раннего выявления сифилиса.

Показания проведения РИФ:

• Постановка РИФ проводится у лиц с симптомами сифилиса, при этом отрицательными реакциями - РМП, РВ;
• в качестве дифференциальной реакции у лиц с положительными реакциями RW, микрореакции и отсутствием симптомов;
• у беременных при отсутствии клинических проявлений и сифилиса в анамнезе.

Методика проведения РИФ:

• При проведении реакции в сыворотку пациента добавляется кровь кролика, зараженная бледной трепонемой(возбудитель сифилиса) и флюоресцирующая(светящаяся) сыворотка. Исследование заключается в наблюдении свечения комплексов под люминесцентным микроскопом. Результаты реакции интерпретируются в зависимости от интенсивности свечения от 1+ до 4+, что указывает на наличие сифилиса. Отсутствие свечения - отрицательный результат РИФ обозначает, что обследуемый здоров. Ложные результаты анализа встречаются крайне редко при системных процессах, беременности и т.д.
• Реакция ставится в модификации РИФ-200 и РИФ-авс(абсорбция).
• Чувствительность реакции при первичном сифилисе составляет порядка 85%
• при вторичном сифилисе - 100%
• при третичном сифилисе - 98-100% .

Негативация РИФ происходит в течение нескольких лет после лечения сифилиса. После проведенной противосифилитической терапии необходимо наблюдение за показателями в динамике.

РИБТ - реакция иммобилизации бледных трепонем - является самым специфичным анализом крови на сифилис. РИБТ высококачественный, дорогостоящий анализ крови, выполнение которого могут позволить себе хорошо оснащенные лабораторные комплексы. РИБТ является основополагающей реакцией при скрытых формах сифилиса, нейросифилисе, висцеросифилисе. Позволяет отдифференцировать ложноположительные реакции от истинного заболевания сифилисом.

Постановка реакции основана на обездвиживании (иммобилизации) возбудителя сифилиса видоспецифичными антителами. Путем микроскопического исследования читается результат реакции: 0-20% - отрицательная, 21-30%- сомнительная, 31-50% - слабоположительная, 51-100% - положительная реакция. То есть к положительным результатам на сифилис относятся те, где РИБТ более 50%. При сифилисе РИБТ становится положительной достаточно медленно: в первичный периоде сифилиса она еще отрицательна, во вторичном свежем периоде - положительна в 50% случаев, во вторичном рецидивном периоде - положительна в 90-100%, в третичном периоде - положительна в 99-100%.

Негативация РИБТ осуществляется десятилетиями, поэтому как критерий достоверности излеченности ее использовать неправомочно, тем не менее динамическое наблюдение после проведенного противосифилитического лечения необходимо.

Проведение реакции РИБТ целесообразно не ранее чем через 30 дней после окончания лечения. РПГА - реакция пассивной гемагглютинации - относится к трепонемным тестам, проводится в комплексе с нетрепонемными. Используется для подтверждения диагноза сифилиса на любой его стадии.

Реакцию целесообразно проводить через 4 недели после предполагаемого заражения. При проведении реакции к сыворотке крови пациента добавляют препарат, приготовленный из эритроцитов животного происхождения, сенсибилизированных антигеном бледной трепонемы - возбудителя сифилиса.

Суть реакции РПГА заключается в склеивании (агглютинации) в присутствии антител к трепонеме и образовании агглютината - фигуры, которую наблюдает врач - лаборант. Реакция оценивается по количеству +: 4+- резкоположительный результат, 3+-положительный, 2+-слабоположительный, 1+-сомнительный, - - отрицательный результат. При положительном результате реакции проводится количественная оценка с определением концентрации (титра) антител. При прогрессировании сифилиса - титр антител постоянно растет.

РПГА остается положительной в течение десятилетий после лечения сифилиса, поэтому не может использоваться в качестве критерия достоверности излеченности. Однако необходимо наблюдать титр антител РПГА в динамике.

Метод обладает высокой чувствительностью. Результаты РПГА могут быть ложноположительны. К таким результатам анализа могут приводить болезни соединительной ткани, некоторые инфекции, и т.д.