توجد طرق عديدة للتحديد النوعي والكمي للأجسام المضادة الخاصة بالفيروس. باستخدام هذه الطرق ، من الممكن اكتشاف كل من IgM و IgG في وقت واحد ، وبشكل منفصل عن الغلوبولين المناعي لكل فئة. كقاعدة عامة ، يتم اكتشاف IgG الخاصة بالفيروس فقط في تفاعل الارتباط التكميلي. ومع ذلك ، عند اختبار المستضدات الميكروبيولوجية بهذه الطريقة ، من الممكن تحديد IgM و IgG في نفس الوقت.

تُستخدم الطرق المناعية أساسًا لغرضين: أولاً ، لتشخيص عدوى فيروسية حالية أو مكتملة أو خلقية ، وثانيًا ، لاكتشاف أجسام مضادة محددة ، يشير وجودها إلى عدوى سابقة ، وبالتالي ، مناعة ضد احتمال إعادة العدوى. من حيث قوة الاستجابة المناعية للعدوى الفيروسية ، يختلف الناس كثيرًا عن بعضهم البعض. في التين. يوضح الشكل 3 منحنى ارتفاع عيار نموذجي

الأجسام المضادة استجابةً لعدوى الحصبة الألمانية الأولية. من السهل أن نرى أن تشخيص الحصبة الألمانية ممكن عن طريق زيادة عيار IgG المحدد وتحديد IgM المحدد. يشير وجود IgM في دم الوليد إلى وجود عدوى داخل الرحم ، حيث تحتفظ المشيمة بـ IgM الأم ، على عكس IgG. عادة ما يستمر IgG المحدد من العدوى الأولية طوال الحياة. لذلك ، فإن وجود الأجسام المضادة من هذه الفئة في مصل الدم يشير إلى وجود مناعة ضد إعادة العدوى المقابلة.

فيما يلي طرق مناعية للكشف عن أجسام مضادة معينة لفيروس الحصبة الألمانية ، وهي فعالة بشكل خاص في تشخيص مرض الجنين وتحديد عيار الأجسام المضادة المحددة في مصل الدم. الأوصاف التفصيليةيمكن العثور على الطرق المستخدمة لتشخيص الحصبة الألمانية في مراجعات باتيسون ومورجان كابنر.

تفاعل تثبيط التراص الدموي

يسبب فيروس الروبيلا التراص الدموي في خلايا الدم الحمراء في العديد من أنواع الحيوانات. في أغلب الأحيان ، يتم استخدام كريات الدم الحمراء للدجاج البالغ من العمر يوم واحد في RTGA. في هذا التفاعل ، ينمو الفيروس في المزرعة ويعالج باستخدام توين 80 والإيثر بمثابة مستضد التراص الدموي لفيروس الحصبة الألمانية. تزيد المعالجة المسبقة من عيار HA للفيروس.

5.1.1 توحيد مستضد الحصبة الألمانية HA

1. 1 مل من محلول 50٪ من كريات الدم الحمراء للدجاج يغسل ثلاث مرات في محلول فيرونال مع ديكستران والجيلاتين عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق الحبيبات في أنبوب طرد مركزي متدرج 15 مل. يتم إعادة تعليق الخلايا المغسولة في المخزن المؤقت DGV للحصول على تعليق بنسبة 30 ٪.

الجدول 3. إعداد Veronal Buffer مع ديكستران والجيلاتين

2. يخفف المستحضر المجفف بالتجميد لمستضد HA لفيروس الحصبة الألمانية في حجم الماء المقطر المطلوب حسب التعليمات.

3. أضف حجمًا واحدًا من DGV إلى كل من الآبار الثمانية لصفين متجاورين من لوحة ميكروتيتر بوليسترين 96 بئر مع آبار مختلفة على شكل حرف U.

4. في الآبار الأولى من صفين ، يضاف حجم واحد من مستضد فيروس الروبيلا HA.

5. يتم تحضير التخفيفات المتسلسلة ذات الشقين من مستضد الحصبة الألمانية HA ، والتي تتراوح من 1: 2 إلى 1: 256 ، باستخدام جهاز ميكروترى 0.025 مل. قبل الاستخدام ، يجب تحميص رأس جهاز المعايرة الدقيقة في لهب أحمر حار ، ثم تبريده لبضع ثوان ، ووضعه في ماء مقطر وتنشيفه بورق ترشيح.

6. أضف حجمًا إضافيًا من DGV-buffer إلى كل من الآبار المملوءة. كعنصر تحكم ، تمت إضافة مجلدين من المخزن المؤقت DGV إلى الآبار 12 من أول صفين.

7. يتم تخفيف تعليق كريات الدم الحمراء المغسولة من الدجاج 100 مرة باستخدام محلول DGV ، وبالتالي الحصول على 0.03٪ معلق.

8. في جميع الآبار الثمانية عشر أضف مجلدين بتعليق 0.03٪ من كريات الدم الحمراء ، وتغطى الصفيحة النهائية بلوحة أخرى غير مستخدمة وتحضن لمدة ساعة عند 4 درجات مئوية.

9. في الجزء السفلي من آبار التحكم ، يتم تشكيل "لوحة" كثيفة من كريات الدم الحمراء غير المتراصة. تستقر كريات الدم الحمراء الملتصقة بالتساوي. يعتبر عيار HA هو المقابل لأعلى تخفيف لمستضد HA لفيروس الحصبة الألمانية ، حيث لا يزال التراص الكامل يحدث. يحتوي هذا التخفيف على 1 وحدة تراص دموي.

لاختبار الأمصال ، يتم استخدام 4 وحدات GA من مستضد الحصبة الألمانية. وبالتالي ، إذا كان عيار مستضد GA هو 32 ، ثم للكشف عن الأجسام المضادة لفيروس الحصبة الألمانية ، يتم تخفيفه باستخدام DGV ثماني مرات. يكون المستضد المخفف مستقرًا لمدة 25-48 ساعة عند 4 درجات مئوية.

5.1.2 المعالجة المسبقة لمصل اللبن

تحتوي جميع الأمصال على مثبطات التراص الدموي غير النوعية التي يجب إزالتها. مثبطات GA غير النوعية هي في الأساس بروتينات دهنية ، يتم إطلاقها عن طريق معالجة المصل بالكاولين. بالإضافة إلى ذلك ، قد توجد راصات غير محددة من كريات الدم الحمراء للدجاج في مصل الإنسان. ومع ذلك ، فإن الامتزاز الأولي للمصل المختبرة بواسطة كريات الدم الحمراء ليس ضروريًا ، حيث أن جميع الهيماجلوتينين غير النوعي الموجود في المصل موجود في الضوابط.

1. في أنابيب زجاجية مرقمة أضف 0.2 مل من المصل. بالإضافة إلى المصل المدروس ، فإن الضوابط الإيجابية والسلبية مطلوبة في كل تجربة.

2. أضف 0.8 مل من 25٪ كاولين في محلول ملحي بوراتي لكل أنبوب.

3. اهتزت محتويات الأنابيب وتركت في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة.

4. يتم ترسيب الكاولين المستهلك بالطرد المركزي في جهاز طرد مركزي منضدية عند 2000 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة.

5. انقل المادة الطافية لتنظيف الأنابيب المرقمة. نتيجة التطهير ، يتم الحصول على مصل ، مخفف أربع مرات. يتم استخدامها لتكوين تفاعل تثبيط التراص الدموي. يمكن تخزين الأمصال عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها.

5.1.3 تثبيط تفاعل التراص الدموي

1. لاختبار عينة مصل واحدة ، أضف حجمًا واحدًا من DGV إلى صف واحد من الآبار.

2. أضف حجمًا واحدًا من المصل المخفف أربع مرات إلى البئر الأولى والأخيرة.

3. باستخدام جهاز ميكروتيتر ، قم بإعداد تخفيفين متتاليين من المصل.

4. يضاف حجم واحد من مستضد الحصبة الألمانية يحتوي على 4 GAU إلى الآبار 1-10. لا يضاف مستضد الروبيلا GA إلى البئر 12.

5. في الآبار 1-8 من صفيحة أخرى ، يضاف حجم واحد من التخفيف العامل لمستضد الروبيلا HA ، ثم في ثمانية آبار ، يتم تحضير تخفيفات مضاعفة من مستضد HA. يضاف حجم واحد من DGV إلى هذه الآبار الستة عشر. هذه المعايرة هي اختبار لمستضد الحصبة الألمانية HA. للتحكم ، تمت إضافة مجلدين من DGV إلى الآبار 12 من الصفين الأول والثاني.

6. تُترك الألواح المغطاة لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة أو طوال الليل عند 4 درجات مئوية.

7. في جميع الآبار المملوءة ، يضاف مجلدين بتركيز 0.03٪ من كريات الدم الحمراء للدجاج وتترك الألواح لمدة 1 - 1.5 ساعة عند 4 درجات مئوية.

8. عرض اللوحات ، وتحديد عيار مستضد الروبيلا HA. يجب ألا يحدث تراص في آبار التحكم.

9. إذا كانت كريات الدم الحمراء ملتصقة في الدم في غياب مستضد الروبيلا GA ، فمن الضروري إعادة اختبار التخفيف المصل الأولي. قبل ذلك ، يُمتص المصل بقطرة واحدة من محلول 30٪ من كريات الدم الحمراء للدجاج لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة ، ثم يتم ترسيب كريات الدم الحمراء عن طريق الطرد المركزي.

10. يعتبر عيار الأجسام المضادة المحددة في مصل الدم المدروس تبادليًا للتخفيف ، حيث يتم قمع التراص الدموي تمامًا.

5.1.4 تفسير النتائج

مع وجود عيار منخفض ، من الصعب تفسير النتائج ، لأنه مع التخفيف الصغير ، يكون الوجود المتبقي لمثبطات غير محددة ممكنًا. يعتبر وجود الأجسام المضادة الخاصة بالفيروس مثبتًا عند عيار 16 أو أعلى.

تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA) هو طريقة لتحديد الفيروس أو الكشف عن الأجسام المضادة للفيروسات في مصل دم المريض ، بناءً على ظاهرة عدم تراص كريات الدم الحمراء بواسطة دواء يحتوي على فيروس في وجود مصل مناعي ضده.

تمتلك العديد من الفيروسات القدرة على تلصيق كريات الدم الحمراء لأنواع محددة بدقة من الثدييات والطيور. لذلك ، فإن فيروسات الأنفلونزا والنكاف تلتصق بالكريات الحمراء للدجاج ، خنازير غينياوالفيروسات البشرية والفيروسات الغدية - كريات الدم الحمراء في الجرذان والفئران. في هذا الصدد ، من أجل اكتشافها في مادة المرضى أو في مزارع الخلايا والأجنة والحيوانات ، يتم تعيين تفاعل التراص الدموي (RHA). لهذا الغرض ، يتم تحضير التخفيفات المتزايدة من المواد والسوائل المحصنة في آبار الأطباق ، مع إضافة معلقات كرات الدم الحمراء لكلوريد الصوديوم المغسولة بمحلول متساوي التوتر. للتحكم في التراص التلقائي ، يتم خلط كريات الدم الحمراء بكمية متساوية من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر. يتم تحضين المخاليط في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية أو في درجة حرارة الغرفة.

يتم أخذ نتائج RGA في الاعتبار من خلال طبيعة تراص كريات الدم الحمراء بعد 30-60 دقيقة ، عندما يتم ترسيبها بالكامل في مجموعة التحكم. ردود الفعل الإيجابية يشار إليها بالإيجابيات. "++++" - رواسب على شكل "مظلة" ، "+++" - رواسب بها فجوات ، "++" - رواسب ذات فجوات كبيرة ، "+" - رواسب متدفقة محاطة بمنطقة من كريات الدم الحمراء المتكدسة ، و "-" - نفس الرواسب المحددة بحدة من كريات الدم الحمراء على شكل "زر" ، كما في عنصر التحكم.

نظرًا لكونه خاصًا بالمجموعة ، فإن RHA لا يجعل من الممكن تحديد الأنواع التي تنتمي إلى الفيروسات. يتم تحديدها باستخدام تفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI). لإعداده ، يتم استخدام الأمصال المضادة للفيروسات المناعية المعروفة ، والتي يتم تخفيفها في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر بتركيزات متناقصة ضعفين ويتم سكبها في الآبار. يتم إضافة كمية متساوية من السائل الملقح إلى كل من التخفيفات الخاصة بهم. التحكم هو تعليق الفيروس في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر. تُحفظ الألواح التي تحتوي على خليط من الأمصال والفيروسات في منظم حرارة لمدة 30 دقيقة أو في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين ، ثم يضاف معلق من كريات الدم الحمراء إلى كل منها. بعد 30 دقيقة ، يتم تحديد عيار المصل المعادل (أي الحد الأقصى لتخفيفه) ، والذي تسبب في تأخير تراص كريات الدم الحمراء.

يستخدم RTGA في التشخيص المصلي للأمراض الفيروسية ، وخاصة عدوى الأنفلونزا والفيروسات الغدية. من الأفضل وضعه بنفس طريقة PH ، مع أمصال مقترنة. تؤكد زيادة عيار الجسم المضاد بأربعة أضعاف في المصل الثاني التشخيص الافتراضي.

يعتمد تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA) على الحصار ، وقمع المستضدات الفيروسية بواسطة الأجسام المضادة للمصل المناعي ، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص كريات الدم الحمراء.

يستخدم RTGA لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية ، والتي يمكن للعوامل المسببة لها (الأنفلونزا ، والحصبة ، والحصبة الألمانية ، وفيروسات التهاب الدماغ المنقولة بالقراد ، وما إلى ذلك) أن تتراكم كريات الدم الحمراء للحيوانات المختلفة.

آلية. يتم إجراء تصنيف الفيروس في تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA) مع مجموعة من الأمصال الخاصة بالنوع. تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار في حالة عدم وجود تراص دموي. يمكن تمييز الأنواع الفرعية للفيروس A مع مستضدات H 0 N 1 و H 1 N 1 و H 2 N 2 و H 3 N 2 وما إلى ذلك في RTGA بمجموعة من الأمصال المتماثلة من النوع المحدد.

في الآونة الأخيرة ، تم استخدام التفاعل على نطاق واسع في مختبرات علم الفيروسات الإكلينيكي لتحديد عيارات الأجسام المضادة المحددة لفيروسات معينة ، وكذلك لتحديد الهوية المصلي ونوع الفيروس المعزول من المواد السريرية من المرضى. يتم استخدامها بشكل محدود إلى حد ما بسبب وجود مثبطات غير محددة للفيروسات في مصل دم الأشخاص ، وكذلك الأجسام المضادة الطبيعية - الراصات.

مبدأ RTGAيتكون من خلط كميات متساوية من مصل الدم ومعلق الفيروس في أنبوب اختبار ، وبعد التعرض يتم تحديد ما إذا كان الفيروس محفوظًا في الخليط عن طريق إضافة معلق من كريات الدم الحمراء. يشير تراص كريات الدم الحمراء إلى وجود ، وغياب التراص الدموي ، مما يشير إلى عدم وجود فيروس في الخليط. يعتبر اختفاء الفيروس من خليط الفيروس + المصل علامة على تفاعل الأجسام المضادة في الدم والفيروس.

لكن الأجسام المضادة تتفاعل مع المستضدات بنسب كمية محددة بدقة. لذلك ، من أجل حرمان كمية معينة من الفيروس من قدرة التراص الدموي ، يلزم وجود حد أدنى معين من الأجسام المضادة ، وبما أن أحد مكونات RTGA غير معروف دائمًا ، يجب وضع التفاعل في صف اختبار أنابيب بجرعات مختلفة من الأجسام المضادة ونفس جرعات الفيروس أو العكس. يتم تحقيق ذلك عن طريق أخذ إما تخفيفات مصل مختلفة ونفس تخفيف الفيروس ، أو تخفيفات مختلفة للفيروس ونفس تخفيف المصل.

يسمح RTGA بحل المهام التالية: تحديد عيار الأجسام المضادة لفيروس التراص الدموي في المصل ؛ التعرف على فيروس التراص الدموي غير المعروف بواسطة الأمصال المعروفة ؛ لتحديد درجة العلاقة المستضدية بين فيروسين.

مزايا RTGA:بساطة التكنولوجيا والسرعة وعدم الحاجة إلى عمل معقم والخصوصية والتكلفة المنخفضة. العيب: RTGA ممكن فقط مع فيروسات التراص الدموي.

مبدأ معايرة الأجسام المضادة في RTGAعلى النحو التالي:

- تحضير سلسلة من التخفيفات المتسلسلة (عادة ضعفين) من مصل الاختبار بكميات متساوية (عادة 0.25 أو 0.2 مل) ؛

- أضف إلى كل تخفيف نفس الأحجام من الفيروس المتماثل في عيار 4 HAU ؛

- يتم الاحتفاظ بالمخاليط لفترة معينة عند درجة حرارة معينة (لفيروس مرض نيوكاسل 40-60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة) ؛

- تضاف أحجام متساوية من معلق بنسبة 1٪ من كريات الدم الحمراء المغسولة إلى جميع الخلائط ؛

- بعد التعرض ، قم بتقييم التراص الدموي في كل خليط في الصلبان.

يشمل التفاعل عناصر تحكم في المصل والفيروسات وكريات الدم الحمراء.

يتم أخذ أعلى تخفيف في المصل ، والذي لا يزال يمنع التراص الدموي تمامًا ، كمؤشر على عيار الجسم المضاد في هذا المصل.

استخدام تفاعلات الامتصاص في علم الفيروسات.

RGAD.تم اكتشاف الامتصاص الدموي - ارتباط كريات الدم الحمراء بسطح الخلايا المصابة بالفيروس - لأول مرة بواسطة فوغل وشيلوكوف (1957) في مزرعة الأنسجة المصابة بفيروس الأنفلونزا. تعتمد هذه الظاهرة على علاقة المستقبلات الفيروسية الموجودة على سطح الخلية المصابة بمستقبلات كرات الدم الحمراء ، مما يؤدي إلى التصاقها المتبادل بشكل مشابه لتفاعل التراص الدموي. وتتمثل ميزة هذا التفاعل في أنه يصبح إيجابيًا حتى قبل ظهور تغيرات اعتلال خلوي مميزة في الخلايا المصابة.

منهجية RGADعلى النحو التالي. في اليوم الثالث والرابع بعد إصابة الخلايا ، يتم أخذ أنبوبين لهما نفس ثقافة الخلايا ، أحدهما مصاب بمواد محصنة ، والثاني هو أنبوب تحكم. يتم تصريف سائل المزرعة من كل من أنابيب الاختبار ويتم إضافة 2-3 قطرات من 0.5٪ معلق من كريات الدم الحمراء المغسولة إلى كليهما. يتم ترك كلا الأنبوبين لمدة 5-10 دقائق بحيث تكون كريات الدم الحمراء على سطح الخلايا (توضع أفقيًا على الطاولة) ، ثم يتم شطفها برفق بمحلول ملحي وفحصها تحت المجهر (تكبير منخفض). في أنبوب التحكم ، تتم إزالة كريات الدم الحمراء تمامًا بالمحلول الملحي ، وتطفو بعض الخلايا المتبقية مع السائل. إذا لم تتم إزالة كريات الدم الحمراء في أنبوب الاختبار المصاب بمحلول ملحي ولا تطفو ، ولكنها متصلة بسطح الخلايا ، فيجب اعتبار RHAD إيجابيًا.

اعتمادًا على الفيروس ونوع الخلايا ، يمكن أن يكون موقع خلايا الدم الحمراء ثلاثة أضعاف:

- يتم امتصاص كريات الدم الحمراء فقط على طول محيط طبقة الخلية في شكل "قلادة" (فيروس حمى الخنازير الأفريقية) ؛

- توجد كريات الدم الحمراء على طبقة الخلية في بؤر أو عناقيد (فيروس الأنفلونزا) ؛

- توجد كريات الدم الحمراء بشكل منتشر على طبقة الخلية (فيروس نظير الانفلونزا).

كل فيروس قادر على امتصاص خلايا الدم الحمراء لأنواع معينة من الحيوانات.

التشخيص المصلي للأمراض الفيروسية بناءً على زيادة عيار الأجسام المضادة في مصل الدم المقترن.

تفاعل التراص الدموي (RHA) وتفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA) ، آلية ومكونات وتطبيق التفاعلات.

يعتمد تفاعل التراص الدموي على ظاهرة التصاق كرات الدم الحمراء ، والتي تحدث تحت تأثير عوامل مختلفة. يميز بين التراص الدموي المباشر وغير المباشر.

أولاً ، يتم غسل كريات الدم الحمراء بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، ثم ، إذا لزم الأمر (عند استخدام مستضدات ذات طبيعة بروتينية) ، يتم معالجتها بمحلول التانين 1: 20000 وتحسسها بمستضدات قابلة للذوبان. بعد الغسيل بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، يكون مستضد كرات الدم الحمراء جاهزًا للاستخدام.

يتم تخفيف المصل المدروس بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر في أنابيب اختبار أو ألواح بلاستيكية خاصة بها آبار ، ثم يضاف تشخيص كريات الدم الحمراء إلى كل تخفيف مصل. تؤخذ نتائج تفاعل التراص الدموي غير المباشر في الاعتبار من خلال طبيعة رواسب كرات الدم الحمراء المتكونة في قاع أنبوب الاختبار. تعتبر نتيجة التفاعل إيجابية ، حيث تغطي خلايا الدم الحمراء الجزء السفلي من أنبوب الاختبار بالتساوي. في حالة حدوث رد فعل سلبي ، توجد كريات الدم الحمراء على شكل قرص صغير أو "زر" في منتصف الجزء السفلي من أنبوب الاختبار

المكونات الرئيسية لـ RP:

أ) مستضد قابل للذوبان ،

ب) أجسام مضادة محددة (مصل)

(RTGA) هي طريقة لتحديد الفيروس أو الكشف عن الأجسام المضادة للفيروسات في مصل دم المريض ، بناءً على ظاهرة عدم تراص كريات الدم الحمراء بواسطة مستحضر يحتوي على فيروس في وجود مصل محصن ضده.
على أساس الحصار ، قمع مستضدات الفيروسات بواسطة الأجسام المضادة للمصل المناعي ، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص كريات الدم الحمراء.

يستخدم RTGA لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية ، والتي يمكن للعوامل المسببة لها (الأنفلونزا ، والحصبة ، والحصبة الألمانية ، وفيروسات التهاب الدماغ المنقولة بالقراد ، وما إلى ذلك) أن تتراكم كريات الدم الحمراء للحيوانات المختلفة.
آلية.يتم إجراء تصنيف الفيروس في تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA) مع مجموعة من الأمصال الخاصة بالنوع. تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار في حالة عدم وجود تراص دموي. أنواع فرعية من فيروس A مع مستضدات H0N1 و H1N1 و H2N2 و H3N2 وما إلى ذلك.

يمكن تمييزها إلى RTGA بمجموعة من الأمصال المتماثلة من النوع المحدد.

في قلب .. أو في الوسط تفاعلات التراص الدموي تكمن ظاهرة التصاق كرات الدم الحمراء التي تحدث تحت تأثير عوامل مختلفة.

يميز بين التراص الدموي المباشر وغير المباشر.
في تفاعل التراص الدموي المباشر ، تلتصق كريات الدم الحمراء ببعضها عندما يتم امتصاص مستضدات معينة ، مثل الفيروسات ، عليها.
في الدراسات المصلية ، يتم استخدام تفاعل مباشر لتثبيط التراص الدموي ، عندما يتم تحييد فيروس معزول من مريض بمصل مناعي معين ، ثم يتم دمجه مع كريات الدم الحمراء.

يشير غياب التراص الدموي إلى تطابق الفيروس مع المصل المناعي المستخدم.

لوحظ تفاعل التراص الدموي غير المباشر (التراص الدموي السلبي) في الحالات التي يتم فيها إضافة مصل المناعة أو مصل المريض الذي يحتوي على الأجسام المضادة المقابلة إلى كريات الدم الحمراء التي عولجت سابقًا (حساسة) بمولدات ضد مختلفة.

هناك التصاق محدد لكريات الدم الحمراء ، التراص الدموي السلبي.

يتفوق تفاعل التراص الدموي غير المباشر أو السلبي في الحساسية والنوعية على الطرق المصلية الأخرى ، ويستخدم في تشخيص الالتهابات التي تسببها البكتيريا ، والريكتسيا ، والأوليات.

تتكون تقنية تنظيم تفاعل التراص الدموي غير المباشر من عدة مراحل.

أولاً ، يتم غسل كريات الدم الحمراء بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، ثم ، إذا لزم الأمر (عند استخدام مستضدات ذات طبيعة بروتينية) ، يتم معالجتها بمحلول التانين 1: 20000 وتحسسها بمستضدات قابلة للذوبان.

بعد الغسيل بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، يكون مستضد كرات الدم الحمراء جاهزًا للاستخدام. يتم تخفيف المصل المدروس بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر في أنابيب اختبار أو ألواح بلاستيكية خاصة بها آبار ، ثم يضاف تشخيص كريات الدم الحمراء إلى كل تخفيف مصل.

تؤخذ نتائج تفاعل التراص الدموي غير المباشر في الاعتبار من خلال طبيعة رواسب كرات الدم الحمراء المتكونة في قاع أنبوب الاختبار. تعتبر نتيجة التفاعل إيجابية ، حيث تغطي خلايا الدم الحمراء الجزء السفلي من أنبوب الاختبار بالتساوي. إذا كان رد الفعل سلبيًا ، فإن خلايا الدم الحمراء على شكل قرص صغير أو "زر" تقع في منتصف الجزء السفلي من أنبوب الاختبار.

تفاعل تثبيط التراص الدموي- تفاعل مصلي يعتمد على قدرة الأجسام المضادة على منع تراص كريات الدم الحمراء بفيروسات التراص الدموي (الفيروسات الغدية ، الفيروسات المنقولة جنسياً ، بعض الفيروسات المعوية ، فيروسات الأنفلونزا ونظير الأنفلونزا ، الحصبة ، فيروسات الإنفلونزا).

تتفاعل أجسام مضادة محددة للفيروسات مع جزيئات هيماجلوتينين السطحية لفيروسات هذه الفيروسات وتمنع ارتباطها بجزيئات غشاء كرات الدم الحمراء التكميلية.

في الآونة الأخيرة ، تم استخدام التفاعل على نطاق واسع في مختبرات علم الفيروسات الإكلينيكي لتحديد عيارات الأجسام المضادة الخاصة لبعض الفيروسات ، وكذلك لتحديد الهوية المصلي ونوع الفيروس المعزول من المواد السريرية من المرضى.

يتم استخدامها بشكل محدود إلى حد ما بسبب وجود مثبطات غير محددة للفيروسات في مصل دم الأشخاص ، وكذلك الأجسام المضادة الطبيعية - الراصات.

تفاعل المعادلة هو تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA).

يتم تطبيق RTGA:
- من أجل التنميط المصلية للفيروسات.
- للتشخيص المصلي للالتهابات.
هناك طريقتان للتخطيط:
- طريقة التنقيط على الزجاج (تفاعل تقريبي) ، تستخدم للنسخ الرمادي للفيروسات ؛
- تكشفت في أنابيب الاختبار.

آلية.

تحتوي بعض الفيروسات (على سبيل المثال ، الأنفلونزا) على هيماجلوتينين ، الذي يسبب تراص خلايا الدم الحمراء في الحيوانات المختلفة ، اعتمادًا على نوع الفيروس.

في وجود الأجسام المضادة في المصل - مضادات الجلوتينين ، لوحظ تثبيط نشاط الفيروسات.
RTGA.
الهدف: التنميط المصلي لفيروس الأنفلونزا أ

عناصر:
1. مادة الاختبار - السائل السقائي لجنين الدجاج ،
2. مصل تشخيصي محدد مضاد للإنفلونزا ،
3.5٪ معلق من كريات الدم الحمراء في الدجاج.
4.

محلول ملحي.

يتم وضع التفاعل على الزجاج بطريقة الإسقاط. ضع قطرة واحدة من الأمصال التشخيصية واختبار المواد على الزجاج ، واخلطها ، ثم أضف قطرة واحدة من تعليق كريات الدم الحمراء. مع رد فعل إيجابي ، لوحظ احمرار متجانس ، ومع رد فعل سلبي ، تسقط رقائق حمراء (تراص دموي).

السابق التالي

توصيف فيروسات الانفلونزا. وبائيات وتشخيص الأنفلونزا. استخدام RTGA في التنميط المصلي لفيروسات الأنفلونزا. الاستعدادات للوقاية والعلاج المحدد.

الأنفلونزا أو الأنفلونزا - حادة عدوىتتميز بتلف الأغشية المخاطية العلوية الجهاز التنفسي، حمى ، تسمم عام ، ضعف نشاط الجهاز القلبي الوعائي والجهاز العصبي.

تتميز الأنفلونزا بالميل إلى انتشار الأوبئة والجائحة بسبب ارتفاع معدل العدوى وتنوع العامل الممرض.

خصائص مسببات الأمراض. مسببات الأمراض - تنتمي فيروسات الأنفلونزا إلى هذا. Orthomyxoviridae ، أجناس فيروس الإنفلونزا A ، B و Influenzavirus C. فيروسات الأنفلونزا هي فيروسات RNA. تم عزل فيروس الأنفلونزا من النوع A في عام 1933 بواسطة W. Smith، K. Andrews، P. Laidlaw. في عام 1940 ، تم العثور على T.

تطبيق طريقة التراص الدموي في علم الفيروسات.

عزل فرانسيس و ر. ميدجيل فيروسات الأنفلونزا من النوع B ، في عام 1949 R. Taylor - type C. في روسيا ، تم عزل فيروسات الأنفلونزا الأولى في عام 1936 بواسطة A. فيروسات الإنفلونزا لها شكل كروي (شكل كروي) - 80-120 نانومتر ، وغالبًا ما يكون لها شكل خيطي. وهي تتكون من: 1) نواة - غلاف نووي من نوع حلزوني من التناظر (خطي أحادي الجديلة "-" - خيط RNA + قفيصة بروتينية) ؛ 2) الغشاء القاعدي - غشاء البروتين الدهني الخارجي - الكابسيد.

يوجد على سطح المغلف نوعان من البروتينات السكرية (على شكل أشواك وزغابات): 1) هيماجلوتينين - يعزز الارتباط بمستقبلات الخلية ؛ 2) النورامينيداز - يعزز إطلاق الفيروس من الخلية. زراعة. تستخدم أجنة الدجاج ، ومزارع الخلايا الأولية بالتريبسين ، وأحيانًا حيوانات المختبر للزراعة.

النموذج الأكثر ملاءمة هو أجنة الدجاج التي تتراوح أعمارها بين 10-12 يومًا. يسمح لك بالحصول على كميات كبيرة من الفيروس الضروري في إنتاج اللقاحات والمستحضرات البكتيرية.

تحدث العدوى في التجويف اللوني ، في الغشاء المشيمي ، في التجويف الأمنيوسي ، في السلى. تم الكشف عن وجود الفيروس في جنين الدجاج في تفاعل التراص الدموي. هيكل مستضد. تحتوي الفيروسات على مستضد داخلي - S ومستضدات سطحية: HA-hemagglutinin و NA-neuraminidase. يكون مستضد S خاصًا بالمجموعة ، ومشتركًا في النوع بأكمله ؛ بالنسبة إلى هذا المستضد ، تنقسم فيروسات الإنفلونزا إلى أنواع A و B و C. وهو مستضد مكمل ملزم وثابت (غير متغير).

مستضدات HA و NA هي مستضدات محددة. يتسبب مستضد HA في تكوين أجسام مضادة معادلة للفيروسات والتصاق كريات الدم الحمراء.

يتسبب مستضد NA في تكوين الأجسام المضادة التي تعمل على تحييد الفيروسات جزئيًا.

فيروس النوع B أقل تغيرًا ، والنوع C مستقر للغاية.

الخصائص السامة. التأثير السام للفيروس على الجسم ( صداع الراس, ألم عضلي، درجة الحرارة ، ظواهر النزلات) تسببها بروتينات الفيروس (الجسيمات الأكثر فيروسية). هذا الإجراء محدد بدقة ولا يتم تحييده إلا عن طريق مصل المناعة من النوع أو النوع الفرعي المقابل أو عن طريق مصل المرضى. مقاومة. فيروسات الإنفلونزا حساسة للأشعة فوق البنفسجية والمطهرات (الفورمالين والكحول والفينول والكلورامين) والمذيبات الدهنية.

في وسط سائل ، يموتون عند درجة حرارة 50-60 درجة مئوية في غضون بضع دقائق. في درجة حرارة الغرفة في الهواء ، تظل الفيروسات معدية لعدة ساعات. يتم حفظها لفترة طويلة في شكل جاف ، وفي حالة التجميد (-70 درجة مئوية) فهي لا تستمر فقط لفترة طويلة ، ولكنها أيضًا لا تفقد الفوعة.

حساسية الحيوانات. في ظل الظروف الطبيعية ، تصيب فيروسات من النوع A البشر والحيوانات (تصيب الخيول والخنازير) ، والفيروسات من النوعين B و C - البشر فقط. من بين حيوانات المختبر ، الفئران البيضاء ، القوارض الأفريقية ، الهامستر السوري ، والقرود معرضة للإصابة بالفيروسات.

يتسم المرض الذي يصيب الحيوانات بتلف الرئة وحالة الحمى وقد يؤدي إلى موت الحيوانات. وبائيات المرض. مصدر العدوى هو شخص مريض بشكل معبر عنه سريريًا أو بدون أعراض. يقوم الشخص المريض بإطلاق الفيروس في البيئة عند السعال والتحدث والعطس مع قطرات من اللعاب والمخاط والبلغم بالفعل خلال فترة الحضانة.

يصبح المريض معديًا قبل 24 ساعة من ظهور الأعراض الرئيسية ويشكل خطرًا وبائيًا في غضون 48 ساعة بعد اختفائها.

آلية النقل الهوائية. طريق النقل محمول جوا. الناس معرضون جدًا للإنفلونزا. جميع الفئات العمرية مريضة ، خاصة في فصل الشتاء. الأكثر عرضة للإصابة هم الأطفال وكبار السن. يعكس اسم المرض ملامح علم الأوبئة: الأنفلونزا من الفرنسية. القابض - للاستيلاء والأنفلونزا - من الإيطالية. إنفلونزا فريدو - تأثير البرد.

من كل شارب أمراض الجهاز التنفسيالأنفلونزا هي المرض الأكثر انتشارًا وخطورة. تغطي جوائح وأوبئة الإنفلونزا ما يصل إلى 30-50٪ أو أكثر من سكان العالم ، مما يتسبب في أضرار جسيمة للصحة والاقتصاد في البلدان. تعود الأوصاف الأولى لأوبئة الإنفلونزا إلى القرنين الثاني عشر والرابع عشر. إن ظهور الأوبئة والأوبئة الكبيرة ناتج عن فيروس الأنفلونزا من النوع A ، والذي يرجع إلى التباين الكبير للفيروس ويرتبط بظهور نوع فرعي جديد نتيجة تحول المستضد.

بين الأوبئة ، يحدث تفشي الأوبئة كل 1.5 إلى 2 سنة ، وهو ما يرتبط بانجراف الفيروسات المستضدي. في عام 1918 ، كان جائحة الأنفلونزا الإسبانية (أصيب 1.5 مليار شخص بالمرض ، وتوفي 20 مليون شخص) سببه فيروس الإنفلونزا A1 ، والذي تم تسجيله بشكل أساسي في إسبانيا ، وقد غطى هذا الوباء جميع سكان الأرض تقريبًا ؛ تميز المرض بتطور التهاب رئوي نزفي حاد للغاية مع معدل وفيات قياسي (يصل إلى 1٪ من جميع الحالات).

في عام 1957 ، كان الوباء "الآسيوي" (مرض 2 مليار شخص) سببه نوع فرعي جديد - النوع الفرعي A2. في عام 1968 ، كان جائحة "هونغ كونغ" (مرض مليار شخص) سببه نوع فرعي ظهر حديثًا - نوع فرعي A3. كقاعدة عامة ، يزيح نوع جديد من الفيروس تنوعًا متداولًا سابقًا من البشر.

ولكن في عام 1977 ، بعد توقف دام 20 عامًا ، "عاد" النوع A1 فجأة ، مما أدى إلى انتشار وباء كبير. وبالتالي ، تستمر المتغيرات النازحة لفيروس الأنفلونزا وفي فترات معينة يمكن أن تتسبب في حدوث وباء مرة أخرى. يسبب فيروس النوع B أوبئة محلية ، والنوع C لا يسبب الأوبئة. التسبب في المرض والصورة السريرية للمرض. بوابة المدخل هي مجرى الهواء العلوي. يغزو الفيروس الخلايا الظهارية للغشاء المخاطي ويتكاثر فيها.

يتسبب تأثير الفيروس على الخلايا الظهارية في نخرها وتقشر (رفض) الظهارة ، ونتيجة لذلك يصبح الغشاء المخاطي نافذًا للفيروسات والبكتيريا. تدخل مجرى الدم وتنتشر في جميع أنحاء الجسم. ويرافق الفيروس آفات متعددة من البطانة الشعرية مع زيادة في نفاذية لها.

في الحالات الشديدة ، هناك نزيف واسع النطاق في الرئتين ، عضلة القلب ، أعضاء متني. منتجات اضمحلال الخلايا التالفة والبروتينات الفيروسية لها تأثير سام على مختلف الأجهزة وأنظمة الأعضاء. تثبط سموم الفيروس بشدة الجهاز العصبي المركزي ، وعلى الرغم من أن العملية لا تدوم طويلاً (3-5 أيام) ، يظل المريض ضعيفًا لفترة طويلة وتنضم بعض العدوى الثانوية إلى الجسم الضعيف وتظهر المضاعفات: الالتهاب الرئوي الأنفلونزا ، الحاد الوذمة الرئوية وتلف الكلى والقلب والشعب الهوائية.

المضاعفات الشائعة للإنفلونزا هي الالتهاب الرئوي الجرثومي (العقديات المجموعة ب). خلال جائحة الأنفلونزا الإسبانية ، مات الناس بشكل رئيسي من التهاب رئوي جرثومي ثانوي.

في التسبب في الإنفلونزا ، ليس التسمم مهمًا فحسب ، بل أيضًا الحساسية ، بالإضافة إلى انتهاك الخصائص الوظيفية للخلايا المؤهلة للمناعة مع تطور نقص المناعة. فترة الحضانة- عدة ساعات - 1-3 أيام. تتميز ببداية حادة ، ارتفاع في درجة الحرارة إلى 37.5 - 38 درجة مئوية ، تسمم عام ، يعبر عن توعك ، صداع ، ألم في مقل العيون، العمليات الالتهابية للجهاز التنفسي متفاوتة الخطورة (التهاب الأنف ، التهاب الحنجرة ، القصبات ، التهاب البلعوم).

تستمر الحمى المصحوبة بالأنفلونزا بدون مضاعفات من 5 إلى 6 أيام. حصانة. بعد انتقال المرض ، يتم تكوين مناعة خاصة بالنوع والسلالة ، والتي يتم توفيرها بواسطة عوامل خلطية وخلطية محددة وغير محددة. الأجسام المضادة Ig A لها أهمية كبيرة. لا تتطور المناعة المتقاطعة ، بعد نقل الإنفلونزا من النوع A1 ، يمكن أن تصاب بالإنفلونزا من النوع A2 ، إلخ. بعد الفيروس من النوع ، تكون المناعة من 1-2 سنوات ، بعد الفيروس من النوع B - 3 - 5 سنوات.

مناعة طبيعية سلبية - عند الأطفال دون سن 8 - 11 شهرًا. نظرًا لارتفاع التباين المستضدي للفيروس ، فإن الشفاء لا يؤدي إلى تطوير مقاومة مستمرة للعدوى المتكررة.

التشخيصات المخبرية. مادة الاختبار: مسحات - بصمات من الغشاء المخاطي للتجويف الأنفي ، إفرازات من البلعوم الأنفي ، وقطع من الرئتين ، والدماغ في حالة الوفاة.

طرق التشخيص: 1) طريقة التنظير الخلوي - الكشف عن شوائب داخل الخلايا خاصة بالفيروس - عند تلطيخها بالبيوكتانين تحت المجهر ، تظهر شوائب حمراء زاهية لفيروس الأنفلونزا في خلايا الظهارة الهدبية ؛ 2) الطريقة الفيروسية - عزل فيروس الأنفلونزا عن جسم الإنسان عن طريق إصابة أجنة الدجاج عن طريق غسل البلعوم الأنفي للمريض ؛ يتم تنفيذ إشارة (وجود) الفيروس بمساعدة RHA (فيروسات الأنفلونزا تتراكم كريات الدم الحمراء للإنسان والحيوانات المختلفة) ، ويتم تحديد الفيروس على مراحل: يتم تحديد النوع في RSC ، النوع الفرعي Hemagglutinin - في RTGA ، والنوع الفرعي للنيورامينيداز - في تفاعل تثبيط نشاط الإنزيم ؛ 3) الطريقة المصلية - الكشف عن زيادة في العيار (4 مرات) من الأجسام المضادة المحددة في مصل دم المريض باستخدام RSK ، RTGA ، RN في زراعة الخلايا ، تفاعل الترسيب في هلام ، ELISA ؛ 4) الطريقة البيولوجية - إصابة الفئران داخل الأنف - إدخال مادة إلى الرئتين تحت تأثير التخدير بالإيثر ؛ تموت الفئران بعد يومين إلى ثلاثة أيام نتيجة للالتهاب الرئوي. 5) التشخيص السريع - الكشف عن المستضد الفيروسي باستخدام RIF.

العلاج والوقاية.

للوقاية والعلاج في الأيام الأولى من المرض ، يتم استخدام مضاد للفيروسات الكريات البيض البشرية (داخل الأنف). الخامس أغراض طبيةاستعمال الأدوية المضادة للفيروسات- ريمانتادين (الأنفلونزا من النوع أ) ، أدابرومين ، فيرازول وأدوية معدلة للمناعة - ديبازول ، بروديجيوسان ، ليفوميزول.

في الإنفلونزا الشديدة ، وخاصة عند الأطفال ، يتم استخدام الغلوبولين المناعي المضاد للأنفلونزا من المانحين ، وكذلك الأدوية - مثبطات البروتياز الخلوية (جوردوكس ، كونتريكال ، حمض أمينوكابرويك).

الوقاية الخاصة. يتم استخدام الأدوية المضادة للفيروسات ومعدلات المناعة ، وكذلك اللقاحات - الحية والمعطلة: 1) اللقاحات الأحادية الحية للإعطاء عن طريق الفم - السلالات الموهنة من الفيروسات المنتشرة في الوقت الحاضر (A1 و A3 و B) ؛ تظهر أكبر مناعة. 2) لقاحات الفيريون الكاملة من السلالات الخبيثة المعطلة بواسطة الفورمالديهايد أو الأشعة فوق البنفسجية ؛ 3) لقاحات أنفلونزا الوحدة الفرعية فقط من المستضدات السطحية - مستضدات HA و NA (لها تفاعل ضئيل).

للحصول على اللقاحات ، تزرع الفيروسات في أجنة الكتاكيت وفي مزرعة خلوية لأجنة الدجاج.

مع إدخال اللقاحات ، تتشكل المناعة المحلية والخلطية. يتم التطعيم خلال الفترات التي يكون فيها خطر انتشار الأوبئة أكبر. يشار في الغالب للصغار وكبار السن. يتطلب استخدام اللقاحات المقتولة إعادة التطعيم السنوية ؛ كفاءتها لا تتجاوز 60-70٪.

لأن نظرًا لأن الاختلافات المستضدية للعامل الممرض غالبًا ما يتم ملاحظتها ، فلا يمكن تحديد مجموعة مستضدات الفيروس المقابل للتحصين إلا بعد ظهور الفاشية.

التذكرة 15.

تفاعل التراص الدموي (RHA).

في المختبر ، يستخدمون تفاعلين للتلصص الدموي يختلفان في آلية العمل.

أول RHA مصلي. في هذا التفاعل ، تتراكم خلايا الدم الحمراء عند التفاعل مع الأجسام المضادة المقابلة (هيماجلوتينين).

يستخدم التفاعل على نطاق واسع لتحديد فصائل الدم.

RHA الثاني ليس مصلي. في ذلك ، لا يحدث لصق كرات الدم الحمراء

الأجسام المضادة والمواد الخاصة التي تشكلها الفيروسات. على سبيل المثال ، يتراكم فيروس الأنفلونزا على كريات الدم الحمراء للدجاج وخنازير غينيا ، وفيروس شلل الأطفال - كريات الدم الحمراء في الأغنام. هذا التفاعل يجعل من الممكن الحكم على وجود فيروس معين في مادة الاختبار.

يتم إجراء التفاعل في أنابيب اختبار أو على ألواح خاصة بها ثقوب.

يتم تخفيف المادة المراد اختبارها بحثًا عن وجود الفيروس بمحلول متساوي التوتر من 1:10 إلى 1: 1280 ؛ يتم خلط 0.5 مل من كل تخفيف مع حجم متساوٍ من 1-2٪ معلق من كريات الدم الحمراء. في عنصر التحكم ، يتم خلط 0.5 مل من كريات الدم الحمراء مع 0.5 مل من محلول متساوي التوتر. توضع الأنابيب في منظم الحرارة لمدة 30 دقيقة ، وتترك الألواح في درجة حرارة الغرفة لمدة 45 دقيقة.

المحاسبة عن النتائج.في نتيجة ايجابيةالتفاعل في الجزء السفلي من أنبوب الاختبار أو البئر ، يسقط راسب من كريات الدم الحمراء ذات الحواف الصدفية ("المظلة") ، ويغطي قاع البئر بالكامل.

تفاعل تثبيط التراص الدموي

إذا كانت النتيجة سلبية ، فإن كريات الدم الحمراء تشكل رواسب كثيفة ذات حواف ناعمة ("زر"). يجب أن تكون نفس الرواسب تحت السيطرة.

يتم التعبير عن شدة التفاعل بعلامات "+". عيار الفيروس هو أقصى تخفيف للمادة التي يحدث فيها التراص.

تفاعل تثبيط التراص الدموي

هذا رد فعل مصلي تتفاعل فيه أجسام مضادة محددة للفيروسات ، تتفاعل مع فيروس (مستضد) ، وتحييده وتحرمه من القدرة على تراص كريات الدم الحمراء ، أي.

أي أنها تمنع تفاعل التراص الدموي. يتيح لك هذا التفاعل تحديد نوع الفيروسات ونوعها.

بيان رد الفعل.يتم خلط 0.25 مل من المصل المضاد للفيروسات مع كمية متساوية من المواد المحتوية على الفيروس. يُرج الخليط ويوضع في منظم حرارة لمدة 30 دقيقة ، وبعد ذلك يضاف 0.5 مل 1-2٪ معلق من كريات الدم الحمراء.

المحاسبة عن النتائج.مع الإعداد الصحيح للتجربة في التحكم في المصل وكريات الدم الحمراء ، يجب تكوين "زر" - لا يوجد عامل تراص في كريات الدم الحمراء ؛ في السيطرة على المستضد ، يتم تشكيل "مظلة" - تسبب الفيروس في تراص كريات الدم الحمراء.

إذا كان المصل متماثلًا مع الفيروس المدروس ، يتم تشكيل "زر" - المصل قام بتحييد الفيروس.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر

يعتمد تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (RIGA) على حقيقة أن كريات الدم الحمراء ، إذا تم امتصاص مستضد قابل للذوبان على سطحها ، تكتسب القدرة على التراص عند التفاعل مع الأجسام المضادة للمستضد الممتص.

بيان رد الفعل.

يُسخن المصل لمدة 30 دقيقة عند 56 درجة مئوية ، ويخفف بالتتابع بنسبة 1:10 - 1: 1280 ويُسكب في أنابيب أو آبار بحجم 0.25 مل ، ثم تُضاف قطرتان من كريات الدم الحمراء مع مستضدات ممتصة عليها.

ضوابط:تعليق كريات الدم الحمراء مع مستضدات ممتصة عليها بمصل مناعي واضح ، تعليق من كريات الدم الحمراء مع مستضدات ممتصة عليها بمصل طبيعي ؛ تعليق كريات الدم الحمراء الطبيعية مع المصل المختبَر.

في الضبط الأول ، يجب أن يحدث التراص ، في الثاني والثالث ، لا ينبغي أن يحدث.

أسئلة التحكم.

1. ما هو الدليل على نتيجة RHA إيجابية بين كريات الدم الحمراء والمواد المختبرة لوجود الفيروس؟

2. هل سيحدث تفاعل تراص كرات الدم الحمراء إذا تمت إضافة الفيروس والمصل المقابل لهم؟

ما اسم رد الفعل الذي يكشف هذه الظاهرة؟

العمل العملي رقم 12.

تفاعل مكمل ملزم.

يعتمد تفاعل الارتباط التكميلي (CSC) على حقيقة أن مركبًا محددًا من الجسم المضاد-المستضد يمتز (يربط) المكمل على نفسه دائمًا.

يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع في تحديد المستضدات والتشخيص المصلي للعدوى ، خاصة الأمراض التي تسببها اللولبيات (تفاعل واسرمان) والريكتسيا والفيروسات.

التفاعل المصلي المركب RCC.

وهو يشتمل على نظامي مكمل ونظامين للأجسام المضادة. في الأساس ، هذان نوعان من التفاعلات المصلية.

يتكون النظام الصحيح - النظام الرئيسي - من مستضد وجسم مضاد (أحدهما معروف والآخر ليس كذلك). يتم إضافة كمية معينة من المكمل إليها. عندما يتطابق المستضد والأجسام المضادة لهذا النظام ، فسوف يتحدان ويربطان المجاملة. المجمع المشكل مشتت بدقة وغير مرئي.

يتم التعرف على تكوين هذا المركب بمساعدة نظام انحلالي ثانٍ أو نظام مؤشر.

ويشمل كريات الدم الحمراء في الأغنام (مستضد) والمصل الانحلالي المقابل (الجسم المضاد) ، أي مركب مناعي جاهز. في هذا النظام ، يمكن أن يحدث تحلل خلايا الدم الحمراء فقط في وجود مكمل. إذا كان المكمل مرتبطًا بالنظام الأول ، فلن يكون هناك انحلال دم في النظام الثاني ؛

لا يوجد مكمل مجاني. يتم تسجيل عدم وجود انحلال الدم (محتويات الأنبوب غائم أو في الجزء السفلي من رواسب كريات الدم الحمراء) كنتيجة إيجابية لـ CSC.

إذا كان المستضد في النظام الأول لا يتوافق مع الجسم المضاد ، فلن يتشكل المركب المناعي وسيظل المجمل مجانيًا. يبقى المجمل مجانيًا ، ويشارك في النظام الثاني ، مما يتسبب في انحلال الدم ، وتكون نتيجة CSC سلبية (محتويات الأنابيب شفافة "دم مصقول").

المكونات ، تفاعلات الربط التكميلية:

المستضد - عادة ما يكون محللًا ، أو مستخلصًا ، أو ناشئًا ،

أقل في كثير من الأحيان تعليق الكائنات الحية الدقيقة.

2. الجسم المضاد - مصل المريض.

3. تكملة - مصل خنزير غينيا.

مستضد - كريات الدم الحمراء في الأغنام.

5. الجسم المضاد - الهيموليسين لكريات الدم الحمراء في الأغنام.

6. حل متساوي التوتر.

نظرًا لحقيقة أن عددًا كبيرًا من المكونات المعقدة متضمنة في DGC ،

يجب معايرتها مسبقًا وإدخالها في التفاعل بكميات دقيقة وبأحجام متساوية: 0.5 أو 0.25 لكل منهما ، أقل من 0.2.1.25 أو 1.0 مل (تعطي الأحجام الكبيرة نتيجة أكثر دقة). يتم إجراء معايرة مكونات التفاعل بنفس حجم التجربة ، مع استبدال المكونات المفقودة بمحلول متساوي التوتر.

معلومات مماثلة:

بحث في الموقع:

يعتمد على حقيقة أن كريات الدم الحمراء ، التي تم امتصاص المستضدات عليها مسبقًا ، تكتسب القدرة على التراص في وجود الأمصال المتجانسة (الأجسام المضادة).

في هذه الحالة ، تعمل كريات الدم الحمراء كحاملات مع محددات محددة ، يحدث تراصها نتيجة تفاعل المستضد + الجسم المضاد.

تسمى كريات الدم الحمراء ، بالسطح الذي ترتبط به المستضدات بقوة ، بتشخيص مستضد كريات الدم الحمراء ، أو كريات الدم الحمراء المحسوسة بمستضد.

يتم امتصاص نوع آخر من الأجسام المضادة RNGA على سطح كريات الدم الحمراء ويحدث تراصها اللاحق في وجود مستضد متماثل.

في هذه الحالة ، تسمى كريات الدم الحمراء بتشخيص الأجسام المضادة ، أو كريات الدم الحمراء الحساسة بالأجسام المضادة.

على أساس هذين النهجين المنهجيين الأساسيين ، تم تطوير العديد من التعديلات على RNGA واستخدامها. وبالتالي ، يتم استخدام جزيئات اللاتكس القياسية الصغيرة كناقلات.

تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA)

في هذه الحالة ، يُطلق على التفاعل تفاعل تراص اللاتكس (RLA) أو يتم استخدام المكورات العنقودية الذهبية - تفاعل التراص ، إلخ. عادةً ، يتم تحضير تشخيصات كريات الدم الحمراء في مؤسسات الصناعة البيولوجية ، وفي المختبرات التشخيصية قاموا بالفعل بوضع العنصر الرئيسي تجربة RNGA.

يتضمن تحضير تشخيص كرات الدم الحمراء الخطوات التالية:

• تثبيت كريات الدم الحمراء مع الفورمالديهايد أو الجلوتارال أو الألدهيدات الأكريليكية.

  تستمر كريات الدم الحمراء المعالجة لفترة طويلة. في أغلب الأحيان ، يتم استخدام كريات الدم الحمراء في الكبش والبشر والدجاج وما إلى ذلك لهذا الغرض ؛

• علاج كريات الدم الحمراء الثابتة بمحلول التانين. نتيجة لذلك ، تكتسب كريات الدم الحمراء خاصية امتصاص البروتينات بشكل لا رجعة فيه (الفيروسات والأجسام المضادة) على سطحها ؛
• توعية كريات الدم الحمراء المدبوغة بالفيروسات أو الأجسام المضادة.

وتجدر الإشارة إلى أن طرق إعداد تشخيصات كرات الدم الحمراء للعدوى الفيروسية مختلفة.

تقنية ضبط RNGA لاكتشاف وتحديد عيار الجسم المضاد هي كما يلي:

• تضاف جرعات متساوية من كريات الدم الحمراء المحسّسة بالمستضد إلى التخفيفات المتسلسلة ذات الضعفين من المصل ؛
• يُترك الخليط لمدة 2-3 ساعات في درجة حرارة الغرفة أو لمدة 16-18 ساعة عند 4 درجات مئوية ؛
• تأخذ في الاعتبار النتائج.

  إذا كان المصل يحتوي على أجسام مضادة للفيروس ، والتي تحسس كريات الدم الحمراء ، يتم ملاحظة التراص الدموي ، والذي يتم تقييمه في التهجينات.

بالنسبة لعيار الأجسام المضادة في مصل الدم ، يتم أخذ أعلى تخفيف للمصل ، والذي لا يزال يوفر التراص الدموي بواسطة تهجينين على الأقل.

RNGA مصحوب بجميع الضوابط ذات الصلة. عادة ، يتم تنفيذ التفاعل بالطريقة الدقيقة.

يسمح لك RNGA بحل المهام التشخيصية التالية:

• الكشف عن الأجسام المضادة وتحديد عيارها في مصل الدم باستخدام تشخيص مستضد معروف لكريات الدم الحمراء ؛
• الكشف عن فيروس غير معروف والتعرف عليه باستخدام تشخيص معروف للجسم المضاد لكريات الدم الحمراء.

مزايا RNGA: حساسية عالية وبساطة تقنية الإعداد والاستجابة السريعة.

ومع ذلك ، من المهم ملاحظة أن هناك صعوبات كبيرة في إعداد تشخيصات كريات الدم الحمراء المستقرة (اعتماد كبير على نقاء المكونات المستخدمة ، والحاجة إلى تحديد وضع التثبيت ، ودباغة وتوعية كريات الدم الحمراء لكل نوع من أنواع الفيروسات).

إذا وجدت خطأً ، فالرجاء تحديد جزء من النص والضغط على Ctrl + Enter.

في تواصل مع

زملاء الصف

يستخدم كريات الدم الحمراء أو المواد الاصطناعية المحايدة (على سبيل المثال ، جزيئات اللاتكس) ، التي يتم امتصاص سطحها المستضدات (البكتيرية ، الفيروسية ، الأنسجة) أو الأجسام المضادة.

يحدث تراصها عند إضافة الأمصال أو المستضدات المناسبة. تسمى كريات الدم الحمراء المحسّسة بالمستضدات بتشخيص كريات الدم الحمراء المستضدية وتستخدم للكشف عن الأجسام المضادة ومعايرتها. الأجسام المضادة تحسس كريات الدم الحمراء. تسمى تشخيص الغلوبولين المناعي كرات الدم الحمراء وتستخدم للكشف عن المستضدات.

يستخدم تفاعل التراص الدموي السلبي لتشخيص الأمراض التي تسببها البكتيريا (حمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية ، الزحار ، الحمى المالطية ، الطاعون ، الكوليرا ، إلخ) ، البروتوزوا (الملاريا) والفيروسات (الأنفلونزا ، عدوى الفيروسات الغدية ، التهاب الكبد الفيروسي B ، والحصبة ، والتهاب الدماغ الذي ينتقل عن طريق القراد ، وحمى القرم النزفية ، وما إلى ذلك) ، وكذلك لتحديد بعض الهرمونات ، للتعرف على فرط حساسية المريض للأدوية والهرمونات ، مثل البنسلين والأنسولين.

تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA).

تفاعل التراص الدموي السلبي هو طريقة حساسة للتشخيص المصلي ويستخدم للتشخيص المبكر والتشخيص بأثر رجعي ، وكذلك لتحديد الحالة المناعية للتلقيح. في المرضى الذين يعانون من مرض التولاريميا ، عادةً ما يتم اكتشاف الأجسام المضادة في نهاية الأسبوع الأول أو الثاني من المرض ، بعد 1-1.5 شهرًا يصل عيار RPHA إلى القيم القصوى (1: 100000-1: 20000 ، أقل غالبًا) ، بعد التي تنخفض عند المستوى 1: 100-1: 200 يتم تخزينها لفترة طويلة.

في التطعيم ، يتم أيضًا اكتشاف الأجسام المضادة باستمرار ، ومع ذلك ، في التتر المنخفض ، لا يتجاوز 1: 2000-1: 5000 1-1.5 شهرًا بعد التطعيم ، فإنها تبقى لعدة سنوات عند مستوى منخفض 1: 20-1: 80.

يستخدم Tularemia erythrocyte Diagnosticum (مستضد) كمستضد لتحديد RPHA.

الدواء عبارة عن كريات الدم الحمراء في الأغنام المهيأة للحساسية مع مستضد التولاريميا ، وهو متوفر في صورة سائلة وجافة. تحضير سائل - معلق 10٪ من كريات الدم الحمراء في محلول فورمالين بتركيز 10٪. مستحضر جاف مجفد بالتجميد - معلق مجفف بالفراغ بنسبة 10٪ من كريات الدم الحمراء بدون مادة حافظة. قبل الاستخدام ، يتم تخفيفه وفقًا للإرشادات الموجودة على الملصق. لضبط التفاعل في ألواح البوليسترين ، يتم استخدام كلا الدواءين بتركيز 2.5٪ ، وعند ضبط التفاعل في أحجام ميكروية - بتركيز 0.5٪.

تقنية تنظيم RPGA.

يتم تخفيف الأمصال المختبرة بمحلول ملحي 1: 5 (1:10) وتسخينها عند 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.

تفاعل التراص الدموي (RHA) و

بعد ذلك ، من أجل إزالة الأجسام المضادة غير المتجانسة لكريات الدم الحمراء في الحمل ، يتم علاج الأمصال بتعليق بنسبة 50٪ من كريات الدم الحمراء في الحمل. لهذا الغرض ، تضاف كريات الدم الحمراء بمعدل قطرتين (0.05 مل لكل منهما) لكل 1 مل من المصل وتُخلط جيدًا بالرج.

يُترك المصل حتى تستقر كريات الدم الحمراء تمامًا ، أو تُطرد بعد ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك يصبح جاهزًا للبحث.

يُسكب السائل المخفف في حجم 0.5 مل في صف من آبار لوح البوليسترين.

في دراسة أولية للمصل ، يُنصح باختبارها عن طريق ضبط التفاعل في صف قصير من الصفيحة (6 آبار). إذا تم الكشف عن الأجسام المضادة في صف قصير ، يتم إعادة اختبار الأمصال في صف تخفيف طويل (12 بئراً).

بعد سكب السائل المخفف ، أضف 0.5 مل من السيرام المختبرة بتخفيف 1: 5 إلى البئر الأول من كل صف (قصير أو طويل). ثم ، في نفس الأحجام من المصل ، عاير بتخفيفات مضاعفة. وبالتالي ، يتم الحصول على تخفيفات المصل في سلسلة قصيرة من 1:10 إلى 1: 320 ، وفي السلسلة الطويلة من 1:10 إلى 1: 20480. بعد معايرة المصل ، تضاف قطرة واحدة (0.05 مل) من محلول معلق 2.5٪ من كريات الدم الحمراء إلى كل بئر.

تهتز محتويات الألواح تمامًا حتى يتم الحصول على تعليق متجانس. تُترك الألواح في درجة حرارة الغرفة على سطح طاولة ثابت. يتم إجراء التسجيل الأولي للتفاعل بعد 2-3 ساعات ، ويتم التحديد النهائي للعيار بعد الترسيب الكامل لكريات الدم الحمراء في الآبار. يتم توفير الضوابط التالية للتفاعل: 1) مصل الاختبار بتخفيف 1:10 في حجم 0.5 مل + 1 قطرة من 2.5 ٪ معلق من كريات الدم الحمراء غير الحساسة ؛ 2) سائل مخفف بحجم 0.5 مل + 1 قطرة من 2.5 ٪ معلق من كريات الدم الحمراء غير الحساسة ؛ 3) سائل مخفف بحجم 0.5 مل + 1 قطرة 2.5٪ معلق من كريات الدم الحمراء المحسّسة.

يجب أن تكون جميع الضوابط سلبية بشكل واضح.

محاسبة وتقييم RPGA. يتم تقييم التفاعل وفقًا للمخطط التالي:

1) رد فعل إيجابي حاد (++++) - تسقط كريات الدم الحمراء في قاع الحفرة في طبقة موحدة على شكل "مظلة" ، والتي غالبًا ما يكون لها حواف متعرجة ؛

2) رد فعل إيجابي (+++) - خلايا الدم الحمراء تغطي ما لا يقل عن ثلثي قاع البئر ؛

3) رد فعل إيجابي ضعيف (++) - التراص صغير ويقع في وسط الحفرة ؛

4) تفاعل مشكوك فيه (+) - توجد حبيبات منفصلة من التراص حول رواسب كرات الدم الحمراء في مركز الحفرة ؛

5) سالب (-) - في الجزء السفلي من الحفرة ، تستقر كريات الدم الحمراء على شكل "زر" أو حلقة صغيرة ذات حواف ناعمة ومحددة بشكل حاد.

يتم أخذ عيار المصل في الاعتبار وفقًا للتخفيف الأخير للمصل ، والذي أعطى تفاعلًا واضحًا تمامًا (ثلاث إيجابيات على الأقل).

يعتبر التخفيف بنسبة 1: 100 وما فوق عيارًا تشخيصيًا ، ومع ذلك ، كما في حالة التهاب المفاصل الروماتويدي ، من الضروري مراقبة زيادته.

إن RPHA في التولاريميا محدد تمامًا ويظهر بعض التفاعلات المتصالبة فقط مع مصل الحمى المالطية. تشخيص متباينممكن من خلال ارتفاع التتر في RPHA ، والتي تكون أعلى بشكل ملحوظ مع مستضد متماثل.

تقنية لضبط RPGA بأحجام دقيقة.

يمكن إجراء RPGA في أحجام ميكروية باستخدام جهاز ميكروتر من نوع Takachi (أو ألواح ميكروترية مستديرة القاع مع ميكروبيتيز) ، مما يسمح بمعايرة المواد بأحجام 25 ميكرولتر و 50 ميكرولتر. تقنية إعداد التفاعلات ، تسلسل جميع العمليات هو نفسه كما في الدراسة في ألواح البوليسترين. ومع ذلك ، يجب ألا يغيب عن البال أن حساسية الطريقة الدقيقة عادة ما تكون تخفيفًا واحدًا (أي

2 مرات) أقل من طريقة الماكرو.

لإعداد التفاعل في ميكروتر ، يتم إدخال سائل مخفف بحجم 50 ميكرولتر في كل بئر باستخدام ماصة قطارة. ثم ، باستخدام أجهزة معايرة برأس 50 ميكرولتر ، يتم أخذ مصل الاختبار عن طريق غمر الرأس فيه.

تأكد من أن السائل قد ملأ رأس جهاز المعايرة. انقل جهاز المعايرة بالمصل إلى البئر الأول ، وحمله في وضع رأسي ، وقم بعدة حركات دورانية في كلا الاتجاهين. ثم يتم نقل جهاز المعايرة إلى البئر التالي وتكرار المعالجة. يمكن إجراء المعايرة بالتحليل الحجمي في وقت واحد في عدة صفوف. بعد معايرة الصف بأكمله ، يتم غسل جهاز المعايرة بالماء المقطر (مع تغيير جزئين) بواسطة حركات دوارة ، ويتم إزالة الماء من الرأس بمسحة وإحراقه على لهب الموقد.

بعد المعايرة ، أضف 25 ميكرولتر من تشخيص كريات الدم الحمراء إلى الآبار.

يجب أن يكون تركيز التشخيص لـ RPHA في الأحجام الدقيقة 0.5٪ (أي 2.5٪ معلق من كريات الدم الحمراء يخفف 5 مرات). بعد إضافة كريات الدم الحمراء ، يجب اهتزاز الصفائح برفق حتى يتم الحصول على تعليق متجانس. يمكن تسجيل النتائج في غضون 1-1.5 ساعة ، وهي ميزة مهمة لـ RPHA في جهاز ميكروتيتير.

بالإضافة إلى ذلك ، تتطلب هذه التقنية كمية صغيرة من جميع مكونات التفاعل وأمصال الاختبار.

يتم أخذ التفاعل في الاعتبار وفقًا للمخطط التالي:

1) "+" - التراص الدموي الكامل ، حيث تسقط كريات الدم الحمراء في قاع الحفرة في طبقة موحدة على شكل "مظلة" ، تحتل ثلثي القاع على الأقل ؛

2) "+ -" - التراص الدموي الجزئي ، حيث تسقط كريات الدم الحمراء إلى الأسفل على شكل حلقة فضفاضة ذات حجم صغير ؛

3) "-" - غياب التراص الدموي ، عندما تسقط كريات الدم الحمراء إلى الأسفل على شكل زر صغير أو حلقة ذات حافة متساوية.

يمكن التحقق من خصوصية النتيجة الإيجابية التي تم الحصول عليها في RPHA باستخدام تفاعل ثلاثي المكونات - تفاعل تثبيط التراص الدموي السلبي (RPHA).

تقنية لضبط RTPGA.

يستخدم هذا التفاعل لتأكيد خصوصية نتيجة RPHA الإيجابية عندما تكون مشكوك فيها أو ذات أهمية وبائية معينة. تتكون آلية التفاعل من تثبيط محدد للتراص الدموي عند إضافة تعليق لبكتيريا التولاريميا المقتولة إلى مصل الاختبار. تتفاعل ثلاثة مكونات في التفاعل: المصل المختبَر ومستضد التولاريميا النوعي وتشخيص كريات الدم الحمراء المستضدي RTPHA توضع عادةً في صف من 7-8 آبار.

يُنصح بتثبيت RPGA ثانٍ بالتوازي مع RTPHA. يسكب 0.25 مل من السائل المخفف في صفين من الآبار ، ثم يضاف مصل الاختبار بحجم 0.25 مل إلى الآبار الأولى من كلا الصفين ويتم معايرته ، ويتم الحصول على سلسلتين متطابقتين من التخفيفات المصلية. أضف 0.25 مل من السائل المخفف إلى جميع آبار الصف الثاني ، و 0.25 مل من بكتيريا التولاريميا المعلقة إلى آبار الصف الأول.

يستخدم تشخيص التولاريميا (يحتوي على 25 مليار بكتيريا تولاريميا في 1 مل) ، مخفف مسبقًا 50 مرة.

يحتوي هذا المعلق على 500 مليون بكتيريا في 1 مل أو 125 مليون بحجم 0.25 مل. بعد إضافة المستضد ، تُترك اللوحة لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك تُضاف قطرة واحدة (0.05 مل) من تشخيص خلايا الدم الحمراء إلى جميع الآبار في كلا الصفين ، وتُهتز اللوحة وتُترك على سطح طاولة مستو.

تتم المحاسبة في 2-3 ساعات.

المحاسبة وتقييم RTPHA. إذا كان مصل الاختبار يحتوي على أجسام مضادة محددة لمرض التولاريميا ، فسيتم تحييدها بواسطة المستضد المضاف ولن يحدث التراص الدموي في الصف الأول من الآبار ، أو في حالة وجود عيار مصل مرتفع ، سيتم ملاحظة التراص الدموي في عدد أصغر (بمقدار 2-4) من الآبار مقارنة بالصف مع RPHA. في هذه الحالة ، يتم تأكيد خصوصية النتائج.

إذا لوحظ التراص الدموي في كلا الصفين ، أي تتزامن نتائج RTPHA و RPHA ، وهذا يشير إلى عدم وجود الأجسام المضادة لمرض التولاريميا في المصل الذي تم اختباره. في هذه الحالة ، يتم التعرف على النتيجة الأولية لـ RPHA على أنها غير محددة.

تقنية لضبط RTPGA بأحجام دقيقة. يمكن إجراء RTPHA ، وكذلك RPHA ، في أحجام ميكروية باستخدام جهاز ميكروتيتر من نوع Takachi.

للقيام بذلك ، يتم إدخال 0.25 ميكرولتر من سائل مخفف في آبار الألواح الدقيقة في صفين من 7-8 آبار لكل منهما. ثم ، باستخدام جهاز معايرة ، يتم تسجيل 0.25 ميكرولتر من مصل الاختبار ومعايرته في كلا الصفين. بعد ذلك ، يضاف 25 ميكرولتر من مستضد التولاريميا (تركيز 500 مليون من بكتيريا التولاريميا في 1 مل) إلى كل بئر في الصف الأول ، ويضاف 25 ميكرولتر من السائل المخفف إلى الصف الثاني.

تُترك الألواح لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك يضاف 25 ميكرولتر من تشخيص الطيف الطيفي للمستضد (تركيز 0.5٪) إلى جميع الآبار في كلا الصفين.

يتم أخذ النتائج في الاعتبار وتقييمها بطريقة مشابهة للتفاعل في الأحجام الكبيرة.

تاريخ النشر: 2015/02/03 ؛ قراءة: 3176 | انتهاك حقوق النشر الصفحة

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018. (0.003 ثانية) ...

تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA) هو طريقة لتحديد الفيروس أو الكشف عن الأجسام المضادة للفيروسات في مصل دم المريض ، بناءً على ظاهرة عدم تراص كريات الدم الحمراء بواسطة دواء يحتوي على فيروس في وجود مصل مناعي ضده.

يعتمد تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA) على الحصار ، وقمع المستضدات الفيروسية بواسطة الأجسام المضادة للمصل المناعي ، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص كريات الدم الحمراء.

يستخدم RTGA لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية ، والتي يمكن للعوامل المسببة لها (الأنفلونزا ، والحصبة ، والحصبة الألمانية ، وفيروسات التهاب الدماغ المنقولة بالقراد ، وما إلى ذلك) أن تتراكم كريات الدم الحمراء للحيوانات المختلفة.

آلية. يتم إجراء تصنيف الفيروس في تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA) مع مجموعة من الأمصال الخاصة بالنوع. تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار في حالة عدم وجود تراص دموي.

يمكن تمييز الأنواع الفرعية لفيروس A مع مستضدات H0N1 و H1N1 و H2N2 و H3N2 وغيرها في RTGA بمجموعة من الأمصال المتماثلة من النوع المحدد.

تفاعل مكمل ملزم. آلية. عناصر. تطبيق

تفاعل الارتباط التكميلي (CSC) هو أنه عندما تتطابق المستضدات والأجسام المضادة مع بعضها البعض ، فإنها تشكل معقدًا مناعيًا ، والذي يرتبط به المكمل (C) من خلال جزء Fc من الأجسام المضادة ، أي أن المكمل مرتبط بجسم مضاد لمولد الضد مركب. إذا لم يتم تكوين معقد الأجسام المضادة للمستضد ، فسيظل المكمل مجانيًا.

التفاعل المحدد بين AG و AT مصحوب بامتصاص (ربط) للمكمل. نظرًا لأن عملية الربط التكميلي لا تظهر نفسها بصريًا ، اقترح J. Bordet و O. Zhangu استخدام نظام الانحلالي (كريات الدم الحمراء في الأغنام + مصل الانحلالي) كمؤشر ، والذي يوضح ما إذا كان المكمل ثابتًا بواسطة مجمع AG-AT. إذا كان AG و AT يتوافقان مع بعضهما البعض ، أي ، يتم تكوين مركب مناعي ، فإن المكمل مرتبط بهذا المركب ولا يحدث انحلال الدم. إذا كان AT لا يتوافق مع AH ، فلن يتشكل المجمع والمكمل ، بينما يظل حراً ، يتصل بالنظام الثاني ويسبب انحلال الدم.

عناصر. اختبار تثبيت المكمل (CSC) هو تفاعل مصلي معقد. لتنفيذه ، هناك حاجة إلى 5 مكونات ، وهي: AG ، AT والمكمل (النظام الأول) ، كريات الدم الحمراء في الأغنام والمصل الانحلالي (النظام الثاني).

يمكن أن يكون مستضد الخلايا الجذعية السرطانية عبارة عن مزارع للعديد من الكائنات الحية الدقيقة المقتولة ، ومحللاتها ، ومكونات البكتيريا ، والأعضاء الطبيعية المعدلة مرضيًا ، ودهون الأنسجة ، والفيروسات والمواد المحتوية على فيروسات.

يستخدم مصل خنزير غينيا الطازج أو الجاف كمكمل.

آلية. يتم تنفيذ RSK على مرحلتين: المرحلة الأولى - حضانة خليط يحتوي على ثلاثة مكونات مستضد + جسم مضاد + مكمل ؛ المرحلة الثانية (المؤشر) - الكشف عن المكمل الحر في الخليط عن طريق إضافة نظام انحلالي يتكون من كريات الدم الحمراء في الأغنام ومصل انحلالي يحتوي على أجسام مضادة لها. في المرحلة الأولى من التفاعل ، عندما يتشكل مركب المستضد والجسم المضاد ، يرتبط المكمل به ، ثم في المرحلة الثانية لن يحدث انحلال الدم في كريات الدم الحمراء المحسوسة بالأجسام المضادة ؛ رد الفعل إيجابي. إذا كان المستضد والجسم المضاد لا يتوافقان مع بعضهما البعض (لا يوجد مستضد أو جسم مضاد في عينة الاختبار) ، فإن المكمل يظل حراً وفي المرحلة الثانية سينضم إلى معقد الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء ، مما يتسبب في انحلال الدم ؛ رد الفعل سلبي.

تطبيق. يستخدم RSK لتشخيص العديد من الأمراض المعدية ، وخاصة مرض الزهري (تفاعل واسرمان).

المرحلة الصلبة إليسا- أحد أشكال الاختبار ، عندما يتم امتصاص أحد مكونات الاستجابة المناعية (مستضد أو جسم مضاد) على مادة حاملة صلبة ، على سبيل المثال ، في آبار ألواح البوليسترين. يتم الكشف عن المكونات عن طريق إضافة الأجسام المضادة أو المستضدات المسمى. إذا كانت النتيجة موجبة ، يتغير لون الكروموجين. في كل مرة بعد إضافة المكون التالي ، تتم إزالة الكواشف غير المربوطة من الآبار عن طريق الغسيل ،

I. عند تحديد الأجسام المضادة (الشكل الأيسر) ، يتم إضافة مصل دم المريض ، ومصل مضاد الغلوبولين المسمى بإنزيم ، وركيزة / كروموجين للإنزيم بشكل تسلسلي إلى آبار الألواح التي تحتوي على مستضد ممتص.

ثانيًا. عند تحديد المستضد (الشكل الأيمن) ، يتم إدخال المستضد في الآبار مع الأجسام المضادة الممتصة (على سبيل المثال ، مصل الدم مع المستضد المطلوب) ، والمصل التشخيصي ضده والأجسام المضادة الثانوية (ضد المصل التشخيصي) المسمى بالإنزيم المضافة ، ثم الركيزة / الكروموجين للإنزيم.

إليسا التنافسيةلتحديد المستضدات: يتنافس المستضد المستهدف والمستضد المسمى بالإنزيم مع بعضهما البعض لربط كمية محدودة من الأجسام المضادة للمصل المناعي.

اختبار آخر هو ELISA التنافسي لتحديد الأجسام المضادة: تتنافس الأجسام المضادة المستهدفة والأجسام المضادة التي تحمل علامات الإنزيم مع بعضها البعض على المستضدات الممتصة على المرحلة الصلبة.

مناعي- طريقة حساسة للغاية للكشف عن البروتينات تعتمد على مزيج من الرحلان الكهربائي و ELISA أو RIA. يُستخدم التجلط المناعي كطريقة تشخيصية لعدوى فيروس العوز المناعي البشري ، إلخ.

يتم فصل المستضدات الممرضة عن طريق الرحلان الكهربائي في هلام بولي أكريلاميد ، ثم يتم نقلها من الجل إلى الورق المنشط أو غشاء النيتروسليلوز ويتم تطويرها باستخدام ELISA. الشركات تنتج مثل هذه الشرائط المبيضة للمستضد. يتم وضع مصل المريض على هذه الشرائط. . ثم ، بعد الحضانة ، يتم غسل الأجسام المضادة غير المقيدة للمريض وتطبيق المصل ضد الغلوبولين المناعي البشري المسمى بالإنزيم . تم الكشف عن المركب المتكون على الشريط [مستضد + جسم مضاد للمريض + جسم مضاد ضد Ig البشري] عن طريق إضافة ركيزة صبغية تغير لونها تحت تأثير إنزيم.