Sifilis je zarazna bolest uzrokovana spirohetom Treponema pallidum, sklona progresiji hronični tok, s jasnom periodizacijom kliničkih simptoma.

Prevladavanje spolnog prijenosa putem kontakta i transplacentarnog stavlja ovu bolest u niz spolno prenosivih bolesti (SPB, SPI). Osim ovih metoda prijenosa infekcije, posebnu ulogu igra i artefaktni put (od latinskog "artificio" - umjetno stvoren).

Tipično je za medicinske ustanove, uglavnom se provodi u bolničkom okruženju. Do infekcije dolazi tijekom transfuzije krvi, raznih kirurških operacija, invazivnih dijagnostičkih metoda.

Unatoč karanteni darovane krvi, problem otkrivanja sifilisa kod davatelja u različitim stadijima bolesti i dalje je aktuelan.

Zbog toga dijagnostičke mjere kod sifilisa zahtijevaju standardizaciju, uvođenje novih osjetljivih i informativnih metoda identifikacije, kao i smanjenje grešaka i pogrešno tumačenje rezultata ispitivanja.

Pokazi sve

1. Klasifikacija metoda laboratorijske dijagnostike

Dijagnoza sifilisa ima neke posebnosti i razlikuje se od dijagnoze drugih bakterijskih infekcija. Složena struktura i antigena svojstva blijede treponeme uzrokuju pogreške u tumačenju rezultata seroloških reakcija.

Test krvi za sifilis nudi se 3 glavne grupe pacijenata:

1. 1 Skrining i klinički pregled populacijskih grupa (uključujući trudnoću, registraciju u prenatalnim klinikama, zapošljavanje i registraciju zdravstvene knjižice itd.).
2. 2 Skrining u rizičnim grupama (nezaštićen polni odnos sa osobom zaraženom sifilisom, osobe nakon prisilnog seksa, zaražene HIV-om itd.).
3. 3 Pojedinci sa simptomima ili sumnjom na sifilitičku infekciju.

Sve laboratorijske metode uslovno se dijele na direktne i indirektne.

1.1. Direktne metode

1. 1 Identifikacija Treponema pallidum u tamnom polju (mikroskopija tamnog polja).
2. 2 Infekcija pokusnih životinja (uzgoj u laboratorijskim životinjama).
3. 3 PCR (lančana reakcija polimeraze).
4. 4 DNK sonda ili hibridizacija nukleinske kiseline.

1.2. Indirektne metode

Serološki testovi su metode laboratorijska dijagnostika, na osnovu detekcije antitijela (skraćeno AT) na antigene blijede treponeme (skraćeno AH). Oni su neophodni za potvrdu dijagnoze.

1. 1 Netreponemalni testovi:
   • Wassermanova reakcija (RSK);
   • Reakcija mikroprecipitacije (MR, RMP) i njeni analozi, koji su dani u nastavku;
   • Rapid Plasma Reagin Test (RPR, RPR);
   • Toluidin test crvenog seruma (TRUST);
   • Netreponemalni test Laboratorije za istraživanje polno prenosivih bolesti - VDRL.
2. 2 Treponemalna testa:
   • P -imobilizacija Treponema pallidum - RIBT / RIT;
   • P-imunofluorescencije-RIF, FTA (razblaživanje seruma RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • P-i pasivne hemaglutinacije (RPHA, TRPGA, TPHA);
   • Enzimski imunosorbentni test (ELISA, EIA);
   • Imunobloting.



Slika 1 - Algoritam za serodijagnozu sifilisa

1.3. Histomorfološke metode

Ove se metode svode na identificiranje značajki histomorfologije sifilitičkih manifestacija. Pažnja se posvećuje zamršenosti strukture tvrdog šankra. Međutim, diferencijalna dijagnoza infekcije pomoću histologije vrlo je teška. Histomorfologija se koristi s drugim laboratorijskim i kliničkim ispitivanjima.

2. Mikroskopija Treponema pallidum u tamnom polju

Ova metoda temelji se na izravnoj detekciji blijede treponeme u ispitivanom materijalu pomoću mikroskopa i posebnih uređaja (najčešće iscjedak erozija i čireva, rjeđe cerebrospinalna tekućina i druge podloge).

Uz pomoć skarifikacije, struganja, cijeđenja od erozija i ulcerativnih oštećenja dobiva se eksudat, a zatim se pripremljeni pripravak pregleda u mikroskopu.

Obično se blijedi treponemi otkrivaju u pripravku dobivenom iz šankre, iz žarišta sekundarnog svježeg, sekundarno rekurentnog sifilisa, kao i točkastih limfnih čvorova, posteljice.

Zasnovana na fenomenu sjaja malih čestica u tamnom polju pri udarcu zrake svjetlosti (Tyndallov fenomen), metoda vam savršeno omogućuje razlikovanje uzročnika sifilisa od drugih treponema na temelju morfoloških razlika i razlika u načine kretanja bakterije.

Za mikroskopiranje se koristi poseban kondenzator tamnog polja odgovarajuće optičke rezolucije. Pripravak se dobiva metodom zdrobljenih kapi (kapljica materijala nanosi se na čisti odmašćen stakleni klizač i prekriva vrlo tankim pokrovnim staklom).

Ulje za uranjanje kaplje na pokrovno staklo. Okretanjem cijevi i okretanjem povećala podešava se željeno osvjetljenje.

U tamnom polju mikroskopa nalaze se krvne ćelije, epitelne ćelije i uzročnik sifilisa. Treponema pallidum izgleda kao spirala, vrlo tanka, ispušta srebrnastu boju, s glatkim pokretima.



Slika 2 - Mikroskopija tamnog polja kao način vizualizacije blijede treponeme u ispitnom materijalu. Izvor ilustracije - CDC

Treponema pallidum mora se razlikovati od ostalih treponema, uključujući Tr. refringens, koji se može naći u orofarinksu i na sluznici genitalija. Ova bakterija čini kaotične pokrete, ima široke i asimetrične, prilično grube uvojke. Osim toga, Treponema pallidum razlikuje se od Tr. Microdentium, Tr. Buccalis i Tr. vincenti.

Vizualizacija bakterija u tamnom polju ponekad je dopunjena fluorescentnim odgovorom. U tu svrhu, prirodnom materijalu dodaju se anti-treponemalna antitijela označena fluorescentnom bojom. Time se formira kompleks koji se naziva antigen-antitijelo (skraćeno AG-AT), a koji je predmet istraživanja fluorescentnim mikroskopom.

3. Metoda polimerazne lančane reakcije (PCR)

PCR, razvijen 1991. godine za otkrivanje molekula dezoksiribonukleinske kiseline (DNA) blijedog treponema, visoko je osjetljiv i specifičan, omogućava vam identifikaciju fragmenata DNK patogena.

Ova analiza temelji se na kopiranju kratkih dijelova DNK pallidum spirohete, koja zadovoljava navedene parametre i prisutna je u uzorku. Sve se to radi in vitro. Reakcija se provodi u uređaju - pojačalu, koje omogućuje periodizaciju temperaturnih ciklusa. Dolazi do hlađenja, nakon čega slijedi zagrijavanje cijevi s greškom od 0,1˚S.

Šablon DNA se zagrijava 2 minute na temperaturi od 92-98 ° C (maksimalna temperatura se koristi ako je polimeraza termostabilna). Prilikom zagrijavanja, niti DNK se razilaze zbog raspada vodikovih veza između njih. U koraku žarenja, reakcijska temperatura se smanjuje kako bi se prajmer vezao za jednolančani šablon.

Žarenje traje oko 30 sekundi, za to vrijeme se sintetizira stotine nukleotida. Novo sintetizirani molekuli kopiraju se polimerazom, što rezultira umnožavanjem specifičnih fragmenata deoksiribonukleinske kiseline. Naknadno otkrivanje fragmenata provodi se elektroforezom u agar gelu.

PCR dijagnostika sifilisa još je eksperimentalne prirode, ali je opravdana kada se otkrije kongenitalna infekcija, u teškim dijagnostičkim slučajevima ili s minimalnim sadržajem blijedih treponema u ispitivanom materijalu.

4. Hibridizacija DNK

Hibridizacija DNA se izvodi in vitro i temelji se na potpunoj ili djelomičnoj kombinaciji dvije jednolančane molekule DNK u jednu molekulu. U slučaju potpunog podudaranja komplementarnih fragmenata, sjedinjenje je jednostavno. Ako je komplementarno podudaranje djelomično, ujedinjenje lanaca DNK je sporo. Na osnovu vremena fuzije niti, može se procijeniti stepen komplementarnosti.

Kada se DNK zagrije u puferskoj otopini, vodikove veze se razbijaju dušikovim bazama, koje su komplementarne, pa se lanci DNK razilaze. Zatim se dobiva pripravak iz dvije denaturirane deoksiribonukleinske kiseline. Nakon hlađenja, jednolančane regije se renaturiraju. Formira se takozvani DNK hibrid.

Ova metoda omogućuje procjenu i analizu brzine žarenja, uzimajući u obzir posebnosti (sličnosti i razlike) DNK između vrsta ili unutar vrste.

Upotreba DNK sonde sastoji se u hibridizaciji obilježenog fragmenta DNK sa specifičnom DNK regijom za identifikaciju komplementarnih nukleotidnih sekvenci. Za označavanje sonde koristi se grupa nezasićenih atoma (kromofori) ili radioaktivnih izotopa.

DNK sonda koristi se za heterogenu i homogenu detekciju nukleinskih kiselina. Uloga sonde je da identificira područja na kojima je došlo do fuzije mete i sonde. Detekcija u homogenom sistemu ima prednost jer vam omogućuje praćenje hibridizacije molekula DNA u stvarnom vremenu.

Suština metode svodi se na denaturaciju i renaturaciju DNK (ponovno ujedinjenje lanaca DNK). Proces renaturacije nukleinske kiseline i DNK sonde završava formiranjem "hibrida".

Specifične sekvence nukleinskih kiselina hibridiziraju se s DNK sondom i na taj način se identificiraju i omogućuju procjenu količine DNK u ispitivanom materijalu.

5. Infekcija laboratorijskih životinja

Visoka osjetljivost kunića na Treponema pallidum (oko 99,9%) omogućuje im upotrebu u dijagnostici sifilitične infekcije.

Infekcija kunića provodi se u istraživačkim centrima i "zlatni je standard" za procjenu osjetljivosti drugih metoda.

Vratimo se treponemalnim i netreponemalnim testovima, jer se oni najčešće koriste. Razmotrimo njihove prednosti i nedostatke, kao i greške u tumačenju rezultata.

6. Netreponemalni testovi

Ovo su testovi definicije IgG antitela i IgM u standardizirani kardiolipinski antigen. Njihov značajan nedostatak je relativno niska specifičnost.

Niski troškovi i jednostavnost izvođenja čine ove testove kvalifikacijskim dijagnostičkim testovima neophodnim za postavljanje preliminarne dijagnoze i skrining u populaciji.

To su netreponemalni testovi koji se polažu prilikom registracije medicinske knjižice, prijavljivanja za posao, registracije u predporođajnoj klinici.

Nedostaci:

1. 1 Minimalna osjetljivost u stadiju primarnog sifilisa je 70%;
2. 2 Minimalna osjetljivost u stadijumu kasnog sifilisa - 30%;
3. 3 Mogućnost lažno negativnih i lažno pozitivnih rezultata;
4. 4 Složenost implementacije RSK.

Prednosti:

1. 1 Relativno niski troškovi testne proizvodnje;
2. 2 Brzi odgovor;
3. 3 Mogućnost njihove upotrebe za skrining.

Dobivanje lažno pozitivnih ili slabo pozitivnih uzoraka moguće je u sljedećim slučajevima:

1. 1 Kršenje tehnologije izvođenja pri blokiranju kompleksa AG-AT.
2. 2 Prisutnost autoimunih bolesti kod pacijenata (reumatoidni artritis, reuma, sklerodermija, sistemski eritematozni lupus, sarkoidoza itd.).
3. 3 Maligne neoplazme.
4. 4 Virusne i bakterijske infekcije.
5. 5 endokrinih bolesti ( autoimuni tiroiditis, dijabetes).
6. 6 Trudnoća.
7. 7 Konzumiranje alkohola.
8. 8 Unos masne hrane.
9. 9 Senilna dob.

Kao što vidite sa popisa, postoji dovoljno razloga za pogrešan rezultat. Stoga treba biti jako oprezan s tim. Uz RSK razmotrimo još dva uzorka. Ovo je reakcija mikroprecipitacije i VDLR (njegova modifikacija).

7. Reakcija vezivnog komplementa (RSK, Wasserman, RW)

Ovo je test zasnovan na sposobnosti komplementa da se veže za AG-AT komplekse. Formirani kompleks se identificira pomoću hemolitičkog sistema. Kardiolipinski antigen značajno povećava osjetljivost uzorka.

Kolmerova reakcija je također osjetljiva, a sastoji se u izvođenju pri različitim temperaturnim uvjetima. Dakle, prva faza Kolmerove reakcije odvija se na temperaturi od 20˚C pola sata, druga faza na temperaturi od 4-8˚C 20 sati. Za to vrijeme dolazi do vezivanja komplementa.

Prilikom izvođenja RSK -a moguće je postići oštro pozitivne rezultate. Razlog je vjerojatno visoki titar antitijela u nerazrijeđenom serumu. U ovom slučaju uzorci se uzimaju sa smanjenim dozama.

Za razlikovanje stadija sifilisa i procjenu učinkovitosti liječenja protiv sifilita, određuje se količina AT u serumu.

Pozitivnost uzorka procjenjuje se ukrštanjem, a razrjeđivanje seruma također je naznačeno u Wassermanovoj, Colmerovoj i Kannovoj reakciji.

8. Reakcija mikroprecipitacije

Budući da je mukotrpnost u obavljanju gore navedenih testova velika, razvijena je ubrzana metoda za serodijagnostiku sifilisa za širinu obuhvata medicinskih pregleda različitih grupa stanovništva, takozvana ekspresna metoda - reakcija mikroprecipitacije (skraćeno kao MR, RMP).

Izvodi se s kardiolipinskim antigenom i pomoćnim tvarima. Njegova prednost je prikupljanje periferne krvi za istraživanje. To značajno ubrzava i samu tehniku ​​i rad laboratorijskih tehničara.



Slika 2 - Reakcija mikrotaloženja (shema)

Za MRI je potrebna plazma ili inaktivirani krvni serum pacijenta (oni sadrže antitijela). Zatim se plazma stavlja u označene jažice. Zatim se u materijal za ispitivanje dodaje kap kardiolipinskog antigena, pomiješa i protrese. Kao rezultat toga, u serumu zaražene osobe pojavljuju se karakteristične ljuspice, različitog intenziteta.

Ovo je test kvaliteta. Kvantifikacija koristi 10 razrjeđenja seruma smještenih u 10 odgovarajuće označenih jažica. Kod kvalitativnog MR -a odgovor je označen u obliku križa (plus) ili minus, kod kvantitativnog je označen titar antitijela (1: 2, 1: 4, itd.).

Prisustvo pahuljica smatra se pozitivnim ili slabo pozitivnim odgovorom. Pojava flokulata je moguća čak i u odsustvu bolesti, stoga se konačna procjena dobivenog rezultata provodi nakon kontrolne studije ili drugih reakcija (RIBT, RIF, ELISA, RPGA).

9.VDRL

Metoda postavljanja reakcije s lipoidnim antigenom (AG), koju preporučuje Svjetska zdravstvena organizacija, s pravom se smatra najboljom među ostalim standardnim netreponemalnim testovima. Razvijeno u SAD -u, Georgia u laboratorijama za istraživanje venskih bolesti.

Skraćenica ustanove služila je kao naziv uzorka - VDRL. VDRL je modifikacija MP -a. Serum pacijenta sa sifilisom se inaktivira i stavlja na stakleno staklo. Korišteni antigen sastoji se od kardiolipina, kolesterola i lecitina u različitim postocima. Odgovor se registruje gotovo odmah.

Do izrazite flokulacije dolazi u prisutnosti antitijela u serumu. Serum postaje reaktivan 4 sedmice nakon infekcije. Da bi se procijenila količina antitijela, serum se prethodno razrjeđuje eksponencijalno.

VDRL prednosti:

1. 1 relativno visoka osjetljivost;
2. 2 relativno visoka specifičnost;
3. 3 jednostavnost implementacije;
4. 4 niska cijena reagensa;
5. 5 dobijanje brzog odgovora.

Nedostatak VDRL -a je relativno visoka frekvencija lažno pozitivni rezultati.

Njihovi uzroci su iste gore navedene bolesti.

Treponemalni testovi se izvode sa specifičnim antigenima Treponema pallidum. Oni su neophodni i obavezni za uspostavljanje konačna dijagnoza... Ovo je reakcija imunofluorescencije (RIF), reakcije indirektne hemaglutinacije (RPHA), enzimski imunosorbentni test (ELISA) itd.

Nakon pozitivnog rezultata netreponemalnog testa (RPR, MP, VDRL), uvijek se trebaju provesti treponemalni testovi (češće kombinacija - RPHA, ELISA, RIF).

Treponemalni testovi su teži za izvođenje od brzih testova i skupi su Novac.

10. RIF

Ova reakcija (skraćeno RIF) koristi se za dijagnosticiranje sifilisa, uključujući latentne oblike, te ponovnu provjeru pozitivnih i lažno pozitivnih uzoraka.

RIF je zasnovan na sjaju označenih antitela u kombinaciji sa kompleksom antigen-antitelo pod kvarcnom lampom. Metoda se počela primjenjivati ​​60 -ih godina i odlikovala se lakoćom implementacije i visokom specifičnošću (koja je malo inferiorna u odnosu na RIBT).

Ima nekoliko modifikacija: RIF-10, RIF-200 i RIF-abs.

RIF je najosjetljiviji kada se razrijedi 10 puta, a ostali su specifičniji. RIF se provodi u dvije faze. Pacijentov krvni serum dodaje se hipertenziji. Formira se složeni AG-AT, koji se istražuje u sljedećoj fazi. Zatim se mikroskopom identificira kompleks označen fluoohromom. Ako se ne uoči luminiscencija, to ukazuje na odsustvo specifičnih antitijela u krvnom serumu.

RIF-200 je najvredniji od svih razrjeđenja. Metoda je namijenjena dijagnostici različite forme sifilis, posebno latentni sifilis i unakrsna provjera pozitivnih uzoraka.

11. RIBT

Reakcija imobilizacije blijede treponeme (skraćeno RIBT, RIT) jedan je od najtežih seroloških testova koji zahtijevaju značajne napore i financijske troškove. RIBT se koristi sve rjeđe, ali njegova važnost ostaje u dijagnostici latentnog sifilisa.

Od velikog je značaja za prepoznavanje lažno pozitivnih rezultata kod trudnica, a temelji se na imobilizaciji bakterija u prisutnosti imobilizina - kasnih antitijela.

Rezultat se procjenjuje na postotku (%) imobiliziranih treponema pomoću posebne tablice:

1. 1 Od 0 do 20 - negativan uzorak.
2. 2 Od 21 do 50 - slabo pozitivan test.
3. 3 Od 50 do 100 - pozitivna reakcija.

Lažno pozitivni rezultati mogući su i s RIBT -om. Dakle, netočan odgovor moguć je kod infekcije tropskom trepanematozom, kao i kod tuberkuloze, ciroze jetre, sarkoidoze i starijih pacijenata.

12. RPGA

Ovaj test krvi na sifilis naziva se reakcija pasivne hemaglutinacije (skraćeno kao krv za RPHA, TPHA).

Antigen za RPHA priprema se od ovčjih eritrocita obloženih fragmentima blijede treponeme (dobivenih od zaraženih zečeva (vidi sliku 4)). Analiza koristi pacijentovu vensku krv (plazma ili inaktivirani serum).

Kada se antigen doda u serum pacijenta sa sifilisom, nastaje kompleks AG-AT koji dovodi do aglutinacije eritrocita. aglutinaciju subjektivno određuje laboratorijski asistent.



Slika 3 - Shema RPHA (reakcija pasivne hemaglutinacije)

Uzorak se ocjenjuje kao pozitivan kada se pojave aglutinati ujednačene ružičaste boje. Crveno bojenje taloga ukazuje na taloženje eritrocita. RPHA je vrlo osjetljiva i vrlo specifična.

12.1. Reakcija mikrohemaglutinacije

To je pojednostavljena verzija RPGA -e. Razlikuje se od gore opisanog uzorka po tome što ima manje antigena, razrjeđivača i krvnog seruma za provođenje reakcije. 4 sata nakon inkubacije seruma, uzorak se može ocijeniti. Koristi se za skrining i masovne testove na sifilis.

13. Imunološki test enzima

Enzimski imunosorbentni test (skraćeno ELISA) temelji se na specifičnoj reakciji antigen-antitijelo. U jažice se unosi biološki materijal (pacijentov krvni serum, cerebrospinalna tekućina) na čijoj se tvrdoj površini fiksiraju antigeni treponema pallidum. Materijal za ispitivanje se inkubira, zatim se ispiru antitijela koja se ne vezuju za antigene (vidi sliku 5).

Rezultirajući kompleks se identificira u fazi fermentacije pomoću imunološkog seruma obilježenog enzimom. U kemijskoj reakciji, enzim boji nastale komplekse. Intenzitet bojenja ovisi o količini specifičnih antitijela u krvi pacijenta i bilježi se spektrofotometrom.



Slika 4 - Shema ELISA (enzimski imunosorbentni test)

ELISA osjetljivost je veća od 95%. Metoda se koristi u automatiziranom načinu za proučavanje određenih grupa stanovništva: donatora, trudnica i drugih, radi pojašnjenja dijagnoze pozitivnim i lažno pozitivnim netreponemalnim testovima.

14. Imunobloting

Imunobloting je visoko osjetljiva metoda, modifikacija jednostavnog ELISA testa. Reakcija se temelji na elektroforezi s odvajanjem antigena blijedih treponema.

Odvojene imunodeterminante se prenose na nitrocelulozni papir i razvijaju u ELISA -i. Zatim se serum inkubira i nevezana antitijela isperu. Dobiveni materijal se tretira enzimski obilježenim imunoglobulinima (IgM ili IgG).

15. Klinička procjena rezultata laboratorijske dijagnostike sifilisa

U donjoj tablici 1 prikazani su mogući rezultati ispitivanja i njihovo tumačenje. Kao što možete vidjeti u tablici, sveobuhvatna procjena testova od primarne je važnosti za dekodiranje.



Tablica 1 - Tumačenje rezultata seroloških reakcija (krvni testovi na sifilis). Za pregled kliknite na tabelu

Procjena reaktivnosti testova također se provodi pomoću "križa":

1. 1 Maksimalni odziv (jako pozitivan test) označen je sa 4 križa.
2. 2 Pozitivan uzorak označen je s 3 križanja.
3. 3 Slabo pozitivna reakcija označena je s dva križa.
4. 4 Jedan križ označava sumnjiv i negativan rezultat.
5. 5 Negativan odgovor označen je znakom minus.

Problem optimizacije laboratorijske dijagnostike sifilisa nije izgubio svoju važnost do danas. Savremene metode dijagnostika, unatoč želji znanstvenika da dijagnostiku dovedu do najveće moguće osjetljivosti i specifičnosti, zahtijeva kontrolnu provjeru i individualni pristup.

Značajka sifilitične infekcije je fenomen serorezistencije, koji nikada nije dobio naučno objašnjenje. Dijagnoza se postavlja nakon potpunog pregleda pacijenta epidemiološkim, kliničkim, laboratorijskim metodama.

U pozadini ekonomskog i tehničkog razvoja medicine, napredak se primjećuje i u razvoju novih kriterija za dijagnozu sifilisa. Sve će vam to omogućiti brzo, uspješno i precizno liječenje pacijenata.

Punkcija regionalnih limfnih čvorova

Serološka dijagnostika

• Wassermanova reakcija (RV),
• sedimentne reakcije Kahna i Sachs-Vitebsk (citoholne),
• reakcija na staklo (ekspresna metoda),

• reakcija imobilizacije blijedih treponema (RIBT),
• reakcija imunofluorescencije (RIF).

Wassermanova reakcija (RV)

Obično se RV daje s dva ili tri antigena. Najčešće se koriste visoko osjetljivi kardiolipinski antigen (goveđi ekstrakt srca obogaćen kolesterolom i lecitinom) i treponemalni antigen (ultrazvučno tretirana suspenzija anatogenih blijedih treponema iz kulture). Zajedno s reaginima u krvnom serumu pacijenta, ovi antigeni tvore imunološki kompleks sposoban za adsorbiranje i vezivanje komplementa. Za vizualno određivanje formiranog kompleksa (reagin + antigen + komplement) koristi se hemolitički sistem (mješavina ovčjih eritrocita s hemolitičkim serumom). Ako je komplement povezan u prvoj fazi reakcije (reagini + antigen + komplement), ne dolazi do hemolize - eritrociti se talože u lako uočljiv sediment (PB pozitivan). Ako se u fazi 1 komplement ne veže zbog nedostatka reagina u ispitivanom serumu, hemolitički sistem će ga koristiti i doći će do hemolize (PB negativan). Ozbiljnost hemolize u okviru RV -a procjenjuje se po njenim prednostima: potpuno odsustvo hemolize ++++ ili 4+ (RV je oštro pozitivan); jedva započeta hemoliza +++ ili 3+ (PB pozitivan); značajna hemoliza ++ ili 2+ (PB je slabo pozitivan); nerazumljiva slika hemolize ± (PB je sumnjiv); potpuna hemoliza - (Wassermanova reakcija je negativna).

Osim kvalitativne procjene RV -a, postoji i kvantitativna formulacija s različitim razrjeđenjima seruma (1:10, 1:20, 1:80, 1: 160, 1: 320). Titar reagina određen je maksimalnim razrjeđivanjem, koje i dalje daje oštro pozitivan (4+) rezultat. Kvantitativna postavka RV -a važna je za dijagnosticiranje nekih kliničkih oblika sifilitičke infekcije, kao i za praćenje učinkovitosti liječenja. Trenutno se Wassermanova reakcija postavlja s dva antigena (kardiolipinski i treponemalno ozvučeni Reiterov soj). U pravilu, RV postaje pozitivan 5-6 tjedana nakon infekcije u 25-60%pacijenata, u 7-8 sedmica-u 75-96%, u 9-19 sedmica-u 100%, iako u posljednjih godina ponekad prije ili kasnije. Istodobno, titar reagina postupno raste i doseže maksimalnu vrijednost (1: 160-1: 320 i više) u slučaju pojave generaliziranih osipa (sekundarni svježi sifilis). Kada je RV pozitivan, postavlja se dijagnoza primarnog seropozitivnog sifilisa.
Sa sekundarnim svežim i sekundarnog recidivirajućeg sifilisa, RV je pozitivan u 100% pacijenata, ali kod oslabljenih pacijenata sa oslabljenim imunitetom može se primijetiti negativan rezultat. Nakon toga, titar reagina postupno se smanjuje i sa sekundarnim recidivirajućim sifilisom obično ne prelazi 1: 80-1: 120.
Sa tercijarnim sifilisom RV je pozitivan u 65-70% pacijenata i obično postoji nizak titar reagina (1: 20-1: 40). Sa kasnim oblicima sifilisa (sifilis unutrašnjih organa, nervni sistem) pozitivan RV se primjećuje u 50-80% slučajeva. Titar reagina varira od 1: 5 do 1: 320.
Sa latentnim sifilisom pozitivan RV uočen je u 100% pacijenata. Tigar reagina je od 1:80 do 1: 640, a u kasnom latentnom sifilisu od 1:10 do 1:20. Brzo smanjenje titra reagina (do potpune negativnosti) tokom liječenja ukazuje na efikasnost liječenja.

Nedostaci Wassermanove reakcije- nedostatak osjetljivosti (in početna faza primarni sifilis je negativan). Također je negativan u 1/3 pacijenata ako su se ranije liječili antibioticima, u pacijenata s tercijarnim aktivnim sifilisom s lezijama kože i sluznica, osteoartikularnim aparatom, unutarnjim organima, središnjim živčanim sustavom, s kasnim kongenitalni sifilis.
Nedostatak specifičnosti- Wassermanova reakcija može biti pozitivna kod osoba koje prethodno nisu bile bolesne ili imaju sifilis. Lažno pozitivni (nespecifični) rezultati RV -a opažaju se kod pacijenata koji pate od sistemskog eritematoznog lupusa, lepre, malarije, malignih neoplazmi, oštećenja jetre, opsežnog infarkta miokarda i drugih bolesti, a ponekad i kod potpuno zdravih ljudi.
Otkrivena je kratkotrajna lažno pozitivna Wassermanova reakcija kod nekih žena prije ili poslije porođaja, kod ovisnica o drogama, nakon anestezije, uzimanje alkohola. Lažno pozitivan RV je u pravilu slabo izražen, češće s niskim titrom reagina (1: 5-1: 20), pozitivnim (3+) ili slabo pozitivnim (2+). U masovnim serološkim pregledima učestalost lažno pozitivnih rezultata je 0,1-0,15%. Da bi prevladali nedostatak osjetljivosti, oni koriste postavku na hladnom (Collar -ova reakcija), a istovremeno se inscenira s drugim serološkim reakcijama.

Sedimentne reakcije Kahna i Sachs-Vitebskog

Reakcija imobilizacije Treponema pallidum (RIBT)

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Reakcija pasivne hemaglutinacije (RPHA)

Tehnika prikupljanja krvi za serološke testove

Serološka rezistencija

• Istinito(apsolutno, bezuslovno)-potrebno je provesti dodatni anti-sifilitički tretman, u kombinaciji s nespecifičnom terapijom za povećanje imunoloških snaga organizma.
• Relativno-nakon potpunog liječenja, blijedi treponemi stvaraju ciste ili L-oblike, koji su u tijelu u nisko virulentnom stanju i, kao rezultat toga, dodatno liječenje ne mijenja pokazatelje seroloških reakcija, posebno RIF i RIBT.

Pseudootpornost- nakon tretmana, unatoč pozitivnim serološkim reakcijama, blijedi treponema u tijelu nije prisutan. U tijelu nema antigena, ali se nastavlja proizvodnja antitijela koja se bilježe pri postavljanju seroloških reakcija.
Serološka rezistencija može se razviti zbog:

• neadekvatno liječenje bez uzimanja u obzir recepta i stadija bolesti;
• nedovoljna doza, a posebno zbog toga što se ne uzima u obzir tjelesna težina pacijenata;
• kršenje intervala između davanja lijekova;
• očuvanje blijedih treponema u tijelu unatoč punopravnom specifičnom liječenju, zbog njihove rezistencije na penicilin i druge kemoterapijske lijekove u slučaju prisutnosti skrivenih, inkapsuliranih lezija u unutarnjim organima, živčanom sistemu, limfni čvorovi koje su nedostupne za antibakterijski lekovi(često se blijedi treponemi nalaze u tkivima ožiljka mnogo godina nakon završetka terapije, ponekad se blijedi treponemi mogu naći u limfnim čvorovima 3-5 godina nakon antisifilitičke terapije);
• opadanje zaštitne sile s raznim bolestima i intoksikacijama (endokrinopatija, alkoholizam, ovisnost o drogama itd.);
• opće iscrpljivanje (konzumiranje hrane siromašne vitaminima, bjelančevinama, mastima).

• popratne nespecifične bolesti unutrašnjih organa, poremećaji kardiovaskularnog sistema, reuma, disfunkcije endokrinog i nervnog sistema, teške hronične dermatoze, maligne neoplazme;
• lezije nervnog sistema (teška trauma, potres mozga, mentalna trauma);
• trudnoća; kronična intoksikacija alkoholom, nikotinskim drogama; zarazne bolesti(malarija, tuberkuloza, virusni hepatitis, dizenterija, tifus, tifus i povratna groznica).

veličina slova

NALOG Ministarstva zdravlja SSSR-a od 02-09-85 1161 O POBOLJŠANJU SEROLOŠKE DIJAGNOSTIKE SIFILISA (zajedno sa UPUTSTVIMA ZA ... Aktuelno 2018. godine

Način podešavanja RIF - ABS

Test serum

Krv za dobijanje krvnog seruma uzima se iz kubitalne vene u čistu i suhu epruvetu u volumenu od 5 ml i obrađuje na isti način kao i za postavljanje Wassermanove reakcije. Krvni serum se inaktivira jednom na temperaturi od 56 ° 30 minuta. Zbog činjenice da se RIF-abs postavljaju nesterilno, upotreba sterilnog posuđa i poštivanje uvjeta sterilnosti pri skladištenju krvnog seruma nisu potrebni. Važno je samo za duže očuvanje krvnog seruma prije ispitivanja.

Kao antigen, koristi se suspenzija patogenih blijedih treponema Nichols soja iz 7-dnevnog zečjeg orhitisa. Zdravi mužjaci kunića s negativnim rezultatima Wassermanove reakcije i RIT -a inficirani su intratestikularno, a kada se pojavi orhitis, blijedi treponemi se uklanjaju iz testisa na isti način kao u slučaju primanja antigena za RHS. Rezultirajuća suspenzija blijedih treponema izlije se iz komadića testisa u sterilne epruvete s pamučnim čepovima i ostavi u hladnjaku na 4 ° dan jedan dan, nakon čega se odvoji od taloga i pod istim uvjetima cijeli period upotrebe je očuvano.

Prijem i skladištenje antigena zahtijeva poštivanje uvjeta sterilnosti, jer s istim antigenom, reakcija se može postaviti u roku od 2-4 mjeseca. Za antigen treba izabrati suspenziju u kojoj se ne primjećuje aglutinacija treponema i ima ih dovoljan broj. Antigen se može nabaviti u ampulama iz drugih laboratorija. Prije svakog postavljanja reakcije, suspenzija se dobro promiješa i ispita u mikroskopu s kondenzatorom tamnog polja kako bi se odredila njezina gustoća. Za postavljanje RIF-abs-a potrebno je imati suspenziju koja sadrži 40-60 treponema u tamnom vidnom polju, u prisutnosti deblje suspenzije, mora se razrijediti.

Kao sorbent za RIF-abs može se koristiti ultrazvučni treponemalni antigen za RSK, koji proizvodi preduzeće Kaunas za proizvodnju bakterijskih pripravaka Ministarstva zdravstva SSSR-a. To je suspenzija mješavine kultiviranih blijedih sojeva treponema V, VII, VIII, IX i Reiter, uništenih ultrazvukom. Svaka serija sorbenta mora se titrirati prije upotrebe u RIF-ovima u dijagnostičke svrhe.

Titracija sorbenata

Sorbenti se titriraju na krvne serume pacijenata sa sifilisom, dajući oštar (4+) i slabo (2+) pozitivan rezultat u RIF u razrjeđenju 1: 5, kao i na krvne serume osoba bez sifilisa infekcije, što daje negativan rezultat na RIF-5 i nespecifičnu pozitivnost (2+ ili više).

Primjer određivanja titra sorbenta

Cijeli sorbent razrijeđen je fosfatnim puferom, pH = 7,2, 2, 3, 4 puta ili više. Uzmite 3 seruma krvi od pacijenata sa sifilisom, od kojih jedan daje oštro pozitivan (4+) rezultat u RIF -5, 2 - slabo pozitivan (2+) i 5 krvnih seruma od ljudi bez infekcije sifilisom, od kojih 3 daju nespecifične rezultate i RIF-5 (2+ i više). Svi krvni serumi se razrjeđuju 5 puta sorbentom, redom razrijeđuju 2, 3, 4 i više puta fosfatnim puferom. Zatim se u reakciji pregleda krvni serum. Nakon uzimanja u obzir rezultata, odabire se razrjeđivanje sorbenta, u kojem serumi krvi u krvi pacijenata sa sifilisom zadržavaju stupanj pozitivnosti sličan onom koji se dobiva krvnim serumima razrijeđenim fosfatnim puferom i krvnim serumom osoba bez sifilitične infekcije ne emituje luminescenciju. Ovo razrjeđivanje sorbenta je njegov titar.

Titar sorbenta u ovom slučaju bio je razrjeđenje 1: 3, u kojem su svi krvni serumi pacijenata sa sifilisom zadržali stepen pozitivnosti postignut u kontroli, a istovremeno je nespecifična pozitivnost nesifilitičnih krvnih seruma bila pouzdano uklonjeni.

Luminescentni serum protiv vrsta

Za proučavanje humanog seruma u RIF-trbušnjacima potreban je krvni serum označen fluorohromima životinja imuniziranih humanim proteinom seruma. Liofilizirani luminescentni serum otapa se pod uvjetima sterilnosti u destiliranoj vodi u volumenu naznačenom na naljepnici ampule, sipa se u sterilnu epruvetu s gumenim čepom i čuva na 4 ° C 1-2 mjeseca tokom upotrebe.

Na dan reakcije, potrebna količina ovog seruma se razrijedi titrom s destiliranom vodom. Radno razrjeđivanje seruma navedeno na etiketi nije prikladno za postavljanje reakcije u svrhu serodijagnoze sifilisa, pa se titar svake serije mora iznova odrediti.

Tabela N 13

Rezultati titracije sorbenta

Titracija luminescentnog seruma protiv vrsta

Uzmite 5 krvnih seruma kod pacijenata sa sifilisom i 5 krvnih seruma kod zdravih ljudi, razrijedite ih 5 puta sorbentom (uzimajući u obzir njegov titar) i postavite reakciju koristeći u drugoj fazi različita razrjeđenja luminiscentnog seruma protiv humanih serumskih globulina iz serije čiji je titar određen. Treba napomenuti da je titar luminiscentnih seruma koje trenutno proizvodi I.E. NF Gamalei, fluktuira kada je RIF-abs postavljen od 1: 100 do 1: 140. Uzimajući u obzir reakciju, preliminarni titar luminiscentnog seruma treba uzeti u obzir razrjeđivanje, kada se koristi s pozitivnim serumima u krvi, dobrom fluorescencijom treponema je dobijen, a sa negativnom fluorescencijom antigena nije primljen. Veće razrjeđivanje luminiscentnog seruma od titra dovodi do smanjenja osjetljivosti reakcije, a manje razrjeđivanje dovodi do smanjenja specifičnosti. Nakon određivanja preliminarnog titra, treba ga navesti na većem broju pozitivnih i negativnih krvnih seruma. Konačnim titrom može se smatrati onaj koji je testiran na 100 krvnih seruma, a od njih bi najmanje 20 trebalo biti pacijenata sa sifilisom.

Kako bi se spriječilo nicanje nakon razrjeđivanja suhog luminescentnog seruma destiliranom vodom, potrebno mu je dodati mortiolat u količini od 1 volumena njegove otopine 1: 1000 do 9 volumena luminiscentnog seruma. Prilikom uzimanja novih ampula iste serije, titar treba provjeriti i navesti samo na 10 očito pozitivnih i negativnih krvnih seruma.

Primjer za određivanje preliminarnog titra luminiscentnog seruma protiv vrsta

Pripremite 60 preparata, numerisanih od 1 do 60. Uzmite 10 seruma krvi - 5 od pacijenata sa sifilisom, 5 od zdravih ljudi. Svi krvni serumi se razrjeđuju 5 puta sorbentom razrijeđenim u titru.

Na preparate pod brojevima 1-10, 11-20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60, u prvoj fazi reakcije, nanosi se istih 10 seruma krvi razrijeđenih 5 puta sa sorbentom. U II fazi reakcije za 1-10 preparata nanosi se luminescentni serum razrijeđen 1: 100, na 11-20 1: 110, na 21-30-1: 120, na 31-40-1: 130, na 41 -50 - 1: 140, na 51-60 - 1: 150.

RIF-abs tehnika postavljanja

Od antigena se pripravljaju preparati na tankim, dobro odmašćenim staklenim pločicama, na čijoj su poleđini staklorezom označeni krugovi promjera 0,7 cm (10 krugova na 1 staklenom stakalcu). Unutar kruga na staklo se nanosi suspenzija antigena blijedih treponema. Sa zapečaćenim krajem Pasteur pipete, suspenzija se distribuira kružnim pokretima unutar kruga, osuši na zraku i fiksira 10 minuta u kemijski čistom acetonu. Tada su lijekovi numerirani. Inaktivirani serumi krvi za ispitivanje razrjeđuju se 5 puta sorbentom razrijeđenim u titru s puferskom otopinom. Niz epruveta postavljen je u stalak, čiji broj i broj odgovara broju i broju testiranih seruma krvi. Sorbent razrijeđen u titru sipa se u epruvete s pipetom, 0,2 ml, zatim se dodaje 0,05 ml cijelog krvnog seruma i dobro se promiješa. Razrjeđivanje krvnog seruma može se izvesti aparatom Florinsky. Krvni serum razrijeđen sorbentom nanosi se na antigen kako bi ravnomjerno prekrio razmaz, a pripravci se stavljaju u vlažnu komoru, koja se zatvara poklopcem i stavlja u termostat na 37 ° 30 minuta (I. faza reakcija). Nakon prve faze, preparati se pažljivo isperu u 2 porcije fosfatnog pufera, a u drugom dijelu preparati se stave 10 minuta, osuše, nakon čega se ponovo stavljaju u vlažnu komoru, luminiscentni serum razrijeđen titrom je naneti i ostaviti na sobnoj temperaturi 30 minuta (reakcije II faze). Na kraju druge faze, preparati se ispiru fosfatnim puferom, kako je gore opisano, osuše i nanose na površinu razmaza kapljicom ne-luminiscentnog uranjajućeg ulja (dimetil ftalat).

Proučavanje pripravaka vrši se u fluorescentnom mikroskopu sa živo-kvarcnom lampom DRSh-250 sa uronjenim sistemom, okularom 4X ili 5X, filterima SZS-7 ili 14, FS-1. BS-8 i ZhS-18 ili T-2N. Reakcija se uzima u obzir procjenom luminiscencije blijedih treponema. Krvni serum se smatra pozitivnim u RIF-trbušnjacima ako daje sjaj za 4+, 3+ i 2+. Sjajni zeleno-žuti sjaj ima ocjenu 4+, svijetli sjaj 3+, a slab sjaj 2+. Serumi se smatraju negativnim ako daju 1+ sjaj (treponeme u pripravku obojene su intenzivnije od pozadine) ili ga ne daju.

U svakoj postavci RIF-a, moraju se koristiti sljedeće kontrole:

Snažno pozitivna kontrola. Krvni serum pacijenta sa sifilisom, koji daje 4+ sjaj kada se razrijedi 5 puta puferom. Kada se 5 puta razrijedi sa sorbentom, krvni serum ne bi trebao izgubiti stepen pozitivnosti za više od 1+.

Slabo pozitivna kontrola. Cijeli ili razrijeđeni krvni serum pacijenta sa sifilisom, davanje slab stepen luminiscencija antigena za 2+ kada se 5 puta razrijedi puferom. Kada se razrijedi sorbentom, treba sačuvati njegovu pozitivnost.

Nespecifična kontrola. Nesifilitični krvni serum, koji, kad se razrijedi puferom, fluorescira najmanje 2+. Kada se razrijedi sorbentom, njegova se pozitivnost mora ukloniti.

Kontrole antigena, sorbenta, luminiscentnog seruma mogu se postaviti samo kada se koriste nove serije ovih sastojaka.

Način postavljanja RIF-abs-a sa kapilarnom krvlju

Postavljanje RIF-abs-a moguće je ne samo krvnim serumom, već i krvlju uzetom iz prsta. Ova modifikacija RIF-trbušnjaka može se koristiti pri pregledu djece na sifilis, kada je teško dobiti krv iz vene kod odraslih, tijekom masovnog pregleda različitih kontingenata na sifilis.

Prilikom postavljanja RIF-a sa krvlju koriste se isti reakcijski sastojci kao i kod postavljanja RIF-a sa krvnim serumom (antigen, sorbent, luminiscentni serum). Titar luminiscentnog seruma određuje se prema gornjoj shemi, ali kada dođe do reakcije s krvlju. Nakon što se pacijentu probuši prst, krv se za ispitivanje uzima mikropipetom do oznake od 0,1 ml, brzo se upuhuje u epruvetu koja sadrži 0,3 ml destilirane vode, temeljito se pomiješa s pipetom i filtrira kroz papirnati filter navlažen destiliranom vodom . Postavljanje reakcije s razrijeđenom krvlju moguće je i na dan uzimanja, i nakon 1-2 dana, pod uvjetom da se čuva na 4 °.

Neposredno prije započinjanja reakcije, 0,1 ml cijelog sorbenta dodaje se u sve uzorke krvi uključene u reakciju, miješa se s pipetom i mućka, stavlja se u termostat na 37 ° 30 minuta. Zatim se krv tretirana sorbentom nanosi na razmaze antigena i stavlja u vlažnu komoru na 37 ° (1 faza reakcije). Nakon isteka perioda izlaganja, preparati se ispiru u prvom dijelu fosfatnog pufera tako da nema tragova krvi na stakalcima i stavljaju se u drugi dio pufera na 10 minuta. Nakon sušenja razmaza, provodi se druga faza reakcije. U isto vrijeme, na preparate se nanosi luminescentni serum protiv humanih globulina, razrijeđen titrom utvrđenim za ovu modifikaciju RIF -a. Klizači u vlažnoj komori ponovo se stavljaju u termostat na 37 °.

Nakon 30 minuta, preparati se ponovo ispiru u 2 porcije fosfatnog pufera 10 minuta, osuše i montiraju na fluorescentnu mikroskopiju. Proučavanje lijekova i evidentiranje rezultata reakcije provode se na isti način kao i pri postavljanju RIF-a sa krvnim serumom.

Tehnika podešavanja RIF-200

Tehnike postavljanja RIF-abs i RIF-200 su slične. Prilikom postavljanja RIF-200, obrada testiranih krvnih seruma, priprema antigena, priprema anti-vrsta luminiscentnog seruma i njegova titracija izvode se na isti način kao i pri postavljanju RIF-aps. Treba uzeti u obzir samo da se titri luminiscentnog seruma koji se trenutno proizvode u RIF-200 kreću od 1: 20 do 1: 50.

RIF-200 tehnika postavljanja

Testirani krvni serumi razrijeđeni su 200 puta fosfatnim puferom. U tu svrhu, 3 retka epruveta se stavljaju u stalak, čiji broj i numeracija u svakom redu odgovara broju i numeraciji testiranih seruma krvi u radnoj knjižici. U prvi red sipaju se cijeli serum krvi za testiranje, u drugi red se 0,45 ml pufera ulije u epruvete, u treći - 0,95 ml pufera. U drugom redu priprema se 10-puta razrjeđivanje krvnih seruma, za koje se uzima 0,05 ml ispitivanog krvnog seruma iz svake epruvete prvog reda s odvojenom pipetom od 1 ml, prenesenom u odgovarajuću epruvetu drugog red i pomiješana s tamponom dostupnim. Iz svake epruvete drugog reda sa istom pipetom prenesite 0,05 ml krvnog seruma već 10 puta razrijeđenog u odgovarajuću epruvetu trećeg reda i razrijedite 200 puta.

Prilikom postavljanja reakcije na pripravke smještene u vlažnu komoru, nanosi se 200 puta razrijeđeni krvni serum tako da njihov broj naveden na epruvetama odgovara broju na staklenim pločicama. Nakon nanošenja na preparate krvnog seruma, mokra komora se stavlja 30 minuta u termostat sa temperaturom od 37 ° (faza I reakcije). Zatim se preparati ispiru 10 minuta u 2 porcije pufera i osuše. Nakon toga se ponovo stavljaju u vlažnu komoru i na sve se nanosi luminescentni serum razrijeđen titrom (faza II reakcije). Druga faza se provodi 30 minuta na sobnoj temperaturi, nakon čega se preparati ispiru 10 minuta, suše i montiraju na fluorescentnu mikroskopiju.

Rezultati RIF-200 uzimaju se u obzir na isti način kao i RIF-ovi.

U slučaju kada su kliničari zainteresirani za titar fluorescentnih antitijela u krvnom serumu pacijenta, RIF-aps i RIF-200 treba postaviti s uzastopnim razrjeđivanjem testiranih krvnih seruma i titrom fluorescentnih antitijela kako bi se uzelo u obzir najveće razrjeđivanje krvni serum koji i dalje daje pozitivan rezultat reakcije. Titar se obično označava brojem koji karakterizira stupanj razrjeđenja ispitivanog krvnog seruma, na primjer, 5, 10, 20, 40 itd. (RIF-abs) ili 200, 400, 800 itd. (RIF-200).

Prilikom postavljanja obje modifikacije reakcije za razrjeđivanje ispitivanih krvnih seruma i za ispiranje pripravaka nakon faze I i II, treba upotrijebiti fototski pufer sljedećeg sastava: 1 L destilirane vode, 6,8 g natrijevog klorida, 1,48 g natrijuma disupstituisane fosforne kiseline, 0, 43 g monosupstituisanog kalijum fosfata (pH = 7,2). Pripremljeni rastvor se čuva na sobnoj temperaturi ne više od nedelju dana.

Zbog mogućnosti dobijanja negativnih rezultata u prisutnosti fluorescentnih antitijela, krv i serum ne bi trebali biti ispitivani u RIF-trbušnjacima i RIF-200 tokom liječenja pacijenata penicilinom.

Metodologija za postavljanje RIF-c

Rana dijagnoza lezija nervnog sistema kod sifilisa hitno je pitanje u borbi protiv ove bolesti. S obzirom na činjenicu da RIF-c ima veću osjetljivost od svih ostalih testova koji se koriste za dijagnosticiranje alkoholnih pića sifilisa, ova se izmjena RIF-a može preporučiti za dijagnosticiranje sifilitičkih lezija središnjeg živčanog sustava u svim oblicima sifilisa.

Za postavljanje RIF-c koristi se isti antigen, luminiscentni serum kao i za postavljanje RIF-aps i RIF-200 s krvnim serumom. Određivanje fluorescentnih antitijela u cerebrospinalnoj tekućini i krvnom serumu te uzimanje u obzir reakcije su također slični.

Cerebrospinalna tekućina uvodi se u reakciju neaktivirana i cijela. Prije postavljanja reakcije, može se čuvati u zamrzivaču hladnjaka u epruvetama pod gumenim čepovima do 2 sedmice. Odmrzavanje se vrši na sobnoj temperaturi.

Tehnika postavljanja RIF-c

U I fazi reakcije na antigen se nanosi 0,05 ml nerazrijeđene cerebrospinalne tekućine, preparati se stavljaju u vlažnu komoru 30 minuta na sobnoj temperaturi. Zatim se isperu fosfatnim puferom, pH = 7,2, 10 minuta, osuše. U fazi II, na preparate se nanosi luminescentni serum razrijeđen titrom, koji se titrira pri postavljanju reakcije sa cerebrospinalna tečnost... Preparati se drže na sobnoj temperaturi 30 minuta u vlažnoj komori, isperu, osuše i montiraju na fluorescentnu mikroskopiju.

Izvori grešaka

1. Nepoštivanje uslova pripreme, skladištenja reagensa i postavke reakcije.

2. Loš kvalitet luminiscentnog seruma i neprecizno određivanje njegovog titra.

3. Nanošenje ispitnog materijala ili luminiscentnog seruma pri postavljanju reakcije ne na lijek, već na drugu stranu stakalca.

4. Pogrešno podešeno osvetljenje u fluorescentnom mikroskopu.

5. Loša kvaliteta antigena.

Analiza sifilisa vrši se različitim metodama za otkrivanje patogena. S razvojem patologije pojavljuje se veliki broj specifičnih znakova, pa se radi postavljanja točne dijagnoze bolesna osoba pregledava na sveobuhvatan način. Opšta analiza krv nije jako informativna, ne koristi se za dijagnosticiranje ove spolne infekcije.

Vrste istraživanja i biomaterijali za analizu

Za identifikaciju bolesti koriste se različite tehnike i biomaterijali. U ranim fazama, sifilis se utvrđuje bakterioskopskim testom. Uzorci se pregledavaju pod mikroskopom. Uređaj vam omogućuje otkrivanje sojeva patogena. Kasnije ih izvode serološki testovi krv. Zahvaljujući njima, u uzorcima se otkrivaju antigeni i antitijela sifilisa.

Metode određivanja genitalne infekcije podijeljene su u 2 kategorije:

• Direktno, otkrivajući patogeni mikroorganizam. To uključuje: mikroskopiju tamnog polja, RIT analizu (infekcija kunića biomaterijalom za istraživanje), PCR metoda- lančana reakcija polimeraze (uz njenu pomoć pronalaze se genetski elementi patogena).
• Posredno (serološko) otkriva antitijela na patogen. Oni se proizvode imunološki sistem kao odgovor na infekciju.

Serološke tehnike podijeljene su u 2 kategorije: treponemalne i netreponemalne.

• Non-treponemalni, uključujući: test crvenog toluidina, RSK analizu, RPR test, test krvi metodom brzog raka mokraćne bešike.
• Treponemal, uključujući: imunobloting, RSK test, RIT analizu, RIF studiju, RPGA test, ELISA analizu.

Sadržaj informacija o testovima infekcije je drugačiji. Češće rade glavne vrste testova na sifilis, koje uključuju serološke metode.

Biomaterijal za istraživanje

Za identifikaciju blijede treponeme, patogena koji izgleda kao spirala i uzrokuje sifilis, uzimaju se uzorci:

• venska krv;
• cerebrospinalna tekućina (sekrecija iz spinalnog kanala);
• sadržaj limfnih čvorova;
• ulceracijsko tkivo.

Ako je potrebno provesti pretrage za otkrivanje sifilisa, krv se ne daje samo iz kubitalne vene, već i iz prsta. Na izbor biomaterijala i metodu istraživanja utiče težina toka infekcije i opremljenost dijagnostičkog centra.

Direktno istraživanje

Uvjerljiv dokaz sifilisa je identifikacija uzročnika infekcije pod mikroskopom. Na ovaj način, patogen se nalazi u 8 od 10. Negativan rezultat kod preostala 2 pacijenta ne znači da nisu zaraženi.

Istraživanje se provodi u primarnoj i sekundarnoj fazi (fazi) bolesti, koju karakterizira pojava osipa na koži i sifilisa (ulceracija) na epitelnim tkivima ili sluznicama. Patogeni koji uzrokuju spolne bolesti nalaze se u iscjetku iz lezija.

Tačnije, složeni test, označen kao RIF - reakcija imunofluorescencije, nosi se sa definicijom treponema. Uzorak za istraživanje je prethodno obrađen fluorescentnim antitijelima. Spojevi sposobni za sjaj lijepe se zajedno s bakterijama. Pregledom uzoraka pod mikroskopom, u slučaju infekcije, laboratorijski pomoćnik vidi pjenušave patogene.

Test se koristi za ranu dijagnozu bolesti. Što duže traje bolest, manja je osjetljivost metoda istraživanja. Osim toga, pada nakon liječenja osipa i čireva antisepticima i kod pacijenata koji su bili na liječenju. Povremeno istraživanje daje lažno negativne i lažno pozitivne rezultate.

RIT analiza je vrlo precizna metoda za otkrivanje sifilisa. Prilikom provođenja testa, rezultati moraju čekati dugo. Dok zaraženi kunić ne pokaže znakove infekcije. Test se koristi vrlo rijetko, uprkos činjenici da je super tačan.

Korišćenjem lančana reakcija polimeraze za sifilis se određuju genetski elementi patogena. Jedini nedostatak PCR -a je njegova visoka cijena.

Netreponemalni testovi

Ovi testovi krvi pomažu u otkrivanju antitijela koja se pojavljuju kao odgovor na kardiolipin, spoj povezan s općom strukturom membrana patogena.

Wassermanova reakcija (PB ili RW)

Najpoznatija studija o sifilisu je Wassermanova reakcija. RV je uključen u kategoriju reakcija fiksacije komplementa (CAC). Nove RSC metode imaju značajne razlike od tradicionalnih RW. Ali označeni su, kao i prije, konceptom "Wassermanove reakcije".

Imunološki sistem sintetizira antitijela (markere) kao odgovor na invaziju treponema. Otkrivaju se u krvnom testu na sifilis metodom Wassermanove reakcije. Pozitivan rezultat RW -a potvrđuje da je subjekt zaražen.

Reakcija hemolize - indeks RV analize. S njim međusobno djeluju 2 tvari: hemolitički serum i ovnovi eritrociti. Serum se proizvodi imunizacijom zeca ovnovim eritrocitima. Aktivnost biološke tekućine smanjuje se zagrijavanjem.

RV pokazatelji zavise od toga da li je hemoliza prošla ili nije. Hemoliza se javlja u uzorku bez markera. U ovom slučaju reakcija na antigene je nemoguća. Komplement se troši u interakciji s eritrocitima ovaca. Kad u uzorku postoje markeri, kompliment reagira s antigenima. U tom slučaju ne dolazi do hemolize.