En pratique diagnostic de laboratoire maladies infectieuses, il est parfois nécessaire de déterminer des anticorps non généralement dirigés contre l'agent pathogène, mais contre certaines de ses protéines (antigènes), c'est-à-dire le spectre d'anticorps spécifiques. Si, à cette fin, la méthode de dosage immuno-enzymatique est utilisée, dans ce cas, il est alors nécessaire d'isoler et de purifier d'abord les antigènes nécessaires à partir de la culture de l'agent pathogène. Les protéines résultantes sont appliquées séparément à la phase solide. Dans le cas de l'utilisation d'une plaque à 96 puits - un type d'antigène dans chaque puits. Ensuite, des anticorps spécifiques sont déterminés par une méthode indirecte.

Par la présence d'une réaction positive dans le puits avec l'un ou l'autre antigène, on peut juger de la présence des anticorps spécifiques correspondants. Ce type de systèmes de dosage immuno-enzymatique est proposé par les entreprises de fabrication. Cependant, en raison du contenu d'informations plus important et de la simplicité de l'étude elle-même, la méthode de transfert immunitaire (Western blot) s'est généralisée.

Le transfert immunitaire permet la détermination d'anticorps dans le sérum sanguin simultanément et en même temps, différenciés de toutes les protéines diagnostiquement significatives de l'agent pathogène. Traduit de l'anglais Western blot signifie transfert occidental (littéralement - buvardage). L'histoire de ce terme inhabituel est la suivante.

Un scientifique du nom de E. Southern en 1975 a été le premier à proposer une méthode pour transférer des fragments d'ADN séparés par électrophorèse d'un gel à une membrane. Selon l'auteur, la méthode a été nommée Southern blot, ce qui signifie « transfert du sud ». La méthode de transfert des molécules d'ARN, à son tour, a été surnommée par les spécialistes Northern blot - "transfert du nord". Au début comme une blague, puis ce nom a été fixé dans la littérature scientifique officielle.

G. Toubin a publié en 1979 les résultats des premières expériences sur le transfert de protéines. Dans la continuité de la tradition des méthodes de dénomination "géographiques" pour le transfert de macromolécules biologiques, cette méthode est devenue connue sous le nom de transfert "Western" - Western blot.

A la première étape de cette méthode, une séparation électrophorétique d'un mélange de protéines pathogènes dans un gel de polyacrylamide en présence de dodécyl sulfate de sodium (SDS) est réalisée. Le SDS, étant un tensioactif, enveloppe uniformément les molécules de protéines et leur confère une charge négative d'une amplitude à peu près égale. Par conséquent, les molécules se déplacent dans un champ électrique dans une direction et la vitesse de déplacement ne dépend que de la taille de la molécule (poids moléculaire) de la protéine.

À la suite de la procédure électrophorétique, une plaque de gel est obtenue, dans l'épaisseur de laquelle les protéines sont situées sous la forme de zones linéaires minces séparées. Dans le sens du mouvement, elles sont séparées dans l'ordre suivant : plus près du départ se trouvent des protéines de grand poids moléculaire, environ 120-150 kDa, et des protéines d'une masse de 5-10 kDa ont avancé jusqu'à la ligne d'arrivée. Dans un deuxième temps, une feuille de gel est appliquée sur la feuille de nitrocellulose et la structure est interposée entre les électrodes de l'alimentation continue. Sous l'action d'un champ électrique, les protéines s'écoulent du gel poreux vers une membrane plus dense, où elles sont solidement fixées.

Le transfert résultant est traité avec une solution de blocage contenant des protéines antigéniquement indifférentes et/ou des détergents non ioniques (Tween 20), qui bloquent les sites sans antigène sur la membrane. La feuille de membrane est ensuite découpée en bandes étroites de sorte que chaque bande contienne toutes les fractions antigéniques. Les étapes décrites sont effectuées par le fabricant.

Les systèmes de test commerciaux pour la détermination des anticorps par immunoblot contiennent des taches (bandes ou bandelettes) prêtes à être analysées. L'utilisateur effectue la détermination de l'ensemble du spectre des anticorps spécifiques aux protéines du pathogène en utilisant la méthode indirecte. En tant que chromogène pour effectuer une réaction colorée (enzymatique), une substance incolore soluble est utilisée, dont le produit acquiert une couleur, devient insoluble et se dépose (précipite) sur la nitrocellulose.

À la suite de la mise en œuvre séquentielle de réactions immunitaires et enzymatiques en présence d'anticorps dirigés contre les protéines de l'agent pathogène dans l'échantillon à tester, des bandes transversales sombres apparaissent sur le transfert, dont l'emplacement est situé dans la zone de certaines protéines du agent pathogène. Chacune de ces bandes indique la présence d'anticorps spécifiques contre l'antigène correspondant. Le résultat d'une étude réalisée par la méthode d'immunotransfert est délivré sous la forme d'une liste d'anticorps dirigés contre des protéines spécifiques de l'agent pathogène. Par exemple : « des anticorps contre les protéines p17 et p24 ont été identifiés.

Après développement, les blots de nitrocellulose peuvent être conservés au sec pendant une longue période. Cependant, l'intensité de la couleur est considérablement affaiblie. Les taches humides peuvent être photographiées ou injectées à l'aide de scanners image graphique dans la mémoire des ordinateurs personnels. Des programmes informatiques spéciaux vous permettent de traiter les résultats obtenus et de suivre rapidement la dynamique du spectre des anticorps lors de l'observation dynamique

Caractéristiques distinctives:

• L'ensemble de réactifs "MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2" contient des protéines virales de lysat purifié de HIV 1 et un peptide - antigénique déterminé gp36 de HIV-2;
• Fournit la détection des anticorps au VIH-1, VIH-1 groupe O, VIH 2 sur une bande ;
• Procédure simple de préparation et de réalisation d'analyses ;
• Contrôle qualité interne de la réaction *
• Vitesse maximale d'analyse (3 heures);
• Un petit volume de l'échantillon d'essai - 20 ul;
• Ne nécessite pas d'équipement supplémentaire pour la recherche ;
• La qualité du kit est garantie par l'utilisation de matériaux de référence russes et internationaux **

* Le contrôle qualité interne est assuré par la présence de :

• bandelettes de contrôle interne, permet de contrôler l'ajout d'un échantillon de sérum ou de plasma ;
• sérum de contrôle négatif (K-);
• sérum de contrôle positif (K+), permettant d'identifier les bandes détectées sur la bandelette ;
• sérum de contrôle faiblement positif (K + cl), qui permet de contrôler la sensibilité du kit de réactifs.

**Assurance qualité:

Les caractéristiques de l'ensemble de réactifs "MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2" ont été déterminées en testant des échantillons d'un échantillon aléatoire de donneurs, des patients avec un diagnostic Infection au VIH, panels de séroconversion commerciaux, panels standard et échantillons avec des composants « interférant potentiellement avec la détection ».

L'ensemble de réactifs ne donne pas de résultats faussement positifs dans l'étude de sérums de panel standard qui ne contiennent pas d'anticorps anti-VIH 1,2 et VIH-1 ("Standard AT (-) HIV", n° FSR 2007/00953 du 25.10 .2007). La spécificité est de 100 %.

La spécificité diagnostique a été déterminée en étudiant un échantillon aléatoire de 200 donneurs provenant de divers centres de transfusion et cliniques avec une absence précédemment confirmée d'infection par le VIH-1, VIH-2. La spécificité dans l'étude d'un échantillon aléatoire de donneurs était de 100 % ;

La spécificité du kit de réactifs a été déterminée en examinant 250 échantillons, y compris des échantillons de sérum ou de plasma obtenus de femmes enceintes, de patients hospitalisés atteints d'hépatite C et E et d'échantillons contenant des composants « potentiellement interférents ». Lors de l'utilisation de l'ensemble "MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2" pour ces échantillons, aucun résultat faussement positif n'a été trouvé.

La sensibilité diagnostique a été déterminée en utilisant :
- des échantillons de plasma du panel VIH-1 de Boston Biomedica, Inc (WWRB 301) provenant de différentes régions contenant différents sous-types de VIH-1 : groupe M (sous-types A, B, C, D, E, F) et groupe O ; la sensibilité du kit de réactifs était de 100 % ;

La sensibilité du kit de réactifs a été déterminée dans l'étude des panels internationaux de séroconversion Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences), cat. nr. PRB 903, PRB 904, PRB 909, PRB 912, PRB 916, PRB 917, PRB 918, PRB 919, PRB 921, PRB 923, PRB 924, PRB 927, PRB 928, PRB 932, PRB 940.

Le kit de réactifs détecte les anticorps anti-VIH-1 dans les sérums d'un panel standard contenant des anticorps anti-VIH-1 ("Standard AT (+) VIH-1", n° FSR 2007/00953 du 25.10.2007), détecte les anticorps anti-VIH -2 dans les sérums d'un panel standard contenant des anticorps anti-VIH-2 ("Standard AT (+) HIV-2", n° FSR 2007/00953 du 25.10.2007). Sensibilité - 100%.

Certificat d'immatriculation n° FSR 2010/07958 du 13 juillet 2011 (la validité n'est pas limitée)

Composition:

• Immunosorbant. Bandelettes d'une membrane de nitrocellulose blanche avec des protéines individuelles du VIH-1 (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17) adsorbées sur celles-ci par la méthode d'électrotransfert et appliquées sur la bandelette avec un peptide synthétique du VIH-2, un analogue de la protéine gp36 et des IgG anti-humaines (contrôle interne) - 18 pcs;
• K- - sérum de contrôle négatif. Le sérum sanguin humain, qui ne contient pas d'anticorps anti-VIH-1,2, VHC, antigène VIH, HBsAg, est inactivé par chauffage à 560°C ; liquide clair jaune clair - 1 tube (0,08 ml). Contient des conservateurs : thimérosal et azoture de sodium ;
• K + - sérum de contrôle positif. Sérum sanguin humain contenant des anticorps anti-VIH-1,2 (titre d'au moins 1 : 10000), ne contenant pas d'HBsAg, d'antigène VIH, d'anticorps anti-HCV, inactivé par chauffage à 560 °C ; liquide clair jaune clair - 1 tube (0,08 ml) Contient des conservateurs : thimérosal et azoture de sodium ;
• K + sl - sérum témoin faiblement positif. Sérum sanguin humain contenant des anticorps anti-VIH-1,2 (titre ne dépassant pas 1: 200), ne contenant pas d'HBsAg, d'antigène VIH, d'anticorps anti-HCV, inactivé par chauffage à 560C ; liquide clair jaune clair - 1 tube (0,08 ml). Contient des conservateurs : thimérosal et azoture de sodium ;
• RROKk (x10) - solution de dilution pour échantillons et conjugué. Concentré - Tampon Tris contenant du sérum de chèvre normal prétraité ; liquide gris opaque - 1 flacon (10 ml). Contient un conservateur : thimérosal ;
• PRk (x20) - solution de lavage. Concentré - Tampon Tris contenant du Tween-20 ; liquide transparent incolore - 1 flacon (70 ml). Contient un conservateur : thimérosal ;
• Conjuguer. Anticorps IgG de chèvre anti-humains conjugués à la phosphatase alcaline ; liquide clair et incolore - 1 tube (0,06 ml);
• Substrat (solution colorante). Une solution de 5-bromo-4-fluoro-indolyl phosphate (BCIP) et de nitro bleu de tétrazolium (NBT); liquide jaune clair clair - 1 bouteille (50 ml);
• Poudre de buvardage immunitaire. Lait écrémé en poudre - poudre amorphe blanche ou jaune clair - paquet de 5 x 1g;
• Une assiette avec un couvercle pour préparer une réaction - 2 pièces ;
• Pince à épiler en plastique - 1 pièce.

ELISA en phase solide - une variante du test, lorsqu'un des composants de la réponse immunitaire (antigène ou anticorps) est sorbé sur un support solide, par exemple, dans les puits de plaques de polystyrène. Les composants sont identifiés par l'ajout d'anticorps ou d'antigènes marqués. Si le résultat est positif, la couleur du chromogène change. Chaque fois après l'ajout du composant suivant, les réactifs non liés sont retirés des puits par lavage,

Lors de la détermination des anticorps (figure de gauche), le sérum sanguin du patient, le sérum antiglobuline marqué avec une enzyme et un substrat/chromogène pour l'enzyme sont ajoutés séquentiellement dans les puits des plaques avec l'antigène sorbé.

II. Lors de la détermination de l'antigène (figure de droite), l'antigène est introduit dans les puits avec les anticorps adsorbés (par exemple, le sérum sanguin avec l'antigène souhaité), le sérum de diagnostic contre celui-ci et les anticorps secondaires (contre le sérum de diagnostic) marqués avec l'enzyme sont ajoutés, puis le substrat/chromogène pour l'enzyme.

ELISA compétitif pour déterminer les antigènes : l'antigène cible et l'antigène marqué enzymatiquement entrent en compétition pour lier un nombre limité d'anticorps de l'immunsérum.

Un autre test est un ELISA compétitif pour la détermination des anticorps : les anticorps cibles et les anticorps marqués enzymatiquement entrent en compétition pour les antigènes adsorbés sur la phase solide.

Immunobuvardage- une méthode très sensible de détection de protéines basée sur une combinaison d'électrophorèse et d'ELISA ou RIA. L'immunotransfert est utilisé comme méthode de diagnostic pour l'infection par le VIH, etc.

Les antigènes pathogènes sont séparés par électrophorèse sur gel de polyacrylamide, puis transférés du gel sur papier activé ou sur membrane de nitrocellulose et développés par ELISA. Les entreprises produisent de telles bandes de transfert d'antigène. Le sérum du patient est appliqué sur ces bandelettes. . Ensuite, après incubation, les anticorps non liés du patient sont lavés et le sérum contre les immunoglobulines humaines marquées avec l'enzyme est appliqué . Le complexe [antigène + anticorps du patient + anticorps anti-Ig humaine] formé sur la bandelette est détecté en ajoutant un substrat chromogène qui change de couleur sous l'action d'une enzyme.

52. Interférons, nature. Méthodes d'obtention et d'utilisation.

Interféron appartient aux protéines protectrices importantes du système immunitaire. Découvert dans l'étude de l'interférence des virus, c'est-à-dire le phénomène où les animaux ou les cultures cellulaires infectés par un virus deviennent insensibles à l'infection par un autre virus. Il s'est avéré que l'interférence est due à la protéine résultante, qui a une propriété antivirale protectrice. Cette protéine a été appelée interféron.

L'interféron est une famille de protéines glycoprotéiques synthétisées par les cellules du système immunitaire et le tissu conjonctif. Selon quelles cellules l'interféron est synthétisé, on distingue trois types : les interférons α, β et .

Interféron alpha produit par les leucocytes, et il s'appelle leucocyte; interféron bêta appelé fibroblastique, car il est synthétisé par les fibroblastes - cellules du tissu conjonctif, et interféron gamma- immunitaire, puisqu'il est produit par les lymphocytes T activés, les macrophages, les cellules tueuses naturelles, c'est-à-dire les cellules immunitaires.

L'interféron est constamment synthétisé dans l'organisme, et sa concentration dans le sang est maintenue à environ 2 UI/ml (1 unité internationale - ME est la quantité d'interféron qui protège la culture cellulaire de 1 virus CPE 50). La production d'interféron augmente fortement lorsqu'elle est infectée par des virus, ainsi que lorsqu'elle est exposée à des inducteurs d'interféron, par exemple l'ARN, l'ADN, des polymères complexes. De tels inducteurs d'interféron sont appelés interféronogènes.

En plus de l'effet antiviral, l'interféron a une protection antitumorale, car il retarde la prolifération (multiplication) des cellules tumorales, ainsi que l'activité immunomodulatrice, stimulant la phagocytose, les cellules tueuses naturelles, régulant la production d'anticorps par les cellules B, activant l'expression des principaux complexe d'histocompatibilité.

Mécanisme d'action l'interféron est complexe. L'interféron n'affecte pas directement le virus à l'extérieur de la cellule, mais se lie à des récepteurs spéciaux des cellules et affecte le processus de reproduction du virus à l'intérieur de la cellule au stade de la synthèse des protéines.

Utilisation d'interféron... L'action de l'interféron est d'autant plus efficace qu'il commence à être synthétisé tôt ou pénètre dans l'organisme de l'extérieur. Par conséquent, il est utilisé à des fins prophylactiques pour de nombreuses infections virales, telles que la grippe, ainsi que pour but thérapeutique dans les infections virales chroniques telles que les hépatites parentérales (B, C, D), l'herpès, la sclérose en plaques, etc. L'interféron donne des résultats positifs dans le traitement des tumeurs malignes et des maladies associées à l'immunodéficience.

Les interférons sont spécifiques à l'espèce, c'est-à-dire que l'interféron humain est moins efficace pour les animaux et vice versa. Cependant, cette spécificité d'espèce est relative.

Obtenir de l'interféron... L'interféron est obtenu de deux manières : a) en infectant des leucocytes ou des lymphocytes humains avec un virus sûr, à la suite de quoi cellules infectées synthétiser l'interféron, qui est ensuite isolé et conçu à partir de ses préparations d'interféron ; b) génétiquement modifiés - en cultivant dans des conditions industrielles des souches recombinantes de bactéries capables de produire de l'interféron. Habituellement, ils utilisent des souches recombinantes de pseudomonas, Escherichia coli avec des gènes d'interféron intégrés dans leur ADN. L'interféron génétiquement modifié est appelé recombinant. Dans notre pays, l'interféron recombinant a reçu le nom officiel "Reaferon". La production de ce médicament est à bien des égards plus efficace et moins chère que celle des leucocytes.

L'interféron recombinant a trouvé une large application en médecine en tant qu'agent prophylactique et thérapeutique pour les infections virales, les néoplasmes et les immunodéficiences.

La description

Méthode de détermination Immunoblot.

Matériel d'étude Sérum sanguin

Visite à domicile disponible

Les anticorps antinucléiques sont une famille d'auto-anticorps qui se lient aux acides ribonucléiques et à leurs protéines associées. Ils surviennent chez plus de 90 % des patients atteints de maladies diffuses du tissu conjonctif et sont également souvent observés dans les maladies auto-immunes du foie et un certain nombre d'autres affections. À ce jour, environ 200 variétés de cette famille d'auto-anticorps ont été caractérisées, mais toutes ne peuvent pas être utilisées en pratique clinique.

L'immunoblot d'anticorps antinucléaires permet en un seul test d'étudier simultanément 15 types principaux d'anticorps antinucléaires, ce qui garantit diagnostic différentiel maladies rhumatismales systémiques majeures. Chaque type d'auto-anticorps détecté par immunoblot est généralement observé chez des patients présentant un tableau clinique caractéristique. Par conséquent, le spectre des auto-anticorps permet non seulement de diagnostiquer la maladie, mais également d'établir le risque de développer certaines manifestations cliniques.

L'immunotransfert d'anticorps antinucléaires est conseillé lors de la deuxième étape de l'examen sérologique lorsque résultat positif autres tests indiquant la présence d'anticorps antinucléaires dans le sérum de la personne examinée. Ces tests comprennent la détermination des anticorps antinucléaires (dépistage ELISA), la détection du facteur antinucléaire (ANF) sur les cellules Hep2 (), des anticorps antinucléaires et des anticorps anti-antigène nucléaire extractible (ENA,).

La méthode d'immunotransfert d'anticorps antinucléaires dans le diagnostic des maladies rhumatismales systémiques est caractérisée par une spécificité clinique élevée. Mais la spécificité des anticorps antinucléaires, même avec des titres élevés d'ANP (), n'est pas toujours possible à établir, car un certain nombre d'antigènes d'anticorps antinucléaires restent encore non caractérisés. Un résultat d'immunotransfert négatif dans ce cas n'exclut pas le diagnostic de maladies rhumatismales systémiques. Un certain nombre d'anticorps antinucléaires peuvent être détectés à l'aide d'un immunoblot - un panel d'auto-anticorps spécifiques à la myosite () et d'un immunoblot - un panel d'auto-anticorps dans la sclérodermie ().

Littérature

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6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Critères diagnostiques dans les maladies auto-immunes / Humana Press - 2008.598 p.
7. Instructions pour le kit de réactifs.

Préparation

Il est préférable de résister 4 heures après le dernier repas, il n'y a pas d'exigences obligatoires.

Indications pour rendez-vous

Le test est indiqué pour le diagnostic et le diagnostic différentiel des conditions suivantes :

• le lupus érythémateux disséminé;
• lupus cutané subaigu et autres types de lupus cutané;
• maladie mixte du tissu conjonctif;
• syndrome de Sjogren et maladies associées ;
• sclérodermie diffuse et localisée, syndrome CREST ;
• myopathies inflammatoires (polymyosite et dermatomyosite) ;
• arthrite chronique juvénile;
• hépatite auto-immune;
• cirrhose biliaire primitive et cholangite sclérosante ;
• l'utilisation de ce test est indiquée lorsque des titres élevés de facteur antinucléaire, d'anticorps antinucléaires, d'anticorps dirigés contre l'antigène nucléaire extractible, d'anticorps dirigés contre l'ADN, d'anticorps dirigés contre les nucléosomes et d'anticorps antiphospholipides sont détectés.

Interprétation des résultats

L'interprétation des résultats des tests contient des informations pour le médecin traitant et ne constitue pas un diagnostic. Les informations contenues dans cette section ne peuvent pas être utilisées pour l'autodiagnostic et l'automédication. Un diagnostic précis est posé par un médecin, en utilisant à la fois les résultats de cet examen et les informations nécessaires provenant d'autres sources : anamnèse, résultats d'autres examens, etc.

Unités de mesure : test qualitatif, le résultat est présenté sous la forme « trouvé » ou « non trouvé ».

Lorsqu'une bande est trouvée qui caractérise la présence d'un certain type d'anticorps, l'intensité de la couleur de la bande est en outre décrite par le nombre de points positifs ("croix") pour chacun des types d'anticorps identifiés. Une augmentation du degré de positivité reflète indirectement le contenu et l'affinité des auto-anticorps.

Valeurs de référence : anticorps anti-Sm, RNP/Sm, SS-A (60 kDa), SS-A (52 kDa), SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENP-B, dsDNA, Histone, Nucleosome , Rib P, AMA-M2, Jo-1 introuvable.

Le résultat de la détermination des auto-anticorps est présenté en croix pour chaque antigène correspondant. Une augmentation du degré de séropositivité reflète indirectement le contenu et l'affinité des auto-anticorps. Les variantes du résultat de l'évaluation de la séropositivité sont présentées ci-dessous :

1. Aucun anticorps détecté.
2. +/- - résultat limite ;
3. + - faible teneur en auto-anticorps dirigés contre un antigène spécifique ;
4. ++ - la teneur moyenne en auto-anticorps dirigés contre un antigène spécifique ;
5. +++ - teneur élevée en auto-anticorps dirigés contre un antigène spécifique.

Les principales maladies associées à la détection des anticorps antinucléaires :

Buvard immunitaire(Western Blot, Western Blot)- combine un dosage immuno-enzymatique (ELISA) avec un transfert électrophorétique préliminaire d'antigènes viraux sur une bandelette de nitrocellulose (strip).

Dans ce beau nom scientifique, "blot" est très probablement traduit par "blot", et "western" - car "western" reflète la direction de la propagation de ce "blot" sur le papier de gauche à droite, c'est-à-dire sur une zone géographique carte elle correspond à la direction d'ouest en est. ". L'essence de la méthode "immune blot" est que la réaction immuno-enzymatique est réalisée non pas avec un mélange d'antigènes, mais avec des antigènes du VIH, préalablement répartis par immunophorèse en fractions localisées en fonction du poids moléculaire à la surface de la nitrocellulose. membrane. En conséquence, les principales protéines du VIH, porteuses de déterminants antigéniques, sont réparties sur la surface sous forme de bandes séparées, qui se manifestent lors de la réaction immuno-enzymatique.

L'immunoblot comprend plusieurs étapes :

Préparation de la bande. Le virus de l'immunodéficience (VIH), préalablement purifié et détruit en ses composants, subit une électrophorèse, tandis que les antigènes qui font partie du VIH sont séparés par poids moléculaire. Ensuite, par buvardage (analogue à l'élimination de l'excès d'encre sur un buvard), les antigènes sont transférés sur une bande de nitrocellulose, qui contient désormais un spectre de bandes antigéniques invisibles à l'œil, caractéristiques du VIH.

Exemple de recherche. Le matériel à tester (sérum, plasma sanguin du patient, etc.) est appliqué sur la bandelette de nitrocellulose et si l'échantillon contient des anticorps spécifiques, ils se lient aux bandes antigéniques (complémentaires) strictement correspondantes. À la suite de manipulations ultérieures, le résultat de cette interaction est visualisé - rendu visible.

Interprétation du résultat. La présence de bandes dans certaines zones de la plaque de nitrocellulose confirme la présence d'anticorps dirigés contre des antigènes VIH strictement définis dans le sérum étudié.

Piste A - Contrôle positif

Barre B - Contrôle faiblement positif

Piste C - Contrôle négatif

Piste D - Échantillon positif (anticorps anti-VIH-1 détectés)

Actuellement, le transfert immunitaire (immunoblot) est la principale méthode pour confirmer la présence d'anticorps spécifiques du virus dans le sérum étudié. Dans certains cas d'infection par le VIH, avant le développement de la séroconversion, les anticorps spécifiques sont détectés plus efficacement par immunoblot qu'ELISA. Dans l'étude par la méthode de transfert immunitaire, il a été constaté que les anticorps anti-gp 41 sont le plus souvent détectés dans les sérums de patients atteints du SIDA, et la détection de p24 chez les personnes examinées à des fins prophylactiques nécessite des études supplémentaires pour la présence d'une infection par le VIH. Les systèmes de test pour le transfert immunitaire basés sur des protéines recombinantes génétiquement modifiées se sont avérés plus spécifiques que les systèmes conventionnels basés sur un lysat viral purifié. Lors de l'utilisation d'un antigène recombinant, il ne se forme pas une bande étroite d'antigène diffuse, mais clairement exprimée, qui est facilement accessible pour l'enregistrement et l'évaluation.

Les sérums de personnes infectées par le VIH-1 présentent des anticorps contre les protéines et glycoprotéines basiques suivantes - protéines d'enveloppe structurelle (env) - gp160, gp120, gp41 ; noyaux (gag) - p17, p24, p55, ainsi que des enzymes virales (pol) - p31, p51, p66. Pour le VIH-2, les anticorps contre env sont typiques - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol - p68.

Parmi méthodes de laboratoire, nécessaire pour établir la spécificité de la réaction, la plus reconnue est la détection d'anticorps contre les protéines d'enveloppe de VIH-1 - gp41, gp120, gp160, et VIH-2 - gp36, gp105, gp140.

L'OMS considère les sérums positifs dans lesquels des anticorps dirigés contre deux glycoprotéines du VIH sont détectés par la méthode de transfert immunitaire. Selon ces recommandations, s'il y a réaction avec une seule des protéines d'enveloppe (gp 160, gp 120, gp 41) en association ou sans réaction avec d'autres protéines, le résultat est considéré comme douteux et il est recommandé de retester à l'aide d'un kit d'une autre série ou d'une autre société. Si même après cela le résultat reste douteux, une observation pendant 6 mois est recommandée (études après 3 mois).

La présence d'une réaction positive avec l'antigène p24 peut indiquer une période de séroconversion, car les anticorps dirigés contre cette protéine particulière apparaissent parfois en premier. Dans ce cas, il est recommandé, en fonction des données cliniques et épidémiologiques, de répéter l'étude avec un échantillon de sérum prélevé au moins 2 semaines plus tard, et c'est exactement le cas lorsque des sérums appariés sont nécessaires pour l'infection par le VIH.

Des réactions positives avec les protéines gag et pol sans réaction avec les protéines env peuvent refléter un stade de séroconversion précoce et peuvent également indiquer une infection par le VIH-2 ou une réaction non spécifique. Les personnes ayant de tels résultats après un test de dépistage du VIH-2 sont réexaminées après 3 mois (dans les 6 mois).