In practica diagnostic de laborator boli infecțioase, uneori este nevoie să se determine anticorpi nu în general pentru agentul patogen, ci pentru anumite proteine ​​(antigene) ale acestuia, adică spectrul de anticorpi specifici. Dacă în acest scop este utilizată metoda testului imunosorbent legat de enzime, atunci în acest caz este necesară mai întâi izolarea și purificarea antigenelor necesare din cultura agentului patogen. Proteinele rezultate sunt aplicate separat fazei solide. În cazul utilizării unei plăci cu 96 de godeuri - câte un tip de antigen în fiecare godeu. Apoi, anticorpii specifici sunt determinați printr-o metodă indirectă.

Prin prezența unei reacții pozitive în godeu cu unul sau altul antigen, se poate aprecia prezența anticorpilor specifici corespunzători. Acest tip de sisteme de testare imunosorbente legate de enzime sunt oferite de firmele producătoare, cu toate acestea, datorită conținutului mai mare de informații și simplității studiului în sine, metoda imunoblotting (Western blot) a devenit larg răspândită.

Imun blotting permite determinarea anticorpilor în serul sanguin simultan și în același timp, diferențiați de toate proteinele semnificative din punct de vedere diagnostic ale agentului patogen. Tradus din engleză Western blot înseamnă transfer occidental (literalmente - blot). Istoria acestui termen neobișnuit este următoarea.

Un om de știință pe nume E. Southern a fost primul care a propus în 1975 o metodă pentru transferul fragmentelor de ADN separate electroforetic dintr-un gel pe o membrană. Potrivit autorului, metoda a fost numită Southern blot, ceea ce înseamnă „transfer sudic”. Metoda de transfer a moleculelor de ARN, la rândul său, a fost supranumită de specialiști Northern blot - „transfer nordic”. La început ca o glumă, iar apoi acest nume a fost fixat în literatura științifică oficială.

G. Toubin a publicat în 1979 rezultatele primelor experimente despre protein blotting. În continuarea tradiției metodelor de denumire „geografică” pentru transferul de macromolecule biologice, această metodă a devenit cunoscută sub numele de transfer „Western” - Western blot.

În prima etapă a acestei metode, se efectuează separarea electroforetică a unui amestec de proteine ​​​​patogene într-un gel de poliacrilamidă în prezență de dodecil sulfat de sodiu (SDS). SDS, fiind un agent tensioactiv, învelește uniform moleculele de proteine ​​și conferă o sarcină negativă de mărime aproximativ egală tuturor acestora. Prin urmare, moleculele se mișcă într-un câmp electric într-o direcție, iar viteza de mișcare depinde doar de dimensiunea moleculei (greutatea moleculară) a proteinei.

Ca urmare a procedurii electroforetice, se obține o placă de gel, în grosimea căreia proteinele sunt situate sub formă de zone liniare subțiri separate. În direcția de mișcare, acestea sunt separate în următoarea ordine: mai aproape de început sunt proteinele cu greutate moleculară mare, aproximativ 120-150 kDa, iar proteinele cu o masă de 5-10 kDa au avansat până la linia de sosire. Într-o a doua etapă, o foaie de gel este aplicată pe foaia de nitroceluloză și structura este interpusă între electrozii sursei de curent continuu. Sub acțiunea unui câmp electric, proteinele curg din gelul poros către o membrană mai densă, unde sunt fixate ferm.

Blot-ul rezultat este tratat cu o soluție de blocare care conține proteine ​​antigenic indiferente și/sau detergenți neionici (Tween 20), care blochează locurile fără antigen de pe membrană. Foaia de membrană este apoi tăiată în benzi înguste, astfel încât fiecare bandă să conțină toate fracțiile antigenice. Pașii descriși sunt executați de producător.

Sistemele comerciale de testare pentru determinarea anticorpilor prin blotting imun conțin pete (fâșii sau benzi) gata pentru analiză. Utilizatorul efectuează determinarea întregului spectru de anticorpi specifici la proteinele agentului patogen folosind metoda indirectă. Ca cromogen pentru efectuarea unei reacții de culoare (enzimatică), se folosește o substanță incoloră solubilă, al cărei produs capătă o culoare, devine insolubilă și se depune (precipită) pe nitroceluloză.

Ca urmare a implementării secvențiale a reacțiilor imune și enzimatice în prezența anticorpilor la proteinele agentului patogen din proba de testat, pe pată apar dungi transversale întunecate, a căror locație este situată în zona anumitor proteine ​​ale agentului patogen. . Fiecare astfel de bandă indică prezența anticorpilor specifici la antigenul corespunzător. Rezultatul unui studiu efectuat prin metoda blotting imun este emis sub forma unei liste de anticorpi la proteine ​​specifice ale agentului patogen. De exemplu: „au fost identificați anticorpi la proteinele p17 și p24”.

După dezvoltare, petele de nitroceluloză pot fi păstrate uscat pentru o lungă perioadă de timp. Cu toate acestea, intensitatea culorii este slăbită semnificativ. Petele umede pot fi fotografiate sau injectate folosind scanere imagine graficăîn memoria computerelor personale. Programele speciale de calculator vă permit să procesați rezultatele obținute și să urmăriți rapid dinamica spectrului de anticorpi în timpul observării dinamice

Trăsături distinctive:

• Setul de reactivi "MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2" contine proteine ​​virale lizate purificate ale HIV 1 si peptida - determinat antigenic gp36 al HIV-2;
• Oferă detectarea anticorpilor la HIV-1, HIV-1 grup O, HIV 2 pe o bandă;
• Procedura simplă de pregătire și efectuare a analizelor;
• Controlul intern al calității reacției *
• Viteza maximă de analiză (3 ore);
• Un volum mic al probei de testat - 20 μl;
• Nu necesită echipament suplimentar pentru cercetare;
• Calitatea trusei este garantată de utilizarea materialelor de referință rusești și internaționale **

* Controlul intern al calitatii este asigurat de prezenta:

• benzi de control intern, asigură controlul adăugării unei probe de ser sau plasmă;
• ser de control negativ (K-);
• ser control pozitiv (K+), permițând identificarea benzilor detectate pe bandă;
• controlul serului slab pozitiv (K + cl), care asigură controlul sensibilității trusei de reactivi.

**Asigurarea calității:

Caracteristicile setului de reactivi „MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2” au fost determinate prin testarea probelor dintr-un eșantion aleatoriu de donatori, pacienți cu diagnostic infectie cu HIV, panouri comerciale de seroconversie, panouri standard și eșantioane cu componente „care pot interfera cu detectarea”.

Setul de reactivi nu dă rezultate fals pozitive în studiul serurilor standard care nu conțin anticorpi împotriva antigenului HIV 1,2 și HIV-1 ("Standard AT (-) HIV", Nr. FSR 2007/00953 din 25.10. .2007). Specificitatea este de 100%.

Specificitatea diagnosticului a fost determinată prin studierea unui eșantion aleatoriu de 200 de donatori din diverse centre de sânge și clinici cu absența confirmată anterior a infecției cu HIV-1, HIV-2. Specificitatea în studiul unui eșantion aleatoriu de donatori a fost de 100%;

Specificitatea trusei de reactivi a fost determinată prin examinarea a 250 de probe, inclusiv probe de ser sau plasmă obținute de la femei însărcinate, pacienți internați cu hepatită C și E și probe cu componente „potențial interferente”. Când se utilizează setul „MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2” pentru aceste probe, nu s-au găsit rezultate fals pozitive.

Sensibilitatea diagnosticului a fost determinată folosind:
- probe de plasmă din panoul Boston Biomedica, Inc HIV-1 (WWRB 301) din diferite regiuni care conțin diferite subtipuri de HIV-1: grupa M (subtipurile A, B, C, D, E, F) și grupa O; sensibilitatea trusei de reactivi a fost de 100%;

Sensibilitatea trusei de reactivi a fost determinată în studiul panourilor internaționale de seroconversie Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences), cat. nr. PRB 903, PRB 904, PRB 909, PRB 912, PRB 916, PRB 917, PRB 918, PRB 919, PRB 921, PRB 923, PRB 924, PRB 927, PRB 928, PRB 932.

Trusa de reactivi detectează anticorpi la HIV-1 în serurile unui panou standard care conține anticorpi la HIV-1 ("Standard AT (+) HIV-1", Nr. FSR 2007/00953 din 25.10.2007), detectează anticorpi la HIV -2 în serurile unui panou standard care conține anticorpi la HIV-2 ("Standard AT (+) HIV-2", Nr. FSR 2007/00953 din 25.10.2007). Sensibilitate - 100%.

Certificat de înregistrare nr. FSR 2010/07958 din 13 iulie 2011 (validitatea nu este limitată)

Compoziţie:

• Imunosorbent. Benzi dintr-o membrană de nitroceluloză albă cu proteine ​​individuale HIV-1 (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17) adsorbite pe acestea prin metoda electrotransferului și aplicate pe bandă cu o peptidă sintetică HIV-2, un analog al proteinei gp36 și IgG anti-umană (control intern) - 18 buc;
• K- - ser de control negativ. Serul din sânge uman, care nu conține anticorpi împotriva HIV-1,2, HCV, antigen HIV, HBsAg, este inactivat prin încălzire la 560C; lichid limpede galben deschis - 1 tub (0,08 ml). Conține conservanți: timerosal și azidă de sodiu;
• K + - ser control pozitiv. Ser de sânge uman care conține anticorpi la HIV-1,2 (titru nu mai puțin de 1: 10000), fără HBsAg, antigen HIV, anticorpi la HCV, inactivat prin încălzire la 560C; lichid limpede galben deschis - 1 tub (0,08 ml).Contine conservanti: timerosal si azida de sodiu;
• K + sl - ser de control slab pozitiv. Ser de sânge uman care conține anticorpi la HIV-1,2 (titru nu mai mult de 1: 200), care nu conține HBsAg, antigen HIV, anticorpi la HCV, inactivat prin încălzire la 560C; lichid limpede galben deschis - 1 tub (0,08 ml). Conține conservanți: timerosal și azidă de sodiu;
• RROKk (x10) - soluție de diluție pentru probe și conjugat. Concentrat - tampon Tris care conține ser normal de capră pretratat; lichid gri opac - 1 flacon (10 ml). Conține un conservant: timerosal;
• PRk (x20) - soluție de spălare. Concentrat - tampon Tris care conține Tween-20; lichid transparent incolor - 1 flacon (70 ml). Conține un conservant: timerosal;
• Conjuga. Anticorpi de capră anti-IgG uman conjugați la fosfatază alcalină; lichid limpede, incolor - 1 tub (0,06 ml);
• Substrat (soluție de colorare). O soluție de fosfat de 5-bromo-4-fluoro-indolil (BCIP) și tetrazoliu nitro-albastru (NBT); lichid limpede galben deschis - 1 flacon (50 ml);
• Pudră de tamponare imunitară. Lapte praf degresat - praf amorf alb sau galben deschis - 5 pachete x 1g;
• O farfurie cu capac pentru stabilirea unei reacții - 2 bucăți;
• Pensetă din plastic - 1 bucată.

ELISA în fază solidă - o variantă a testului, când una dintre componentele răspunsului imun (antigen sau anticorp) este sorbită pe un purtător solid, de exemplu, în godeurile plăcilor de polistiren. Componentele sunt identificate prin adăugarea de anticorpi sau antigeni marcați. Dacă rezultatul este pozitiv, culoarea cromogenului se schimbă. De fiecare dată după adăugarea următoarei componente, reactivii nelegați sunt îndepărtați din godeuri prin spălare,

La determinarea anticorpilor (figura din stânga), serul sanguin al pacientului, serul antiglobulinic marcat cu o enzimă și un substrat/cromogen pentru enzimă sunt adăugate secvenţial în godeurile plăcilor cu antigenul sorbit.

II. La determinarea antigenului (figura din dreapta), antigenul este introdus în godeuri cu anticorpii adsorbiți (de exemplu, serul sanguin cu antigenul dorit), serul de diagnostic împotriva acestuia și anticorpii secundari (împotriva serului de diagnostic) marcați cu se adaugă enzima și apoi substratul/cromogenul pentru enzimă.

ELISA competitivă pentru a determina antigene: antigenul țintă și antigenul marcat cu enzimă concurează unul cu celălalt pentru legarea unui număr limitat de anticorpi ai serului imun.

Un alt test este un ELISA competitiv pentru determinarea anticorpilor: anticorpii țintă și anticorpii marcați cu enzime concurează între ei pentru antigenii adsorbiți pe faza solidă.

Imunoblotting- o metodă foarte sensibilă pentru detectarea proteinelor bazată pe o combinație de electroforeză și ELISA sau RIA. Imunoblotting este folosit ca metodă de diagnosticare a infecției cu HIV etc.

Antigenii patogeni sunt separați prin electroforeză în gel de poliacrilamidă, apoi transferați din gel pe hârtie activată sau membrană de nitroceluloză și dezvoltați folosind ELISA. Firmele produc astfel de benzi cu antigen. Pe aceste benzi se aplică serul pacientului. . Apoi, după incubare, anticorpii nelegați ai pacientului sunt spălați și se aplică serul împotriva imunoglobulinelor umane marcate cu enzima. . Complexul [antigen + anticorp pacient + anticorp Ig anti-uman] format pe bandă este detectat prin adăugarea unui substrat cromogen care își schimbă culoarea sub acțiunea unei enzime.

52. Interferoni, natură. Metode de obținere și utilizare.

interferonul aparține importantelor proteine ​​protectoare ale sistemului imunitar. S-a descoperit în studiul interferenței virusurilor, adică fenomenul când animalele sau culturile celulare infectate cu un virus au devenit insensibile la infectarea cu un alt virus. S-a dovedit că interferența se datorează proteinei rezultate, care are o proprietate antivirală protectoare. Această proteină a fost numită interferon.

Interferonul este o familie de proteine ​​glicoproteice care sunt sintetizate de celulele sistemului imunitar și de țesutul conjunctiv. În funcție de ce celule este sintetizat interferonul, se disting trei tipuri: interferoni α, β și γ.

interferon alfa produs de leucocite și se numește leucocite; interferonul beta numit fibroblastic, deoarece este sintetizat de fibroblaste - celule ale țesutului conjunctiv și interferon gamma- imun, deoarece este produs de limfocitele T activate, macrofage, celule natural killer, adică celule imunitare.

Interferonul este sintetizat constant în organism, iar concentrația acestuia în sânge este menținută la aproximativ 2 UI/ml (1 unitate internațională - ME este cantitatea de interferon care protejează cultura celulară de 1 virus CPE 50). Producția de interferon crește brusc atunci când este infectat cu viruși, precum și atunci când este expus la inductori de interferon, de exemplu, ARN, ADN, polimeri complecși. Astfel de inductori de interferon se numesc interferonogene.

Pe lângă efectul antiviral, interferonul are protecție antitumorală, deoarece întârzie proliferarea (multiplicarea) celulelor tumorale, precum și activitatea imunomodulatoare, stimulând fagocitoza, celulele natural killer, reglează producția de anticorpi de către celulele B, activând expresia principalelor celule. complex de histocompatibilitate.

Mecanism de acțiune interferonul este complex. Interferonul nu afectează direct virusul în afara celulei, ci se leagă de receptorii speciali ai celulelor și afectează procesul de reproducere a virusului în interiorul celulei în stadiul sintezei proteinelor.

Utilizarea interferonului... Acțiunea interferonului este cu atât mai eficientă, cu atât mai devreme începe să fie sintetizat sau pătrunde în organism din exterior. Prin urmare, este utilizat în scopuri profilactice pentru multe infecții virale, cum ar fi gripa, precum și cu scop terapeutic in infectiile virale cronice precum hepatita parenterala (B, C, D), herpesul, scleroza multipla etc. Interferonul da rezultate pozitive in tratarea tumorilor maligne si a bolilor asociate cu imunodeficienta.

Interferonii sunt specifici speciei, adică interferonul uman este mai puțin eficient pentru animale și invers. Cu toate acestea, această specificitate de specie este relativă.

Obține interferon... Interferonul se obține în două moduri: a) prin infectarea leucocitelor sau limfocitelor umane cu un virus sigur, în urma căruia celulele infectate sintetizează interferon, care este apoi izolat și proiectat din el preparate de interferon; b) inginerie genetică - prin creșterea în condiții industriale a tulpinilor recombinante de bacterii capabile să producă interferon. De obicei, ei folosesc tulpini recombinante de pseudomonas, Escherichia coli cu gene de interferon încorporate în ADN-ul lor. Interferonul modificat genetic se numește recombinant. În țara noastră, interferonul recombinant a primit denumirea oficială „Reaferon”. Producerea acestui medicament este în multe privințe mai eficientă și mai ieftină decât cea leucocitară.

Interferonul recombinant a găsit o largă aplicație în medicină ca agent profilactic și terapeutic pentru infecții virale, neoplasme și imunodeficiențe.

Descriere

Metoda de determinare Imunoblot.

Material de studiu Ser de sânge

Vizita la domiciliu disponibila

Anticorpii antinucleici sunt o familie de autoanticorpi care se leagă de acizii ribonucleici și proteinele asociate acestora. Acestea apar la mai mult de 90% dintre pacienții cu boli difuze ale țesutului conjunctiv și sunt, de asemenea, adesea observate în bolile hepatice autoimune și o serie de alte afecțiuni. Până în prezent, au fost caracterizate aproximativ 200 de soiuri din această familie de autoanticorpi, dar nu toate pot fi utilizate în practica clinică.

Imunoblot de anticorpi antinucleari permite într-un singur test să se studieze simultan 15 tipuri principale de anticorpi antinucleari, ceea ce asigură diagnostic diferentiat boli reumatismale sistemice majore. Fiecare tip de autoanticorpi detectat prin imunblot este de obicei observat la pacienții cu un tablou clinic caracteristic, prin urmare, spectrul de autoanticorpi permite nu numai diagnosticarea bolii, ci și stabilirea riscului de apariție a anumitor manifestări clinice.

Imunoblot de anticorpi antinucleari este recomandabil să fie utilizat în a doua etapă a examenului serologic atunci când rezultat pozitiv alte teste care indică prezența anticorpilor antinucleari în serul persoanei examinate. Aceste teste includ determinarea anticorpilor antinucleari (screening ELISA), detectarea factorului antinuclear (ANF) pe celulele Hep2 (), anticorpi antinucleari și anticorpi la antigenul nuclear extractibil (ENA).

Metoda de imunobblotare a anticorpilor antinucleari în diagnosticul bolilor reumatice sistemice se caracterizează printr-o specificitate clinică ridicată. Dar specificitatea anticorpilor antinucleari, chiar și la titruri mari de ANP (), nu este întotdeauna posibil de stabilit, deoarece o serie de antigeni de anticorpi antinucleari rămân încă necaracterizate. Un rezultat negativ al imunoblot în acest caz nu exclude diagnosticul bolilor reumatice sistemice. O serie de anticorpi antinucleari pot fi detectați folosind imunoblot - un panou de autoanticorpi specifici miozitei () și imunoblot - un panou de autoanticorpi în sclerodermie ().

Literatură

1. Lapin S.V. Totolian A.A. Diagnosticul de laborator imunologic al bolilor autoimune / Editura „Chelovek”, Sankt Petersburg - 2010. 272 ​​​​p.
2. E. L. Nasonov, E. N. Alexandrova Standarde moderne pentru diagnosticarea de laborator a bolilor reumatice. Ghiduri clinice/ BHM, M - 2006.
3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference / PABST, Dresda - 2011.300 p.
4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference / PABST, Dresda - 2007.300 p.
5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies Ed. a 2-a/ Elsevier Science - 2006.862 p.
6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Criterii de diagnosticare în bolile autoimune / Humana Press - 2008.598 p.
7. Instrucțiuni pentru trusa de reactivi.

Pregătirea

Este de preferat să reziste la 4 ore după ultima masă, neexistând cerințe obligatorii.

Indicații pentru programare

Testul este indicat pentru diagnosticul și diagnosticul diferențial al următoarelor afecțiuni:

• lupus eritematos sistemic;
• lupus cutanat subacut și alte tipuri de lupus cutanat;
• boala mixtă a țesutului conjunctiv;
• sindromul Sjogren și bolile asociate;
• sclerodermie difuză și localizată, sindrom CREST;
• miopatii inflamatorii (polimiozită și dermatomiozită);
• artrită cronică juvenilă;
• hepatită autoimună;
• ciroză biliară primară și colangită sclerozantă;
• utilizarea acestui test este indicată atunci când sunt detectate titruri mari de factor antinuclear, anticorpi antinucleari, anticorpi la antigen nuclear extractibil, anticorpi la ADN, anticorpi la nucleozomi și anticorpi antifosfolipidici.

Interpretarea rezultatelor

Interpretarea rezultatelor testelor conține informații pentru medicul curant și nu constituie un diagnostic. Informațiile din această secțiune nu pot fi utilizate pentru autodiagnosticare și automedicație. Un diagnostic precis este pus de către un medic, folosind atât rezultatele acestei examinări, cât și informațiile necesare din alte surse: anamneză, rezultatele altor examinări etc.

Unități de măsură: test calitativ, rezultatul este prezentat sub forma „găsit” sau „negăsit”.

Atunci când se găsește o bandă care caracterizează prezența unui anumit tip de anticorpi, intensitatea culorii benzii este descrisă suplimentar de numărul de plusuri ("încrucișări") pentru fiecare dintre tipurile de anticorpi identificate. O creștere a gradului de pozitivitate reflectă indirect conținutul și afinitatea autoanticorpilor.

Valori de referință: anticorpi la Sm, RNP / Sm, SS-A (60 kDa), SS-A (52 kDa), SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENP-B, dsDNA, Histonă, Nucleozom , Rib P, AMA-M2, Jo-1 nu a fost găsit.

Rezultatul determinării autoanticorpilor este prezentat în încrucișări pentru fiecare antigen corespunzător. O creștere a gradului de seropozitivitate reflectă indirect conținutul și afinitatea autoanticorpilor. Variante ale rezultatului evaluării seropozitivității sunt prezentate mai jos:

1. Nu au fost detectați anticorpi.
2. +/- - rezultat limită;
3. + - conținut scăzut de autoanticorpi la un antigen specific;
4. ++ - conținutul mediu de autoanticorpi la un antigen specific;
5. +++ - conținut ridicat de autoanticorpi la un antigen specific.

Principalele boli asociate cu detectarea anticorpilor antinucleari:

blotting imun(Western Blot, Western Blot)- combină testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) cu transferul electroforetic preliminar al antigenelor virale pe o bandă (bandă) de nitroceluloză.

În acest frumos nume științific, „blot” este cel mai probabil tradus ca „blot”, iar „western” - ca „western” reflectă direcția de răspândire a acestui „blot” pe hârtie de la stânga la dreapta, adică pe o zonă geografică. harta corespunde cu direcția de la vest la est.”. Esența metodei „imunoblot” este că reacția imunosorbantă legată de enzime se realizează nu cu un amestec de antigene, ci cu antigene HIV, distribuite anterior prin imunoforeză în fracții situate în funcție de greutatea moleculară de pe suprafața nitrocelulozei. membrană. Ca urmare, principalele proteine ​​ale HIV, purtători de determinanți antigenici, sunt distribuite pe suprafață sub formă de benzi separate, care se manifestă în timpul reacției imunosorbente legate de enzime.

Imunoblot include mai multe etape:

Pregătirea benzii. Virusul imunodeficienței (HIV), purificat anterior și degradat în componentele sale constitutive, suferă electroforeză, în timp ce antigenii care fac parte din HIV sunt separați prin greutate moleculară. Apoi, prin blotting (analog cu stoarcerea excesului de cerneală pe un blotter), antigenele sunt transferate pe o bandă de nitroceluloză, care conține acum un spectru de benzi antigenice care este invizibilă pentru ochi, care este caracteristică HIV.

Exemplu de cercetare. Materialul de testat (ser, plasma sanguină a pacientului etc.) este aplicat pe banda de nitroceluloză, iar dacă proba conține anticorpi specifici, atunci aceștia se leagă de benzi antigenice strict corespunzătoare (complementare). Ca urmare a manipulărilor ulterioare, rezultatul acestei interacțiuni este vizualizat - făcut vizibil.

Interpretarea rezultatului. Prezența benzilor în anumite zone ale plăcii de nitroceluloză confirmă prezența anticorpilor la antigenele HIV strict definiți în serul studiat.

Banda A - Control pozitiv

Bara B - Control slab pozitiv

Banda C - Control negativ

Banda D - Probă pozitivă (anticorpi la HIV-1 detectați)

În prezent, imunblotting (immunoblot) este principala metodă de confirmare a prezenței anticorpilor specifici virusului în serul studiat. În unele cazuri de infecție cu HIV, înainte de dezvoltarea seroconversiei, anticorpii specifici sunt detectați mai eficient prin blotting imun decât ELISA. În studiul prin metoda blotting imun, s-a constatat că anticorpii la gp 41 sunt detectați cel mai adesea în serurile bolnavilor de SIDA, iar detectarea p24 la persoanele examinate în scop profilactic necesită studii suplimentare pentru prezența infecției cu HIV. Sistemele de testare pentru blotting imun bazate pe proteine ​​recombinante modificate genetic s-au dovedit a fi mai specifice decât sistemele convenționale bazate pe lizat viral purificat. Când se utilizează un antigen recombinant, nu se formează o bandă îngustă difuză, ci o bandă îngustă de antigen, care este ușor accesibilă pentru înregistrare și evaluare.

Serurile persoanelor infectate cu HIV-1 prezintă anticorpi la următoarele proteine ​​de bază și glicoproteine ​​- proteine ​​structurale ale anvelopei (env) - gp160, gp120, gp41; nuclee (gag) - p17, p24, p55, precum și enzime virale (pol) - p31, p51, p66. Pentru HIV-2, anticorpii la env sunt tipici - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol - p68.

Printre metode de laborator, necesar pentru stabilirea specificității reacției, cea mai recunoscută este detectarea anticorpilor la proteinele anvelopei HIV-1 - gp41, gp120, gp160, și HIV-2 - gp36, gp105, gp140.

OMS consideră seruri pozitive în care anticorpii la oricare două glicoproteine ​​HIV sunt detectați prin metoda imun blotting. Conform acestor recomandări, dacă există o reacție doar cu una dintre proteinele învelișului (gp 160, gp 120, gp 41) în combinație sau fără o reacție cu alte proteine, rezultatul este considerat îndoielnic și se recomandă retestarea folosind un kit de la alta serie sau de la alta firma. Dacă și după aceasta rezultatul rămâne îndoielnic, se recomandă observarea timp de 6 luni (studii după 3 luni).

Prezența unei reacții pozitive cu antigenul p24 poate indica o perioadă de seroconversie, deoarece anticorpii la această proteină anume apar uneori primii. În acest caz, se recomandă, în funcție de datele clinice și epidemiologice, să se repete studiul cu o probă de ser prelevată cel puțin 2 săptămâni mai târziu, și exact așa este atunci când sunt necesare seruri pereche pentru infecția cu HIV.

Reacțiile pozitive cu proteinele gag și pol fără reacție cu proteinele env pot reflecta o etapă de seroconversie timpurie și pot indica, de asemenea, infecția cu HIV-2 sau o reacție nespecifică. Persoanele cu astfel de rezultate după testarea HIV-2 sunt reexaminate după 3 luni (în decurs de 6 luni).