مرض الزهري هو مرض معد يسببه اللولبية اللولبية الشاحبة ، وهو عرضة للتطور التدريجي. مسار مزمن، مع فترة واضحة من الأعراض السريرية.

إن غلبة طريق الانتقال الجنسي على الاتصال وطريق المشيمة يضع هذا المرض في عدد من الأمراض المنقولة جنسياً (الأمراض المنقولة جنسياً ، الأمراض المنقولة بالاتصال الجنسي). بالإضافة إلى طرق انتقال العدوى هذه ، يلعب المسار الاصطناعي (من "المصطنع" اللاتيني - المصطنع) دورًا خاصًا.

إنه نموذجي للمؤسسات الطبية ، ويتم تنفيذه بشكل أساسي في بيئة المستشفى. تحدث العدوى أثناء عمليات نقل الدم ، والعمليات الجراحية المختلفة ، وطرق التشخيص الغازية.

على الرغم من الحجر الصحي للدم المتبرع به ، لا تزال مشكلة اكتشاف مرض الزهري لدى المتبرعين في مراحل مختلفة من المرض قائمة.

لهذا السبب تدابير التشخيصفي مرض الزهري ، تتطلب التوحيد القياسي ، وإدخال طرق تعريف جديدة حساسة وغنية بالمعلومات ، بالإضافة إلى تقليل الأخطاء وسوء تفسير نتائج الاختبار.

عرض الكل

1. تصنيف طرق التشخيص المختبري

تشخيص مرض الزهري له بعض الخصائص ويختلف عن تشخيص الالتهابات البكتيرية الأخرى. يتسبب التركيب المعقد والخصائص المستضدية للولبية الشاحبة في حدوث أخطاء في تفسير نتائج التفاعلات المصلية.

يتم تقديم فحص دم لمرض الزهري لثلاث مجموعات رئيسية من المرضى:

1. 1 الفحص والفحص السريري للمجموعات السكانية (بما في ذلك الحمل ، والتسجيل في عيادات ما قبل الولادة ، والتوظيف وتسجيل السجل الطبي ، وما إلى ذلك).
2. 2 الفحص في المجموعات المعرضة للخطر (ممارسة الجنس غير المحمي مع شخص مصاب بمرض الزهري ، والأشخاص بعد ممارسة الجنس القسري ، والمصابين بفيروس نقص المناعة البشرية ، وما إلى ذلك).
3. 3 الأفراد الذين يعانون من أعراض أو يشتبه بعدوى الزهري.

كل شىء طرق المختبرتنقسم مشروطًا إلى مباشرة وغير مباشرة.

1.1 الطرق المباشرة

1. 1 التعرف على اللولبية الشاحبة في حقل مظلم (الفحص المجهري للمجال المظلم).
2. 2 إصابة حيوانات التجارب (الزراعة في حيوانات المختبر).
3. 3 PCR (تفاعل البلمرة المتسلسل).
4. 4 ـ مسبار الحمض النووي أو التهجين احماض نووية.

1.2 طرق غير مباشرة

الاختبارات المصلية هي طرق التشخيص المختبري، استنادًا إلى اكتشاف الأجسام المضادة (المُختصرة AT) لمستضدات اللولبية الشاحبة (والمختصرة باسم AH). إنها ضرورية لتأكيد التشخيص.

1. 1 الاختبارات غير اللولبية:
   • تفاعل واسرمان (RSK) ؛
   • تفاعل الترسيب الدقيق (MR ، RMP) ونظائرها ، والتي ترد أدناه ؛
   • اختبار ريجين البلازما السريع (RPR ، RPR) ؛
   • اختبار مصل التولويدين الأحمر (TRUST) ؛
   • الاختبار غير اللولبي لمختبر أبحاث الأمراض المنقولة جنسياً - VDRL.
2. 2 اختبارات اللولبيات:
   • منع حركة اللولبية الشاحبة - الضلع / RIT ؛
   • P-tion of immunofluorescence - RIF ، FTA (تخفيف مصل RIF-10 ، RIF-200 ، RIF-abs) ؛
   • ف نشوئ التراص الدموي السلبي (RPHA ، TRPGA ، TPHA) ؛
   • مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA ، EIA) ؛
   • مناعي.



الشكل 1 - خوارزمية للتشخيص المصلي لمرض الزهري

1.3 طرق علم الأنسجة

يتم اختزال هذه الطرق لتحديد ملامح نسيجية مظاهر الزهري. يتم الانتباه إلى تعقيدات هيكل القرحة الصلبة. ومع ذلك ، فإن التشخيص التفريقي للعدوى باستخدام الأنسجة أمر صعب للغاية. يتم استخدام علم الأنسجة مع الاختبارات المعملية والسريرية الأخرى.

2. الفحص المجهري للولبية الشاحبة في حقل مظلم

تعتمد هذه الطريقة على الكشف المباشر عن اللولبيات الشاحبة في مادة الاختبار باستخدام المجهر والأجهزة الخاصة (غالبًا ما يتم تفريغ التقرحات والقروح ، وغالبًا ما يكون السائل النخاعي والركائز الأخرى).

بمساعدة الخدش والكشط والضغط من التآكل والعيوب التقرحية ، يتم الحصول على إفرازات ، ثم يتم فحص المستحضر المحضر في المجهر.

عادة ما يتم الكشف عن اللولبيات الشاحبة في مستحضر تم الحصول عليه من القرحة ، من بؤر الزهري الثانوي الطازج والمتكرر الثانوي ، وكذلك من العقد الليمفاوية ، المشيمة.

استنادًا إلى ظاهرة توهج الجزيئات الصغيرة في حقل مظلم عندما يضرب شعاع من الضوء (ظاهرة تيندال) ، تسمح لك الطريقة تمامًا بالتفريق بين العامل المسبب لمرض الزهري وبين اللولبيات الأخرى على أساس الاختلافات المورفولوجية والاختلافات في طرق حركة البكتيريا.

بالنسبة للفحص المجهري ، يتم استخدام مكثف خاص ذو مجال مظلم ذي دقة بصرية مناسبة. يتم الحصول على المستحضر بطريقة القطرة المكسرة (يتم وضع قطرة من المادة على شريحة زجاجية نظيفة منزوعة الشحوم ومغطاة بغطاء رفيع للغاية).

يتم إسقاط زيت الغمر على زجاج الغطاء. عن طريق تدوير الأنبوب وتحويل العدسة المكبرة ، يتم ضبط الإضاءة المرغوبة.

في المجال المظلم من المجهر ، تم العثور على خلايا الدم والخلايا الظهارية والعامل المسبب لمرض الزهري. تبدو اللولبية الشاحبة على شكل حلزوني ، رفيع جدًا ، ينبعث منها لون فضي ، مع حركات سلسة.



الشكل 2 - الفحص المجهري للمجال المظلم كطريقة لتصور اللولبيات الشاحبة في مادة الاختبار. مصدر التوضيح - CDC

يجب تمييز اللولبية الشاحبة عن اللولبيات الأخرى ، بما في ذلك Tr. refringens ، والتي يمكن العثور عليها في البلعوم والغشاء المخاطي للأعضاء التناسلية. تصنع هذه البكتيريا حركات فوضوية ، ولها تجعيد واسع وغير متماثل وخشن إلى حد ما. بالإضافة إلى ذلك ، تتميز اللولبية الشاحبة عن Tr. Microdentium ، آر. Buccalis و Tr. فينسنتي.

في بعض الأحيان يتم استكمال تصور البكتيريا في حقل مظلم من خلال استجابة مضان. لهذا الغرض ، تتم إضافة الأجسام المضادة للولبيات الموصوفة بصبغة الفلورسنت إلى المادة الأصلية. يشكل هذا معقدًا يسمى الجسم المضاد للمستضد (يُختصر باسم AG-AT) ، وهو كائن للفحص باستخدام مجهر الفلورسنت.

3. طريقة تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR)

تم تطوير تفاعل البوليميراز المتسلسل PCR في عام 1991 للكشف عن جزيء الحمض النووي الريبي منقوص الأكسجين (DNA) للورم اللولبي الباهت ، وهو حساس ومحدّد للغاية ، ويسمح لك باكتشاف شظايا الحمض النووي للعامل الممرض.

يعتمد هذا التحليل على نسخ مقاطع قصيرة من DNA pallidum spirochete ، والتي تلبي المعايير المحددة والموجودة في العينة. كل هذا يتم في المختبر. يتم إجراء التفاعل في جهاز - مكبر للصوت ، والذي يوفر فترة زمنية لدورات درجة الحرارة. يحدث التبريد ، يليه تسخين الأنابيب بخطأ 0.1 درجة مئوية.

يتم تسخين قالب الحمض النووي لمدة دقيقتين عند درجة حرارة 92-98 درجة مئوية (يتم استخدام أقصى درجة حرارة إذا كان البوليميراز قابلًا للحرارة). عند تسخينها ، تتباعد خيوط الحمض النووي بسبب انهيار الروابط الهيدروجينية بينها. في خطوة التلدين ، يتم تقليل درجة حرارة التفاعل لربط التمهيدي بالقالب المفرد الذي تقطعت به السبل.

يستغرق التلدين حوالي 30 ثانية ، يتم خلالها تصنيع مئات النيوكليوتيدات. يتم نسخ الجزيئات المصنعة حديثًا بواسطة البوليميراز ، ونتيجة لذلك ، يتم مضاعفة شظايا محددة من حمض الديوكسي ريبونوكلييك. يتم إجراء الكشف اللاحق عن الشظايا باستخدام هلام أجار الكهربائي.

لا يزال تشخيص PCR لمرض الزهري تجريبيًا بطبيعته ، ولكن يكون له ما يبرره عند اكتشاف عدوى خلقية ، في حالات التشخيص الصعبة ، أو مع وجود حد أدنى من محتوى اللولبيات الشاحبة في مادة الاختبار.

4-تهجين الحمض النووي

يتم إجراء تهجين الحمض النووي في المختبر ويستند إلى الجمع الكامل أو الجزئي لجزيئين من الحمض النووي أحادي الجديلة في جزيء واحد. في حالة التطابق الكامل للشظايا التكميلية ، يكون الاتحاد سهلًا. إذا كانت المطابقة التكميلية جزئية ، فإن توحيد خيوط الحمض النووي يكون بطيئًا. بناءً على توقيت اندماج الخيوط ، يمكن تقييم درجة التكامل.

عندما يتم تسخين الحمض النووي في محلول عازل ، يتم تكسير الروابط الهيدروجينية بواسطة القواعد النيتروجينية ، والتي تكون مكملة نتيجة لذلك ، تتباعد سلاسل الحمض النووي. بعد ذلك ، يتم الحصول على مستحضر من اثنين من الأحماض النووية غير المؤكدة. عند التبريد ، يتم إعادة تنظيم المناطق التي تقطعت بهم السبل المفردة. يتم تشكيل ما يسمى هجين الحمض النووي.

تسمح الطريقة بتقييم وتحليل معدل التلدين ، مع مراعاة ميزات (أوجه التشابه والاختلاف) للحمض النووي بين الأنواع أو داخل الأنواع.

يتكون استخدام مسبار الحمض النووي من تهجين جزء من الحمض النووي المسمى مع منطقة معينة من الحمض النووي لتحديد تسلسل النوكليوتيدات التكميلية. تستخدم مجموعة من الذرات غير المشبعة (الكروموفورات) أو النظائر المشعة لتسمية المسبار.

يستخدم مسبار الحمض النووي للكشف غير المتجانس والمتجانس عن الأحماض النووية. يتمثل دور المسبار في تحديد المناطق التي حدث فيها اندماج مسبار الهدف. يتميز الاكتشاف في نظام متجانس بأنه يسمح لك بتتبع تهجين جزيئات الحمض النووي في الوقت الفعلي.

يتم تقليل جوهر الطريقة إلى تمسخ الحمض النووي وإعادة التشبع (إعادة توحيد خيوط الحمض النووي). تنتهي عملية إعادة تشكيل الحمض النووي ومسبار الحمض النووي بتكوين "هجين".

يتم تهجين تسلسلات حمض نووي محددة باستخدام مسبار DNA ، وبالتالي يتم تحديدها والسماح بتقدير كمية الحمض النووي في مادة الاختبار.

5. إصابة حيوانات المختبر

تسمح الحساسية العالية للأرانب تجاه اللولبية الشاحبة (حوالي 99.9٪) باستخدامها في تشخيص عدوى الزهري.

يتم إجراء إصابة الأرانب في مراكز الأبحاث وهي "المعيار الذهبي" لتقييم حساسية الطرق الأخرى.

دعنا نعود إلى الاختبارات اللولبية وغير اللولبية ، حيث يتم استخدامها في أغلب الأحيان. دعونا ننظر في مزاياها وعيوبها ، وكذلك الأخطاء في تفسير النتائج.

6. الاختبارات غير اللولبية

هذه هي اختبارات التعريف الأجسام المضادة IgGو IgM لمستضد كارديوليبين موحد. عيبهم الكبير هو خصوصيتهم المنخفضة نسبيًا.

التكلفة المنخفضة وسهولة الأداء تجعل هذه الاختبارات مؤهلة للاختبارات التشخيصية اللازمة لإنشاء التشخيص الأولي والفحص في السكان.

هي الاختبارات غير اللولبية التي يتم اجتيازها عند تسجيل كتاب طبي ، والتقدم لوظيفة ، والتسجيل في عيادة ما قبل الولادة.

سلبيات:

1. 1 الحد الأدنى من الحساسية في مرحلة الزهري الأولي 70٪ ؛
2. 2 الحد الأدنى من الحساسية في مرحلة مرض الزهري المتأخر - 30٪ ؛
3. 3 احتمال وجود نتائج سلبية كاذبة وإيجابية كاذبة ؛
4. 4 تعقيد تنفيذ RSK.

مزايا:

1. 1 تكلفة منخفضة نسبيًا لإنتاج الاختبار ؛
2. 2 الحصول على استجابة سريعة ؛
3. 3 إمكانية استخدامها للفحص.

يمكن الحصول على عينات إيجابية كاذبة أو إيجابية ضعيفة في الحالات التالية:

1. 1 انتهاك تقنية التنفيذ ، عند حظر مجمع AG-AT.
2. 2 وجود أمراض المناعة الذاتية لدى المريض (التهاب المفاصل الروماتويدي ، الروماتيزم ، تصلب الجلد ، الذئبة الحمامية الجهازية ، الساركويد ، إلخ).
3. 3 الأورام الخبيثة.
4. 4 ـ الالتهابات الفيروسية والبكتيرية.
5. 5 أمراض الغدد الصماء ( التهاب الغدة الدرقية المناعي الذاتي، داء السكري).
6. 6 الحمل.
7. 7 شرب الكحول.
8. 8 استقبال الأطعمة الدسمة.
9. 9 سن الشيخوخة.

كما ترى من القائمة ، هناك أسباب كافية للنتيجة الخاطئة. لذلك ، يجب على المرء أن يكون حذرًا جدًا منه. ضع في اعتبارك ، جنبًا إلى جنب مع RSK ، عينتين أخريين. هذا هو تفاعل ترسيب دقيق و VDLR (تعديله).

7. رد فعل مكمل الربط (RSK ، Wasserman ، RW)

هذا اختبار يعتمد على قدرة المكمل على الارتباط بمجمعات AG-AT. يتم تحديد المعقد المتشكل باستخدام نظام الانحلالي. يزيد مستضد كارديوليبين بشكل ملحوظ من حساسية العينة.

تفاعل كولمر حساس أيضًا ، والذي يتكون من الأداء في ظروف درجات حرارة مختلفة. لذلك ، تبدأ المرحلة الأولى من تفاعل كولمر عند درجة حرارة 20 درجة مئوية لمدة نصف ساعة ، والمرحلة الثانية عند درجة حرارة 4-8 درجة مئوية لمدة 20 ساعة. خلال هذا الوقت ، يحدث الربط التكميلي.

عند إجراء RSK ، من الممكن الحصول على نتائج إيجابية حادة. ربما يكون السبب هو ارتفاع عيار الأجسام المضادة في مصل الدم غير المخفف. في هذه الحالة ، يتم أخذ العينات بجرعات متناقصة.

للتمييز بين مراحل مرض الزهري وتقييم فعالية العلاج المضاد للزهري ، يتم تحديد كمية AT في المصل.

يتم تقييم إيجابية العينة باستخدام التهجينات ، ويشار أيضًا إلى تخفيف المصل في تفاعلات Wasserman و Colmer و Kann.

8. تفاعل ترسيب دقيق

نظرًا لأن الجهد المبذول في إجراء الاختبارات المذكورة أعلاه كبير ، فقد تم تطوير طريقة سريعة للتشخيص المصلي لمرض الزهري من أجل اتساع نطاق تغطية المجموعات السكانية المختلفة من خلال الفحص الطبي ، ما يسمى بالطريقة السريعة - تفاعل ترسيب دقيق (يُختصر بـ MR ، RMP).

يتم إجراؤه باستخدام مستضد كارديوليبين والسواغات. ميزته هي جمع الدم المحيطي للبحث. يؤدي هذا إلى تسريع كل من التقنية نفسها وعمل فنيي المختبرات بشكل كبير.



الشكل 2 - تفاعل الترسيب الصغير (مخطط)

بالنسبة للتصوير بالرنين المغناطيسي ، يلزم وجود بلازما أو مصل دم معطل للمريض (تحتوي على أجسام مضادة). ثم يتم وضع البلازما في الآبار المحددة. بعد ذلك ، يتم إضافة قطرة من مستضد كارديوليبين إلى مادة الاختبار ، ويتم خلطها ورجها. نتيجة لذلك ، تظهر قشور مميزة في مصل الشخص المصاب ، متفاوتة الشدة.

هذا اختبار جودة. يستخدم التحديد الكمي 10 تخفيفات من المصل الموضوعة في 10 آبار مناسبة. مع MR النوعي ، يشار إلى الإجابة في شكل تقاطعات (موجب) أو ناقص ، مع الكمي ، يشار إلى عيار الجسم المضاد (1: 2 ، 1: 4 ، وهكذا).

يعتبر وجود الرقائق استجابة إيجابية أو إيجابية ضعيفة. من الممكن أيضًا ظهور التندب في حالة عدم وجود مرض ، وبالتالي ، يتم إجراء التقييم النهائي للنتيجة التي تم الحصول عليها بعد دراسة تحكم أو تفاعلات أخرى (RIBT ، RIF ، ELISA ، RPGA).

9.VDRL

تعتبر طريقة إجراء تفاعل مع مستضد شحمي (AG) ، التي أوصت بها منظمة الصحة العالمية ، الأفضل بين الاختبارات القياسية الأخرى غير اللولبية. تم تطويره في الولايات المتحدة الأمريكية وجورجيا في مختبرات أبحاث الأمراض العامة.

كان اختصار المؤسسة بمثابة اسم للعينة - VDRL. VDRL هو تعديل MP. يتم تعطيل مصل مريض الزهري ويوضع على شريحة زجاجية. يتكون المستضد المستخدم من كارديوليبين وكوليسترول وليسيثين بنسب متفاوتة. يتم تسجيل الإجابة على الفور تقريبًا.

يحدث التندف المميز في وجود الأجسام المضادة في المصل. يصبح المصل متفاعلًا بعد 4 أسابيع من الإصابة. لتقييم كمية الأجسام المضادة ، يتم تخفيف المصل بشكل أولي أضعافا مضاعفة.

مزايا VDRL:

1. 1 حساسية عالية نسبيًا ؛
2. 2 خصوصية عالية نسبيًا ؛
3. 3 سهولة التنفيذ ؛
4. 4 الكواشف منخفضة التكلفة.
5. 5 الحصول على استجابة سريعة.

عيب VDRL هو نسبيًا تردد عالينتائج إيجابية خاطئة.

أسبابها كلها نفس الأمراض المذكورة أعلاه.

يتم إجراء اختبارات اللولبيات باستخدام مستضدات محددة للولبية الشاحبة. فهي ضرورية وواجبة للإنشاء التشخيص النهائي... هذا هو تفاعل التألق المناعي (RIF) ، تفاعل التراص الدموي غير المباشر (RPHA) ، مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) ، إلخ.

بعد نتيجة إيجابية للاختبار غير اللولبي (RPR ، MP ، VDRL) ، يجب إجراء اختبارات اللولب دائمًا (غالبًا ما يكون مزيجًا - RPGA ، ELISA ، RIF).

الاختبارات اللولبية أكثر صعوبة من الاختبارات السريعة وهي باهظة الثمن مال.

10. RIF

يستخدم هذا التفاعل (المختصر RIF) لتشخيص مرض الزهري ، بما في ذلك الأشكال الكامنة ، وإعادة فحص العينات الإيجابية والكاذبة.

يعتمد RIF على توهج الأجسام المضادة المصنفة عند دمجها مع مركب جسم مضاد للمستضد تحت مصباح كوارتز. بدأ تطبيق هذه الطريقة في الستينيات وتميزت بسهولة التنفيذ وخصوصية عالية (وهي أدنى قليلاً من RIBT).

لديها العديد من التعديلات: RIF-10 و RIF-200 و RIF-abs.

يكون RIF أكثر حساسية عند تخفيفه 10 مرات ، والباقي أكثر تحديدًا. يتم تنفيذ RIF على مرحلتين. يضاف مصل دم المريض إلى ارتفاع ضغط الدم. يتم تشكيل AG-AT معقد ، والذي يتم فحصه في المرحلة التالية. بعد ذلك ، يتم تحديد المعقد المسمى بـ fluoochrome بواسطة الفحص المجهري. إذا لم يتم ملاحظة التلألؤ ، فهذا يشير إلى عدم وجود أجسام مضادة محددة في مصل الدم.

RIF-200 هو الأكثر قيمة بين جميع التخفيفات. الطريقة مخصصة للتشخيص أشكال مختلفةالزهري ، وخاصة الزهري الكامن والتحقق المتبادل للعينات الإيجابية.

11. ريبت

يعتبر رد فعل تجميد اللولبيات الباهتة (اختصارًا بـ RIBT ، RIT) أحد أصعب الاختبارات المصلية التي تتطلب جهودًا كبيرة وتكاليف مالية. يتم استخدام RIBT بشكل أقل وأقل ، ولكن تظل أهميته في تشخيص مرض الزهري الكامن.

إنه ذو أهمية كبيرة في التعرف على النتائج الإيجابية الكاذبة لدى النساء الحوامل ويعتمد على تثبيت البكتيريا في وجود immobilisins - الأجسام المضادة المتأخرة.

يتم تقييم النتيجة على أساس النسبة المئوية (٪) من اللولبيات المعطلة باستخدام جدول خاص:

1. 1 من 0 إلى 20 - عينة سلبية.
2. 2 من 21 إلى 50 - اختبار إيجابي ضعيف.
3. 3 من 50 إلى 100 - رد فعل إيجابي.

من الممكن أيضًا الحصول على نتائج إيجابية كاذبة باستخدام RIBT. لذلك ، فإن الإجابة غير الصحيحة ممكنة مع الإصابة بداء النقب المداري ، وكذلك مع مرض السل وتليف الكبد والساركويد والمرضى المسنين.

12. RPGA

يسمى اختبار الدم هذا لمرض الزهري تفاعل التراص الدموي السلبي (يُختصر بالدم لـ RPHA ، TRPHA).

يتم تحضير المستضد لـ RPHA من كريات الدم الحمراء في الأغنام المغلفة بشظايا من اللولبيات الشاحبة (تم الحصول عليها من الأرانب المصابة (انظر الشكل 4)). يستخدم التحليل الدم الوريدي للمريض (البلازما أو المصل المعطل).

عندما يضاف المستضد إلى مصل مريض الزهري ، يتشكل مركب AG-AT ، مما يؤدي إلى تراص كريات الدم الحمراء. يتم تحديد التراص بشكل شخصي من قبل مساعد مختبر.



الشكل 3 - مخطط RPHA (تفاعل التراص الدموي السلبي)

يتم تقييم العينة على أنها إيجابية عند ظهور تراص من اللون الوردي الموحد. يشير تلطيخ الراسب الأحمر إلى ترسب كريات الدم الحمراء. إن مادة RPHA حساسة للغاية ومحددة للغاية.

12.1. تفاعل التراص الدقيق

إنها نسخة مبسطة من RPGA. وهو يختلف عن العينة الموصوفة أعلاه من حيث أن هناك مستضدًا ومخففًا ومصل دم أقل لإجراء التفاعل. يمكن تقييم العينة بعد 4 ساعات من حضانة المصل. يتم استخدامه للفحص والاختبارات الجماعية لمرض الزهري.

13. إنزيم المقايسة المناعية

يعتمد مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA باختصار) على تفاعل محدد للأجسام المضادة للمستضد. يتم إدخال المواد البيولوجية (مصل دم المريض ، السائل النخاعي) في الآبار ، حيث يتم تثبيت مستضدات اللولبية الشاحبة على السطح الصلب. يتم تحضين مادة الاختبار ، ثم يتم غسل الأجسام المضادة التي لا ترتبط بالمستضدات (انظر الشكل 5).

يتم تحديد المركب الناتج في مرحلة التخمير باستخدام مصل مناعي مرتبط بالإنزيم. في تفاعل كيميائي ، يقوم الإنزيم بتلوين المركبات الناتجة. تعتمد شدة التلوين على كمية الأجسام المضادة المحددة في دم المريض ويتم تسجيلها باستخدام مقياس الطيف الضوئي.



الشكل 4 - مخطط ELISA (مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم)

تزيد حساسية ELISA عن 95٪. تستخدم الطريقة في الوضع الآلي لدراسة المجموعات السكانية: المتبرعين ، والنساء الحوامل وغيرهم ، لتوضيح التشخيص باختبارات غير لولبية إيجابية وكاذبة.

14. المناعي

التجلط المناعي هو طريقة حساسة للغاية ، وتعديل إليسا بسيط. يعتمد التفاعل على الرحلان الكهربائي مع فصل المستضدات من اللولبيات الشاحبة.

يتم نقل المواد المناعية المنفصلة إلى ورق النيتروسليلوز ويتم تطويرها في ELISA. بعد ذلك ، يتم تحضين المصل ويتم غسل الأجسام المضادة غير المقيدة. يتم معالجة المادة الناتجة باستخدام الغلوبولين المناعي المسمى بالإنزيم (IgM أو IgG).

15. التقييم السريري لنتائج التشخيص المخبري لمرض الزهري

في الجدول 1 أدناه ، أظهرنا نتائج الاختبار المحتملة وتفسيرها. كما ترى في الجدول ، فإن التقييم الشامل للاختبارات له أهمية أساسية في فك التشفير.



الجدول 1 - تفسير نتائج التفاعلات المصلية (اختبارات الدم لمرض الزهري). لعرضها ، انقر فوق الجدول

يتم أيضًا تقييم تفاعل الاختبارات باستخدام "الصلبان":

1. 1 الحد الأقصى للاستجابة (اختبار إيجابي بشدة) يشار إليه بـ 4 تقاطعات.
2. 2 تمت الإشارة إلى عينة موجبة بثلاث تقاطعات.
3. 3 يتم الإشارة إلى رد فعل إيجابي ضعيف من خلال تهجين.
4. 4 يشير أحد الصليب إلى نتيجة مشكوك فيها وسلبية.
5. 5 يتم تمييز الإجابة السالبة بعلامة الطرح.

لم تفقد مشكلة تحسين التشخيص المختبري لمرض الزهري أهميتها حتى يومنا هذا. الأساليب الحديثةالتشخيص ، على الرغم من رغبة العلماء في الوصول بالتشخيص إلى أعلى حساسية وخصوصية ممكنة ، تتطلب فحصًا للمراقبة ونهجًا فرديًا.

من سمات الإصابة بمرض الزهري ظاهرة مقاومة المصل ، والتي لم تتلق أي تفسير علمي. يتم التشخيص بعد الفحص الكامل للمريض بالطرق الوبائية والسريرية والمخبرية.

على خلفية التطور الاقتصادي والتقني للطب ، هناك أيضًا تقدم في تطوير معايير جديدة لتشخيص مرض الزهري. كل هذا سيسمح لك بمعالجة المرضى بسرعة ونجاح ودقة.

ثقب في الغدد الليمفاوية الإقليمية

التشخيص المصلي

• تفاعل واسرمان (RV) ،
• ردود الفعل الرسوبية من Kahn و Sachs-Vitebsk (عصاري خلوي) ،
• رد فعل على الزجاج (طريقة صريحة) ،

• رد فعل تجميد اللولبيات الشاحبة (RIBT) ،
• تفاعل التألق المناعي (RIF).

تفاعل واسرمان (RV)

عادة ما يتم إعطاء RV مع اثنين أو ثلاثة من المستضدات. الأكثر شيوعًا هو مستضد كارديوليبين شديد الحساسية (مستخلص قلب البقر المخصب بالكوليسترول والليسيثين) ومستضد اللولب (معلق معالج بالموجات فوق الصوتية للولبيات الباهتة المزروعة بالتشكل التشريحي). جنبا إلى جنب مع الكاشفات في مصل دم المريض ، تشكل هذه المستضدات مركبًا مناعيًا قادرًا على الامتصاص والمكملات الرابطة. لتحديد المركب المتشكل بصريًا (ريجين + مستضد + مكمل) ، يتم استخدام نظام انحلالي (خليط من كريات الدم الحمراء في الأغنام مع مصل انحلالي) كمؤشر. إذا كان المكمل مرتبطًا بالمرحلة الأولى من التفاعل (الكواشف + مستضد + مكمل) ، لا يحدث انحلال الدم - تترسب كريات الدم الحمراء في رواسب يمكن ملاحظتها بسهولة (PB إيجابي). إذا كان المكمل في المرحلة الأولى غير ملزم بسبب عدم وجود الكواشف في المصل المختبَر ، فسيتم استخدامه من قبل النظام الانحلالي وسيحدث انحلال الدم (PB سلبي). يتم تقييم شدة انحلال الدم في وضع RV من خلال مزاياها: الغياب التام لانحلال الدم ++++ أو 4+ (RV إيجابي بشكل حاد) ؛ بالكاد بدأ انحلال الدم +++ أو 3+ (PB إيجابي) ؛ انحلال دم كبير ++ أو 2+ (PB إيجابي ضعيف) ؛ صورة غير مفهومة لانحلال الدم ± (PB مشكوك فيه) ؛ انحلال الدم الكامل - (تفاعل واسرمان سلبي).

بالإضافة إلى التقييم النوعي لـ RV ، هناك صيغة كمية مع تخفيفات مختلفة من المصل (1:10 ، 1:20 ، 1:80 ، 1: 160 ، 1: 320). يتم تحديد عيار الكاشفات من خلال التخفيف الأقصى ، والذي لا يزال يعطي نتيجة إيجابية حادة (4+). يعد الإعداد الكمي لـ RV مهمًا في تشخيص بعض الأشكال السريرية لعدوى الزهري ، وكذلك في مراقبة فعالية العلاج. حاليًا ، يتم طرح تفاعل Wasserman مع اثنين من المستضدات (Cardiolipin و treponemal سلالة رايتر). كقاعدة عامة ، يصبح RV موجبًا في 5-6 أسابيع بعد الإصابة في 25-60٪ من المرضى ، في 7-8 أسابيع - في 75-96٪ ، في 9-19 أسبوعًا - في 100٪ ، على الرغم من أنه في السنوات الاخيرةفي بعض الأحيان عاجلاً أم آجلاً. في الوقت نفسه ، يزيد عيار الكاشفات تدريجياً ويصل إلى قيمة قصوى (1: 160-1: 320 وما فوق) في حالة ظهور طفح جلدي معمم (الزهري الطازج الثانوي). عندما يكون RV موجبًا ، يتم إجراء تشخيص لمرض الزهري الأولي.
مع ثانوي طازجوالزهري المتكرر الثانوي ، RV إيجابي في 100 ٪ من المرضى ، ولكن في المرضى الذين يعانون من سوء التغذية مع ضعف المناعة ، يمكن ملاحظة نتيجة سلبية. بعد ذلك ، يتناقص عيار الكاشفات تدريجياً ومع الزهري الثانوي المتكرر لا يتجاوز عادةً 1: 80-1: 120.
مع مرض الزهري الثالثييكون RV موجبًا في 65-70 ٪ من المرضى وعادة ما يكون هناك عيار منخفض من الكواشف (1: 20-1: 40). مع الأشكال المتأخرة من مرض الزهري (الزهري للأعضاء الداخلية ، الجهاز العصبي) لوحظ RV إيجابي في 50-80٪ من الحالات. يتراوح عيار الكاشفات من 1: 5 إلى 1: 320.
مع مرض الزهري الكامنلوحظ RV إيجابي في 100 ٪ من المرضى. يتراوح عيار الكاشفات من 1:80 إلى 1: 640 ، وفي مرض الزهري الكامن المتأخر من 1:10 إلى 1:20. يشير الانخفاض السريع في عيار الكواشف (حتى السلبية الكاملة) أثناء العلاج إلى فعالية العلاج.

عيوب تفاعل واسرمان- قلة الحساسية (في المرحلة الأوليةالزهري الأولي سلبي). كما أنه يكون سلبيًا في ثلث المرضى إذا تم علاجهم بالمضادات الحيوية في الماضي ، في المرضى الذين يعانون من مرض الزهري النشط الثالث مع آفات الجلد والأغشية المخاطية ، والجهاز العظمي المفصلي ، والأعضاء الداخلية ، والجهاز العصبي المركزي ، مع تأخر. الزهري الخلقي.
عدم الدقة- قد يكون رد فعل واسرمان إيجابياً لدى الأشخاص الذين لم يكونوا مصابين بمرض الزهري من قبل. على وجه الخصوص ، لوحظت النتائج الإيجابية الكاذبة (غير النوعية) للـ RV في المرضى الذين يعانون من الذئبة الحمامية الجهازية والجذام والملاريا والأورام الخبيثة وتلف الكبد واحتشاء عضلة القلب واسع النطاق وأمراض أخرى ، وأحيانًا في الأشخاص الأصحاء تمامًا.
تم الكشف عن تفاعل واسرمان الإيجابي الكاذب على المدى القصيرعند بعض النساء قبل الولادة أو بعدها ، في متعاطي المخدرات ، بعد التخدير ، تناول الكحول. كقاعدة عامة ، يتم التعبير عن RV الإيجابي الخاطئ بشكل ضعيف ، في كثير من الأحيان مع عيار منخفض من الكواشف (1: 5-1: 20) ، موجب (3+) أو إيجابي ضعيف (2+). في الفحوصات المصلية الجماعية ، تواتر النتائج الإيجابية الكاذبة هو 0.1-0.15٪. للتغلب على نقص الحساسية ، يستخدمون الإعداد في البرد (تفاعل الياقة) وفي نفس الوقت يتم تنظيمه مع تفاعلات مصلية أخرى.

ردود الفعل الرسوبية من Kahn و Sachs-Vitebsky

رد فعل شلل اللولبية الشاحبة (RIBT)

تفاعل التألق المناعي (RIF)

تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA)

تقنية جمع الدم للاختبارات السيرولوجية

المقاومة المصلية

• حقيقي(مطلق ، غير مشروط) - من الضروري إجراء علاج إضافي ضد مرض الزهري ، مع الجمع بين العلاج غير النوعي لزيادة قوى المناعة في الجسم.
• نسبيا- بعد العلاج الكامل ، تشكل اللولبيات الشاحبة أكياسًا أو أشكال L ، والتي تكون في الجسم في حالة منخفضة الضراوة ، ونتيجة لذلك ، لا يغير العلاج الإضافي مؤشرات التفاعلات المصلية ، خاصةً RIF و RIBT.

المقاومة الزائفة- بعد العلاج ، على الرغم من ردود الفعل المصلية الإيجابية ، لا توجد وذمة لولبية شاحبة في الجسم. لا يوجد مستضد في الجسم ، ولكن يستمر إنتاج الأجسام المضادة ، والتي يتم تسجيلها عند ضبط التفاعلات المصلية.
يمكن أن تتطور المقاومة المصلية بسبب:

• علاج غير مناسب دون مراعاة وصفة المرض ومرحلة المرض ؛
• جرعة غير كافية ، وعلى وجه الخصوص ، بسبب عدم مراعاة وزن الجسم للمرضى ؛
• انتهاك الفترة الفاصلة بين إدارة الأدوية ؛
• الحفاظ على اللولبيات الشاحبة في الجسم على الرغم من العلاج المحدد الكامل ، نظرًا لمقاومتها للبنسلين وأدوية العلاج الكيميائي الأخرى في حالة وجود آفات خفية ومغلفة في الأعضاء الداخلية والجهاز العصبي ، الغدد الليمفاوية، والتي لا يمكن الوصول إليها الأدوية المضادة للبكتيريا(غالبًا ما توجد اللولبيات الشاحبة في أنسجة الندبة بعد سنوات عديدة من انتهاء العلاج ، وفي الغدد الليمفاوية يكون من الممكن أحيانًا اكتشاف اللولبيات الباهتة بعد 3-5 سنوات من العلاج بمضادات الزهري) ؛
• يتناقص قوى الحمايةمع العديد من الأمراض والتسمم (اعتلال الغدد الصماء ، إدمان الكحول ، إدمان المخدرات ، إلخ) ؛
• النضوب العام (تناول طعام فقير بالفيتامينات والبروتينات والدهون).

• ما يصاحب ذلك من أمراض غير محددة للأعضاء الداخلية ، واضطرابات الجهاز القلبي الوعائي ، والروماتيزم ، واختلال وظائف الغدد الصماء والجهاز العصبي ، والأمراض الجلدية المزمنة الشديدة ، والأورام الخبيثة ؛
• آفات الجهاز العصبي (صدمة شديدة ، ارتجاج ، صدمة عقلية) ؛
• حمل؛ التسمم المزمن بالكحول وأدوية النيكوتين. أمراض معدية(الملاريا والسل ، التهاب الكبد الفيروسيوالدوسنتاريا والتيفوس والتيفوئيد والحمى الراجعة).

حجم الخط

أمر وزارة الصحة في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية بتاريخ 1161-09-09-02 بشأن تحسين التشخيص التشخيصي للخطأ للصفيف (مع تعليمات لـ ... فعلي في 2018

طريقة ضبط RIF - ABS

اختبار المصل

يؤخذ الدم للحصول على مصل الدم من الوريد المرفقي في أنبوب اختبار نظيف وجاف بحجم 5 مل ويتم معالجته بنفس طريقة ضبط تفاعل واسرمان. يتم تعطيل مصل الدم مرة واحدة عند درجة حرارة 56 درجة لمدة 30 دقيقة. نظرًا لحقيقة أن RIF-abs توضع غير معقمة ، فإن استخدام الأطباق المعقمة والامتثال لظروف العقم عند تخزين مصل الدم ليس ضروريًا. من المهم فقط الحفاظ على مصل الدم لفترة أطول قبل الدراسة.

كمستضد ، يتم استخدام تعليق من اللولبيات الشاحبة المسببة للأمراض من سلالة نيكولز من التهاب الأوركيد الأرانب لمدة 7 أيام. يصاب ذكور الأرانب السليمة ذات النتائج السلبية لتفاعل واسرمان و RIT بشكل خاص ، وعندما يحدث التهاب الخصية ، تتم إزالة اللولبيات الشاحبة من الخصيتين بنفس الطريقة كما في حالة تلقي مستضد لـ RHS. يُسكب المعلق الناتج من اللولبيات الباهتة من قطع الخصية في أنابيب معقمة بسدادات قطنية ويترك في الثلاجة عند 4 درجات لمدة يوم ، وبعد ذلك يتم فصله عن الرواسب وتحت نفس الظروف يتم الحفاظ على فترة الاستخدام بأكملها .

يتطلب تلقي وتخزين المستضد الامتثال لشروط العقم ، لأن مع نفس المستضد ، يمكن ضبط التفاعل في غضون 2-4 أشهر. بالنسبة للمستضد ، يجب على المرء أن يختار التعليق الذي لا يلاحظ فيه تراص اللولبيات وهناك كمية كافية منها. يمكن الحصول على المستضد في أمبولات من مختبرات أخرى. قبل كل إعداد للتفاعل ، يتم خلط المعلق جيدًا وفحصه في مجهر بمكثف مجال مظلم لتحديد كثافته. لضبط RIF-abs ، من الضروري أن يكون لديك تعليق يحتوي على 40-60 لولبية في مجال الرؤية المظلم ؛ في وجود تعليق أكثر سمكًا ، يجب تخفيفه.

كمادة ماصة لـ RIF-abs ، يمكن استخدام مستضد اللولب فوق الصوتي لـ RSK ، الذي تنتجه شركة Kaunas لإنتاج المستحضرات البكتيرية لوزارة الصحة في اتحاد الجمهوريات الاشتراكية السوفياتية. إنه تعليق لمزيج من سلالات اللولب الشاحب المستزرعة V و VII و VIII و IX و Reiter ، تم تدميرها بواسطة الموجات فوق الصوتية. يجب معايرة كل دفعة من المواد الماصة قبل استخدامها في RIF-abs لأغراض التشخيص.

معايرة المواد الماصة

يتم معايرة المواد الماصة على مصل الدم لمرضى الزهري ، مما يعطي نتيجة حادة (4+) وإيجابية ضعيفة (2+) في RIF بتخفيف 1: 5 ، وكذلك على مصل دم الأشخاص الخاليين من مرض الزهري الإصابة ، مما يعطي نتيجة سلبية في RIF-5 وإيجابية غير محددة (2+ أو أكثر).

مثال على تحديد عيار مادة ماصة

يتم تخفيف المادة الماصة بالكامل باستخدام محلول الفوسفات ، درجة الحموضة = 7.2 ، 2 ، 3 ، 4 مرات أو أكثر. خذ 3 مصل دم من مرضى الزهري ، أحدها يعطي نتيجة إيجابية حادة (4+) في RIF-5 ، 2 - إيجابي ضعيف (2+) ، و 5 مصل دم من أشخاص خاليين من عدوى الزهري ، 3 منها تعطي نتائج غير محددة و RIF-5 (2+ وأكثر). يتم تخفيف جميع أمصال الدم 5 مرات بمادة ماصة ، مخففة بدورها 2 ، 3 ، 4 مرات وأكثر باستخدام محلول الفوسفات. ثم يتم فحص مصل الدم في التفاعل. بعد أخذ النتائج بعين الاعتبار ، يتم اختيار مخفف ماص ، حيث يحتفظ مصل الدم الممتص لمرضى الزهري بدرجة إيجابية مماثلة لتلك التي يتم الحصول عليها بمصل الدم المخفف بمحلول الفوسفات ، ومصل دم الأشخاص الخاليين من عدوى الزهري لا ينبعث منها التلألؤ. هذا التخفيف للمادة الماصة هو عيارها.

كان عيار المادة الماصة في هذه الحالة هو التخفيف بنسبة 1: 3 ، حيث تحتفظ كل مصل الدم لمرضى الزهري بدرجة الإيجابية التي تم الحصول عليها في مجموعة التحكم ، وفي نفس الوقت كانت الإيجابية غير النوعية لمصل الدم غير الزهري هي تمت إزالته بشكل موثوق.

مصل مضيء مضاد للأنواع

لدراسة مصل الإنسان في RIF-abs ، يلزم وجود مصل دم يحمل علامة الفلوروكروم للحيوانات المحصنة ببروتين مصل الإنسان. يذوب مصل الإنارة المجفف بالتجميد تحت ظروف التعقيم في ماء مقطر بالحجم الموضح على ملصق الأمبولة ، ويصب في أنبوب معقم بسدادة مطاطية ويخزن عند 4 درجات مئوية لمدة شهر إلى شهرين أثناء الاستخدام.

في يوم التفاعل ، يتم تخفيف الكمية المطلوبة من هذا المصل بواسطة عيار بالماء المقطر. لا يعد تخفيف العمل في المصل الموضح على الملصق مناسبًا لإجراء تفاعل لغرض التشخيص المصلي لمرض الزهري ، لذلك يجب تحديد عيار كل دفعة من جديد.

الجدول ن 13

نتائج معايرة المواد الماصة

معايرة المصل المضئ للأنواع

خذ 5 مصل دم من مرضى الزهري و 5 مصل دم من أشخاص أصحاء ، قم بتخفيفها 5 مرات بمادة ماصة (مع مراعاة عيارها) وقم بإعداد تفاعل باستخدام المرحلة الثانية من التخفيفات المختلفة من مصل الإنارة ضد جلوبيولين المصل البشري من السلسلة الذي يتم تحديد عياره. وتجدر الإشارة إلى أن عيار مصل الإنارة المنتج حاليًا بواسطة I.E. NF Gamalei ، يتأرجح عندما يتم ضبط RIF-abs من 1: 100 إلى 1: 140. عند أخذ التفاعل في الاعتبار ، يجب اعتبار العيار الأولي لمصل الإنارة المخفف ، عند استخدامه مع مصل الدم الموجب ، وهو تألق جيد للولبيات تم الحصول عليها ، ومع عدم تلقي الفلورة السلبية للمستضد. يؤدي التخفيف الأكبر لمصل الإنارة عن العيار إلى انخفاض في حساسية التفاعل ، وتقليل التخفيف إلى انخفاض في الخصوصية. بعد تحديد العيار الأولي ، يجب تحديده على عدد أكبر من مصل الدم الموجب والسالب. يمكن اعتبار العيار النهائي هو الذي تم اختباره على 100 مصل دم ، ويجب أن يكون 20 منها على الأقل من مرضى الزهري.

لمنع الإنبات بعد تخفيف مصل الإنارة الجاف بالماء المقطر ، من الضروري إضافة مورثولات إليه بمعدل 1 حجم من محلولها 1: 1000 إلى 9 أحجام من مصل الإنارة. عند أخذ أمبولات جديدة من نفس السلسلة ، يجب فحص العيار وتحديده فقط لـ 10 مصل دم إيجابي وسلبي واضح.

مثال لتحديد العيار الأولي لمصل مضاد للأنواع الإنارة

تحضير 60 مستحضر ، مرقمة من 1 إلى 60. خذ 10 أمصال دم - 5 من مرضى الزهري و 5 من الأشخاص الأصحاء. يتم تخفيف جميع أمصال الدم 5 مرات بمواد ماصة مخففة في العيار.

في المستحضرات المرقمة 1-10 ، 11-20 ، 21-30 ، 31-40 ، 41-50 ، 51-60 ، في المرحلة الأولى من التفاعل ، يتم تطبيق نفس 10 أمصال الدم المخففة 5 مرات مع المادة الماصة. في المرحلة الثانية من رد الفعل لتحضيرات 1-10 ، يتم تطبيق مصل الإنارة المخفف 1: 100 ، في 11-20 1: 110 ، في 21-30-1: 120 ، في 31-40-1: 130 ، في 41 -50 - 1: 140 ، في 51-60 - 1: 150.

تقنية التدريج RIF-ABS

من المستضد ، يتم تحضير المستحضرات على شرائح زجاجية رفيعة منزوعة الدهن جيدًا ، يتم تمييز الدوائر التي يبلغ قطرها 0.7 سم بقطعة زجاج (10 دوائر على شريحة زجاجية واحدة). داخل الدائرة ، يتم تطبيق مستضد معلق من اللولبيات الشاحبة على الزجاج. مع نهاية ماصة Pasteur محكمة الغلق ، يتم توزيع المعلق بحركة دائرية داخل الدائرة ، وتجفيفها في الهواء وتثبيتها لمدة 10 دقائق في أسيتون نقي كيميائيًا. ثم يتم ترقيم الأدوية. يتم تخفيف مصل دم الاختبار المعطل 5 مرات باستخدام مادة ماصة مخففة في عيار بمحلول عازل. يتم وضع صف من الأنابيب في رف ، يتوافق عددها وعددها مع عدد مصل الدم المختبرة وعددها. تُسكب المادة الماصة المخففة في العيار في أنابيب اختبار باستخدام ماصة ، 0.2 مل ، ثم يضاف 0.05 مل من مصل دم الاختبار الكامل ويخلط جيدًا. يمكن أن يتم تخفيف مصل الدم بجهاز Florinsky. يوضع مصل الدم المخفف بمادة ماصة على المستضد لتغطية اللطاخة بشكل موحد ، وتوضع المستحضرات في حجرة رطبة تغلق بغطاء وتوضع في منظم حرارة عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة (مرحلة التفاعل) أنا). بعد المرحلة الأولى ، يتم غسل المستحضرات بعناية في جزأين من محلول الفوسفات ، وفي الجزء الثاني ، توضع المستحضرات لمدة 10 دقائق ، وتجفف ، وبعد ذلك توضع مرة أخرى في غرفة رطبة ، ويخفف مصل الإنارة بالعيار. يوضع ويترك في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة (تفاعلات المرحلة الثانية). في نهاية المرحلة الثانية ، يتم غسل المستحضرات بمحلول الفوسفات ، كما هو موصوف أعلاه ، وتجفيفها وتطبيقها على سطح المسحات مع قطرة من زيت غمر غير مضيء (ثنائي ميثيل فثالات).

يتم إجراء دراسة المستحضرات في مجهر الفلورسنت باستخدام مصباح الزئبق الكوارتز DRSH-250 مع نظام الغمر ، العدسة 4X أو 5X ، المرشحات SZS-7 أو 14 ، FS-1. BS-8 و ZhS-18 أو T-2N. يتم أخذ رد الفعل في الاعتبار من خلال تقييم تألق اللولبيات الشاحبة. يعتبر مصل الدم موجبًا في RIF-abs إذا كان يعطي توهجًا لـ 4+ و 3+ و 2+. تم تصنيف التوهج اللامع باللون الأخضر والأصفر على 4+ ، وتم تصنيف التوهج الساطع 3+ ، والوهج الضعيف هو 2+. تعتبر الأمصال سلبية إذا أعطت توهجًا 1+ (يتم تلوين اللولبيات في المستحضر بشكل أكثر كثافة من الخلفية) أو لا تعطيها.

في كل إعداد من إعدادات RIF-abs ، يجب استخدام عناصر التحكم التالية:

تحكم إيجابي بقوة. مصل دم لمريض بمرض الزهري يعطي توهج 4+ عند تخفيفه بعازل 5 مرات. عند تخفيفه 5 مرات بمادة ماصة ، يجب ألا يفقد مصل الدم درجة الإيجابية بأكثر من 1+.

تحكم إيجابي ضعيف. إعطاء مصل دم كامل أو مخفف لمريض الزهري درجة ضعيفةتألق المستضد بمقدار 2+ عند تخفيفه باستخدام المخزن المؤقت 5 مرات. عند تخفيفه بمادة ماصة ، يجب الحفاظ على إيجابيته.

تحكم غير محدد. مصل الدم غير الزهري ، والذي ، عند تخفيفه بمخفف ، مضان على الأقل 2+. عند تخفيفه بمادة ماصة ، يجب التخلص من إيجابيته.

لا يمكن ضبط ضوابط المستضد ، الماص ، الإنارة إلا عند استخدام سلسلة جديدة من هذه المكونات.

طريقة ضبط RIF-abs بالدم الشعري

إعداد RIF-abs ممكن ليس فقط مع مصل الدم ، ولكن أيضًا بالدم المأخوذ من الإصبع. يمكن استخدام هذا التعديل في RIF-abs عند فحص الأطفال لمرض الزهري ، عندما يكون من الصعب الحصول على الدم من الوريد عند البالغين ، أثناء الفحص الجماعي لمختلف الوحدات لمرض الزهري.

عند ضبط RIF-abs بالدم ، يتم استخدام نفس مكونات التفاعل كما هو الحال عند ضبط RIF-abs بمصل الدم (مستضد ، ماص ، مصل مضيء). يتم تحديد عيار مصل الإنارة وفقًا للمخطط أعلاه ، ولكن عند إجراء تفاعل مع الدم. بعد ثقب إصبع المريض ، يؤخذ الدم لفحصه باستخدام الماصة الدقيقة حتى علامة 0.1 مل ، ويتم نفخه بسرعة في أنبوب اختبار يحتوي على 0.3 مل من الماء المقطر ، ويخلط جيدًا مع ماصة ويتم ترشيحه من خلال مرشح ورقي مبلل بالماء المقطر . من الممكن إجراء تفاعل مع الدم المخفف في يوم تناوله وبعد يوم أو يومين ، بشرط أن يتم تخزينه عند 4 درجات.

مباشرة قبل بدء التفاعل ، يضاف 0.1 مل من المادة الماصة الكاملة إلى جميع عينات الدم المتضمنة في التفاعل ، ويخلط مع ماصة ويرج ، ويوضع في منظم حرارة عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة. ثم يتم وضع الدم المعالج بالمادة الماصة على مسحات المستضد ويوضع في غرفة رطبة عند 37 درجة (مرحلة واحدة من التفاعل). بعد انتهاء فترة التعرض ، يتم غسل المستحضرات في الجزء الأول من محلول الفوسفات بحيث لا توجد آثار للدم على الشرائح وتوضع في الجزء الثاني من المخزن المؤقت لمدة 10 دقائق. بعد تجفيف اللطاخات ، يتم تنفيذ المرحلة الثانية من التفاعل. في هذه الحالة ، يتم تطبيق مصل مضيء ضد الجلوبيولين البشري ، المخفف بواسطة العيار الذي تم إنشاؤه لهذا التعديل في RIF ، على المستحضرات. يتم وضع الشرائح في الغرفة الرطبة مرة أخرى في منظم حرارة عند 37 درجة.

بعد 30 دقيقة ، يتم غسل المستحضرات مرة أخرى في جزأين من محلول الفوسفات لمدة 10 دقائق ، وتجفيفها وتركيبها للفحص المجهري الفلوري. يتم إجراء دراسة الأدوية وتسجيل نتائج التفاعل بنفس الطريقة كما هو الحال عند وضع RIF-abs بمصل الدم.

تقنية إعداد RIF-200

تتشابه تقنيات إعداد RIF-abs و RIF-200. عند ضبط RIF-200 ، يتم إجراء معالجة مصل الدم المختبَر ، وتحضير المستضد ، وتحضير مصل إنارة مضاد للأنواع ومعايرته بنفس الطريقة كما هو الحال عند ضبط RIF-abs. يجب أن يؤخذ في الاعتبار فقط أن عيارات مصل الإنارة المنتجة في الوقت الحالي في نطاق RIF-200 من 1: 20 إلى 1: 50.

تقنية التدريج RIF-200

يتم تخفيف مصل الدم المختبَر 200 مرة بمحلول الفوسفات. لهذا الغرض ، يتم وضع 3 صفوف من أنابيب الاختبار في رف ، يتوافق رقمها وترقيمها في كل صف مع رقم وترقيم مصل الدم المختبَر في كتيب العمل. في الصف الأول ، يتم سكب مصل الدم الكامل للاختبار ، في الصف الثاني ، يتم سكب 0.45 مل من المخزن المؤقت في الأنابيب ، في الصف الثالث - 0.95 مل من المخزن المؤقت. في الصف الثاني ، يتم تحضير 10 أضعاف من مصل الدم المخفف ، حيث يتم أخذ 0.05 مل من مصل الدم المختبري من كل أنبوب من الصف الأول باستخدام ماصة منفصلة مدرجة سعة 1 مل ، يتم نقلها إلى الأنبوب المقابل للصف الثاني صف وخلط مع المخزن المؤقت المتاح هناك. من كل أنبوب اختبار في الصف الثاني ، باستخدام نفس الماصة ، قم بنقل 0.05 مل من مصل دم الاختبار المخفف بالفعل 10 مرات في أنبوب الاختبار المقابل للصف الثالث واحصل على تخفيف 200 مرة.

عند إجراء رد فعل على المستحضرات الموضوعة في غرفة رطبة ، يتم تطبيق مصل الدم المخفف 200 مرة بحيث تتوافق أرقامها الموضحة في أنابيب الاختبار مع الأرقام الموجودة على الشرائح الزجاجية. بعد التطبيق على مستحضرات مصل الدم ، توضع الحجرة المبللة لمدة 30 دقيقة في ترموستات بدرجة حرارة 37 درجة (المرحلة الأولى من التفاعل). ثم يتم غسل المستحضرات لمدة 10 دقائق في جزأين من المخزن المؤقت وتجفيفها. بعد ذلك ، يتم وضعها مرة أخرى في غرفة رطبة ، ويتم تطبيق مصل الإنارة المخفف بالعيار على كل شيء (المرحلة الثانية من التفاعل). يتم تنفيذ المرحلة الثانية لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك يتم غسل المستحضرات لمدة 10 دقائق ، وتجفيفها وتركيبها للفحص المجهري الفلوري.

يتم أخذ نتائج RIF-200 في الاعتبار بنفس طريقة RIF-abs.

في حالة اهتمام الأطباء بمعيار الأجسام المضادة الفلورية في مصل دم المريض ، يجب تعيين RIF-abs و RIF-200 مع التخفيف المتسلسل لمصل الدم الذي تم اختباره وعيار الأجسام المضادة الفلورية للنظر في أعلى تخفيف لمصل الدم. مصل الدم الذي لا يزال يعطي نتيجة إيجابية. عادةً ما يُرمز إلى العيار برقم يميز درجة تخفيف مصل الدم المختبَر ، على سبيل المثال ، 5 ، 10 ، 20 ، 40 ، إلخ. (RIF-abs) أو 200 ، 400 ، 800 ، إلخ. (RIF-200).

عند إجراء كلا التعديلين على التفاعل لتخفيف مصل الدم المختبَر وغسل المستحضرات بعد المرحلتين الأولى والثانية ، يجب استخدام محلول ضوئي للتركيبة التالية: 1 لتر من الماء المقطر ، 6.8 جم من كلوريد الصوديوم ، 1.48 جم من حامض الفوسفوريك الصوديوم ، 0 ، 43 جم من فوسفات البوتاسيوم أحادي الاستبدال (الرقم الهيدروجيني = 7.2). يتم تخزين المحلول المحضر في درجة حرارة الغرفة لمدة لا تزيد عن أسبوع.

بسبب إمكانية الحصول على نتائج سلبية في وجود الأجسام المضادة الفلورية ، يجب عدم فحص الدم والمصل في RIF-abs و RIF-200 أثناء علاج المرضى بالبنسلين.

منهجية إنشاء RIF-c

يعد التشخيص المبكر لآفات الجهاز العصبي في مرض الزهري مسألة ملحة في مكافحة هذا المرض. نظرًا لحقيقة أن RIF-c لديه حساسية أكبر من جميع الاختبارات الأخرى المستخدمة لتشخيص الخمور لمرض الزهري ، يمكن التوصية بهذا التعديل في RIF لتشخيص آفات الزهري للجهاز العصبي المركزي في جميع أشكال مرض الزهري.

لإعداد RIF-c ، يتم استخدام نفس المستضد ، مصل الإنارة ، كما هو الحال في إعداد RIF-abs و RIF-200 بمصل الدم. إن تحديد الأجسام المضادة الفلورية في السائل الدماغي الشوكي ومصل الدم وحساب التفاعل متشابهان أيضًا.

يتم إدخال السائل الدماغي النخاعي في التفاعل غير المعطل وكامل. قبل ضبط التفاعل ، يمكن تخزينه في حجرة الفريزر بالثلاجة في أنابيب اختبار تحت سدادات مطاطية لمدة تصل إلى أسبوعين. تتم عملية الذوبان في درجة حرارة الغرفة.

تقنية التدريج RIF-c

في المرحلة الأولى من التفاعل ، يتم تطبيق 0.05 مل من السائل الدماغي الشوكي غير المخفف على المستضد ، وتوضع المستحضرات في غرفة رطبة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم يتم غسلها بمحلول الفوسفات ، درجة الحموضة = 7.2 ، لمدة 10 دقائق ، وتجفيفها. في المرحلة الثانية ، يتم تطبيق مصل إنارة مخفف بالعيار على المستحضرات ، والتي تتم معايرتها عند إعداد تفاعل مع السائل النخاعي... يتم حفظ المستحضرات في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة في غرفة رطبة ، ويتم غسلها وتجفيفها وتركيبها من أجل الفحص المجهري الفلوري.

مصادر الأخطاء

1. عدم الامتثال لشروط تحضير وتخزين الكواشف وإعداد التفاعل.

2. ضعف جودة مصل الإنارة وعدم دقة تحديد عياره.

3. تطبيق مادة الاختبار أو مصل الإنارة عند إجراء تفاعل ليس على الدواء ، ولكن على الجانب الآخر من الشريحة.

4. الإعداد غير الصحيح للإضاءة في مجهر الفلورسنت.

5. مستضد منخفض الجودة.

يتم تحليل مرض الزهري باستخدام مجموعة متنوعة من الطرق لاكتشاف العامل الممرض. مع تطور علم الأمراض ، يظهر عدد كبير من العلامات المحددة ، لذلك ، من أجل إجراء تشخيص دقيق ، يتم فحص الشخص المريض بطريقة شاملة. التحليل العامالدم ليس مفيدًا جدًا ، ولا يتم استخدامه عند تشخيص هذه العدوى التناسلية.

أنواع البحوث والمواد الحيوية للتحليل

يتم استخدام تقنيات ومواد حيوية مختلفة لتحديد المرض. في المراحل المبكرة ، يتم تحديد مرض الزهري باستخدام اختبار البكتريا. يتم فحص العينات تحت المجهر. يسمح لك الجهاز باكتشاف سلالات الممرض. في وقت لاحق قاموا بتنفيذها الاختبارات المصليةدم. بفضلهم ، تم الكشف عن المستضدات والأجسام المضادة لمرض الزهري في العينات.

تنقسم طرق تحديد العدوى التناسلية إلى فئتين:

• مباشرة ، وكشف عن الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض. وتشمل هذه: الفحص المجهري للمجال المظلم ، وتحليل RIT (إصابة الأرانب بالمواد الحيوية للبحث) ، طريقة PCR- تفاعل البلمرة المتسلسل (بمساعدته ، تم العثور على العناصر الوراثية للممرض).
• يكتشف غير المباشر (مصلي) الأجسام المضادة لمسببات الأمراض. يتم إنتاجها الجهاز المناعيكاستجابة للعدوى.

تنقسم التقنيات المصلية إلى فئتين: اللولبيات اللولبية وغير اللولبية.

• غير اللولبية ، بما في ذلك: اختبار التولويدين الأحمر ، تحليل RSK ، اختبار RPR ، فحص الدم بطريقة سرطان المثانة السريع.
• اللولب ، بما في ذلك: التجلط المناعي ، اختبار RSK ، تحليل RIT ، دراسة RIF ، اختبار RPGA ، تحليل ELISA.

محتوى المعلومات لاختبارات العدوى مختلف. في كثير من الأحيان يقومون بإجراء الأنواع الرئيسية من اختبارات مرض الزهري ، والتي تشمل الطرق المصلية.

المواد الحيوية للبحث

لتحديد مرض اللولب الباهت ، وهو العامل الممرض الذي يشبه اللولب ويسبب مرض الزهري ، يتم أخذ العينات:

• الدم الوريدي؛
• السائل النخاعي (إفراز من القناة الشوكية) ؛
• محتويات الغدد الليمفاوية.
• تقرح الأنسجة.

إذا كان من الضروري إجراء اختبارات للكشف عن مرض الزهري ، يتم التبرع بالدم ليس فقط من الوريد المرفقي ، ولكن أيضًا من الإصبع. يتأثر اختيار المادة الحيوية وطريقة البحث بخطورة مسار العدوى ومعدات مركز التشخيص.

البحث المباشر

الدليل المقنع لمرض الزهري هو تحديد العوامل المعدية تحت المجهر. وبهذه الطريقة ، تم العثور على العامل الممرض في 8 من 10. النتيجة السلبية في المريضين المتبقين لا تعني أنهم غير مصابين.

تتم الدراسة في المرحلة الابتدائية والثانوية (المرحلة) من المرض والتي تتميز بظهور طفح جلدي على الجلد ومرض الزهري (تقرح) على الأنسجة الظهارية أو الأغشية المخاطية. تم العثور على مسببات الأمراض التي تسبب الأمراض التناسلية في الإفرازات من الآفات.

بتعبير أدق ، اختبار معقد ، يُشار إليه باسم RIF - تفاعل التألق المناعي ، يتواءم مع تعريف اللولبيات. يتم معالجة عينة البحث بأجسام مضادة الفلورسنت. تلتصق المركبات القادرة على التوهج مع البكتيريا. فحص العينات تحت المجهر ، في حالة الإصابة ، يرى مساعد المختبر مسببات الأمراض المتلألئة.

يستخدم الاختبار للتشخيص المبكر للمرض. كلما طالت مدة المرض ، انخفضت حساسية طرق البحث. بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يقع بعد علاج الطفح الجلدي والقرحة بالمطهرات وفي المرضى الذين خضعوا للعلاج. أحيانًا يعطي البحث نتائج سلبية كاذبة وإيجابية كاذبة.

يعد تحليل RIT طريقة دقيقة للغاية للكشف عن مرض الزهري. عند إجراء الاختبار ، يجب أن تنتظر النتائج وقتًا طويلاً. حتى تظهر علامات العدوى على الأرنب المصاب. نادرًا ما يتم استخدام الاختبار ، على الرغم من حقيقة أنه دقيق للغاية.

باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسلبالنسبة لمرض الزهري ، يتم تحديد العناصر الوراثية لمسببات الأمراض. العيب الوحيد في PCR هو تكلفته العالية.

الاختبارات غير اللولبية

تساعد اختبارات الدم هذه على اكتشاف الأجسام المضادة التي تظهر استجابةً للكارديوليبين ، وهو مركب مرتبط بالبنية العامة لأغشية مسببات الأمراض.

تفاعل واسرمان (PB أو RW)

الدراسة الأكثر شهرة لمرض الزهري هي تفاعل واسرمان. يتم تضمين RV في فئة تفاعلات التثبيت التكميلية (CACs). طرق RSC الجديدة لها اختلافات كبيرة عن RW التقليدية. لكن تم تحديدهم ، كما في السابق ، بمفهوم "رد فعل واسرمان".

يصنع الجهاز المناعي الأجسام المضادة (الواسمات) استجابة لغزو اللولبيات. تم اكتشافها خلال فحص الدم لمرض الزهري بواسطة طريقة تفاعل واسرمان. تؤكد نتيجة RW الإيجابية أن الموضوع مصاب.

تفاعل انحلال الدم - مؤشر تحليل RV. مع ذلك ، تتفاعل مادتان: المصل الانحلالي وكريات الدم الحمراء. يتكون المصل عن طريق تحصين الأرانب بكريات الدم الحمراء. يتم تقليل نشاط السائل البيولوجي عن طريق التسخين.

تعتمد مؤشرات RV على ما إذا كان انحلال الدم قد مر أم لا. يحدث انحلال الدم في عينة خالية من العلامات. في هذه الحالة ، يكون رد الفعل على المستضدات أمرًا مستحيلًا. يُنفق المُكمل في التفاعل مع كريات الدم الحمراء في الأغنام. عندما تكون هناك علامات في العينة ، يتفاعل المجاملة مع المستضدات. في هذه الحالة ، لا يحدث انحلال الدم.