Sifilis je nalezljiva bolezen, ki jo povzroča spiroheta Treponema pallidum, nagnjena k napredovanju kronični potek, z jasno periodizacijo kliničnih simptomov.

Prevladujoča spolna pot prenosa preko kontaktne in transplacentalne povzroča, da je ta bolezen med številnimi spolno prenosljivimi boleznimi (SPB, SPI). Poleg teh načinov prenosa okužbe ima posebno vlogo umetna pot (iz latinščine "artificio" - umetno ustvarjena).

To je značilno za zdravstvene ustanove, ki se izvajajo predvsem v bolnišničnem okolju. Okužba se pojavi med transfuzijo krvi, različnimi kirurškimi posegi, invazivnimi diagnostičnimi metodami.

Kljub karanteni krvodajalcev je problem odkrivanja sifilisa pri darovalcih na različnih stopnjah bolezni še vedno aktualen.

Zato diagnostični ukrepi pri sifilisu zahtevajo standardizacijo, uvedbo novih občutljivih in informativnih metod identifikacije, pa tudi zmanjšanje napak in napačno razlago rezultatov testov.

Pokaži vse

1. Razvrstitev metod laboratorijske diagnostike

Diagnoza sifilisa ima nekatere posebnosti in se razlikuje od diagnoze drugih bakterijskih okužb. Kompleksna struktura in antigene lastnosti blede treponeme povzročajo napake pri interpretaciji rezultatov seroloških reakcij.

Krvni test za sifilis je na voljo 3 glavnim skupinam bolnikov:

1. 1 Pregled in klinični pregled populacijskih skupin (vključno z nosečnostjo, registracijo v predporodnih ambulantah, zaposlitvijo in registracijo zdravstvenega kartona itd.).
2. 2 Pregled v rizičnih skupinah (nezaščiten spolni odnos z osebo, okuženo s sifilisom, osebe po prisilnem spolnem odnosu, okužene s HIV itd.).
3. 3 Posamezniki s simptomi ali sumom na sifilitično okužbo.

Vse laboratorijske metode pogojno razdeljeni na neposredne in posredne.

1.1. Neposredne metode

1. 1 Identifikacija Treponema pallidum v temnem polju (mikroskopija temnega polja).
2. 2 Okužba poskusnih živali (gojenje pri laboratorijskih živalih).
3. 3 PCR (verižna reakcija s polimerazo).
4. 4 DNA sonda ali hibridizacija nukleinska kislina.

1.2. Posredne metode

Serološki testi so metode laboratorijska diagnostika, na podlagi odkrivanja protiteles (okrajšanih kot AT) proti antigenom treponeme pale (skrajšano kot AH). Pomembni so za potrditev diagnoze.

1. 1 Netreponemalni testi:
   • Wassermanova reakcija (RSK);
   • Reakcija mikroprecipitacije (MR, RMP) in njeni analogi, ki so navedeni spodaj;
   • Hitri test plazemskega reagina (RPR, RPR);
   • Test rdečega toluidinskega seruma (TRUST);
   • Netreponemalni test Laboratorija za raziskave spolno prenosljivih bolezni - VDRL.
2. 2 Treponemalni testi:
   • P -cija imobilizacije Treponema pallidum - RIBT / RIT;
   • P-imunofluorescenca-RIF, FTA (redčenje seruma RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • P-pasija pasivne hemaglutinacije (RPHA, TRPGA, TPHA);
   • Encimsko vezan imunosorbentni test (ELISA, EIA);
   • Imunobloting.



Slika 1 - Algoritem za serodiagnozo sifilisa

1.3. Histomorfološke metode

Te metode se zmanjšajo na ugotavljanje značilnosti histomorfologije sifilitičnih manifestacij. Pozornost je namenjena zapletenim zgradbam trdega šankra. Diferencialna diagnoza okužbe s histologijo pa je zelo težka. Histomorfologija se uporablja z drugimi laboratorijskimi in kliničnimi testi.

2. Mikroskopija Treponema pallidum v temnem polju

Ta metoda temelji na neposrednem odkrivanju bledo treponeme v preskusnem materialu z mikroskopom in posebnimi napravami (najpogosteje odvajanje erozij in razjed, redkeje cerebrospinalna tekočina in drugi substrati).

S pomočjo skarifikacije, strganja, stiskanja zaradi erozij in ulceroznih napak dobimo eksudat, nato pripravljeni pripravek pregledamo v mikroskopu.

Običajno se bledi treponemi odkrijejo v pripravku, pridobljenem iz šankra, iz žarišč sekundarnega svežega, sekundarno ponavljajočega se sifilisa, pa tudi v pikčastih bezgavkah, posteljici.

Na podlagi fenomena sijaja majhnih delcev v temnem polju, ko udari žarek svetlobe (Tyndallov pojav), vam metoda odlično omogoča razlikovanje povzročitelja sifilisa od drugih treponem na podlagi morfoloških razlik in razlik v načine premikanja bakterije.

Za mikroskopijo se uporablja poseben kondenzator temnega polja ustrezne optične ločljivosti. Pripravek dobimo po metodi zdrobljenih kapljic (kapljico materiala nanesemo na čisto razmaščeno stekleno steklo in prekrijemo z zelo tankim pokrovom).

Potopno olje kaplja na pokrov. Z vrtenjem cevi in ​​obračanjem povečevalne leče se prilagodi želena osvetlitev.

V temnem polju mikroskopa najdemo krvne celice, epitelne celice in povzročitelja sifilisa. Treponema pallidum izgleda kot spirala, zelo tanka, ki oddaja srebrno barvo, z gladkimi gibi.



Slika 2 - Mikroskopija temnega polja kot način za vizualizacijo bledo treponeme v preskusnem materialu. Vir ilustracij - CDC

Treponema pallidum je treba razlikovati od drugih treponem, vključno s Tr. refringens, ki jih najdemo v orofarinksu in na sluznici genitalij. Ta bakterija izvaja kaotična gibanja, ima široke in asimetrične, precej grobe kodre. Poleg tega se Treponema pallidum razlikuje od Tr. Microdentium, Tr. Buccalis in Tr. vincenti.

Vizualizacijo bakterij v temnem polju včasih dopolni fluorescenčni odziv. V ta namen se naravnemu materialu dodajo protitelesa proti treponemi, označena s fluorescentnim barvilom. Tako nastane kompleks, imenovan antigen-protitelo (skrajšano AG-AT), ki je predmet pregleda s fluorescenčnim mikroskopom.

3. Metoda verižne reakcije s polimerazo (PCR)

PCR, razvit leta 1991 za odkrivanje molekule bledo treponeme deoksiribonukleinske kisline (DNA), je zelo občutljiv in specifičen, omogoča identifikacijo fragmentov DNA patogena.

Ta analiza temelji na kopiranju kratkih odsekov DNK pallidumove spirohete, ki ustreza določenim parametrom in je prisotna v vzorcu. Vse to se izvaja in vitro. Reakcija se izvaja v napravi - ojačevalniku, ki zagotavlja periodizacijo temperaturnih ciklov. Pojavi se hlajenje, ki mu sledi segrevanje cevi z napako 0,1˚С.

Predlogo DNA segrevamo 2 minuti pri temperaturi 92-98 ° C (največja temperatura se uporablja, če je polimeraza termostabilna). Ko se segrejejo, se verige DNK razhajajo zaradi razpada vodikovih vezi med njimi. V koraku žarjenja se reakcijska temperatura zniža, da se temeljni premaz veže na enoverižno šablono.

Žarjenje traja približno 30 sekund, v tem času se sintetizira na stotine nukleotidov. Novo sintetizirane molekule se kopirajo s polimerazo, zaradi česar se pomnožijo posebni fragmenti deoksiribonukleinske kisline. Kasnejše odkrivanje drobcev se izvede z elektroforezo z agar gelom.

PCR diagnostika sifilisa je še vedno eksperimentalne narave, vendar je upravičena, ko se odkrije prirojena okužba, v težkih diagnostičnih primerih ali z minimalno vsebnostjo bledih treponem v preskusnem materialu.

4. Hibridizacija DNK

Hibridizacija DNA se izvaja in vitro in temelji na popolni ali delni kombinaciji dveh enoverižnih molekul DNA v eno molekulo. V primeru popolnega ujemanja komplementarnih fragmentov je združitev enostavna. Če je komplementarno ujemanje delno, pride do poenotenja verig DNA počasi. Na podlagi časa zlitja pramenov je mogoče oceniti stopnjo komplementarnosti.

Ko se DNA segreje v puferski raztopini, se vodikove vezi prekinejo z dušikovimi bazami, ki se dopolnjujejo, zato se verige DNA razhajajo. Nato dobimo pripravek iz dveh denaturiranih deoksiribonukleinskih kislin. Ob ohlajanju se enoverižne regije prerodijo. Nastane tako imenovani hibrid DNA.

Metoda omogoča oceno in analizo stopnje žarjenja ob upoštevanju posebnosti (podobnosti in razlike) DNK med vrstami ali znotraj vrste.

Uporaba sonde DNA je sestavljena iz hibridizacije označenega fragmenta DNA s specifično regijo DNA za identifikacijo komplementarnih nukleotidnih sekvenc. Za označevanje sonde se uporablja skupina nenasičenih atomov (kromoforjev) ali radioaktivnih izotopov.

Sonda DNA se uporablja za heterogeno in homogeno odkrivanje nukleinskih kislin. Vloga sonde je identificirati območja, kjer je prišlo do zlitja tarče-sonde. Detekcija v homogenem sistemu ima to prednost, da vam omogoča sledenje hibridizaciji molekul DNA v realnem času.

Bistvo metode se zmanjša na denaturacijo in renaturacijo DNK (ponovno združitev verig DNA). Postopek renaturacije nukleinske kisline in sonde DNA se konča s tvorbo "hibrida".

Specifična zaporedja nukleinskih kislin se hibridizirajo s sondo DNA, zato so identificirana in omogočajo oceno količine DNA v preskusnem materialu.

5. Okužba laboratorijskih živali

Visoka občutljivost kuncev na Treponema pallidum (približno 99,9%) jim omogoča uporabo pri diagnozi sifilitične okužbe.

Okužba zajcev poteka v raziskovalnih centrih in je "zlati standard" za ocenjevanje občutljivosti drugih metod.

Vrnimo se k treponemalnim in netreponemalnim testom, saj se najpogosteje uporabljajo. Poglejmo njihove prednosti in slabosti ter napake pri razlagi rezultatov.

6. Netreponemalni testi

To so preskusi opredelitve Protitelesa IgG in IgM do standardiziranega kardiolipinskega antigena. Njihova pomembna pomanjkljivost je relativno nizka specifičnost.

Zaradi nizkih stroškov in enostavnosti delovanja so ti testi kvalificirani diagnostični testi, potrebni za vzpostavitev predhodne diagnoze in presejalne preglede pri populaciji.

Gre za netreponemalne teste, ki se opravijo pri registraciji zdravstvene knjižice, pri prijavi na delovno mesto, pri prijavi v predporodni kliniki.

Slabosti:

1. 1 Najmanjša občutljivost v fazi primarnega sifilisa je 70%;
2. 2 Najmanjša občutljivost v fazi poznega sifilisa - 30%;
3. 3 Možnost lažno negativnih in lažno pozitivnih rezultatov;
4. 4 Kompleksnost izvajanja RSK.

Prednosti:

1. 1 Relativno nizki stroški testne proizvodnje;
2. 2 Hitri odziv;
3. 3 Možnost njihove uporabe za presejanje.

Lažno pozitivni ali šibko pozitivni vzorci so možni v naslednjih primerih:

1. 1 Kršitev izvedbene tehnologije pri blokiranju kompleksa AG-AT.
2. 2 Prisotnost avtoimunskih bolezni pri bolniku (revmatoidni artritis, revmatizem, skleroderma, sistemski eritematozni lupus, sarkoidoza itd.).
3. 3 Maligne neoplazme.
4. 4 Virusne in bakterijske okužbe.
5. 5 Endokrine bolezni ( avtoimunski tiroiditis, sladkorna bolezen).
6. 6 Nosečnost.
7. 7 Pitje alkohola.
8. 8 Sprejem maščobne hrane.
9. 9 Senilna starost.

Kot lahko vidite s seznama, obstaja dovolj razlogov za napačen rezultat. Zato bi morali biti nanj zelo previdni. Upoštevajte skupaj z RSK še dva vzorca. To je reakcija mikroprecipitacije in VDLR (njegova sprememba).

7. Reakcija vezavnega komplementa (RSK, Wasserman, RW)

To je test, ki temelji na sposobnosti komplementa, da se veže na komplekse AG-AT. Nastali kompleks se identificira s hemolitičnim sistemom. Kardiolipinski antigen izrazito poveča občutljivost vzorca.

Občutljiva je tudi Kolmerjeva reakcija, ki je sestavljena iz izvajanja pri različnih temperaturnih pogojih. Tako prva faza Kolmerjeve reakcije poteka pri temperaturi 20 ° C pol ure, druga faza pri temperaturi 4-8 ° C 20 ur. V tem času pride do vezave komplementa.

Pri izvajanju RSK je mogoče doseči ostro pozitivne rezultate. Razlog je verjetno visok titer protiteles v nerazredčenem serumu. V tem primeru se vzorci odvzamejo z zmanjševanjem odmerkov.

Za razlikovanje med stopnjami sifilisa in oceno učinkovitosti zdravljenja proti sifilitiku se določi količina AT v serumu.

Pozitivnost vzorca se oceni s križanci, redčenje seruma pa je navedeno tudi v reakcijah Wasserman, Colmer in Kann.

8. Reakcija mikroprecipitacije

Ker je napornost izvajanja zgornjih testov velika, je bila razvita pospešena metoda za serodiagnostiko sifilisa za širino pokritosti različnih skupin prebivalstva z zdravniškim pregledom, tako imenovana hitra metoda - reakcija mikroprecipitacije (skrajšano MR , RMP).

Izvaja se s kardiolipinskim antigenom in pomožnimi snovmi. Njegova prednost je zbiranje periferne krvi za raziskave. To znatno pospeši tako samo tehniko kot delo laboratorijskih tehnikov.



Slika 2 - Reakcija mikroobarjanja (shema)

Za MRI je potrebna plazma ali inaktiviran krvni serum bolnika (vsebujejo protitelesa). Nato plazmo damo v označene vdolbinice. Nato se preskusnemu materialu doda kapljica kardiolipinskega antigena, premeša in pretresi. Posledično se v serumu okužene osebe pojavijo značilni kosmiči, ki se razlikujejo po intenzivnosti.

To je preizkus kakovosti. Za količinsko opredelitev se uporabi 10 razredčitev seruma, nameščenih v 10 ustrezno označenih vdolbinic. Pri kvalitativnem MR je odgovor naveden v obliki križcev (plus) ali minus, pri kvantitativnem je naveden titer protiteles (1: 2, 1: 4 itd.).

Prisotnost kosmičev se obravnava kot pozitiven ali šibko pozitiven odziv. Pojav flokulatov je možen tudi v odsotnosti bolezni, zato se končna ocena dobljenega rezultata izvede po kontrolni študiji ali drugih reakcijah (RIBT, RIF, ELISA, RPGA).

9.VDRL

Metoda uprizarjanja reakcije z lipoidnim antigenom (AG), ki jo priporoča Svetovna zdravstvena organizacija, se upravičeno šteje za najboljšo med drugimi standardnimi netreponemalnimi testi. Razvit v ZDA, v Gruziji v laboratoriju za raziskave venskih bolezni.

Kratica ustanove je služila kot ime vzorca - VDRL. VDRL je sprememba MP. Serum bolnika s sifilisom se inaktivira in položi na stekleno steklo. Uporabljeni antigen je v različnih odstotkih sestavljen iz kardiolipina, holesterola in lecitina. Odgovor se registrira skoraj takoj.

Do izrazite flokulacije pride v prisotnosti protiteles v serumu. Serum postane reaktiven 4 tedne po okužbi. Za oceno količine protiteles se serum predhodno razredči eksponentno.

Prednosti VDRL:

1. 1 relativno visoka občutljivost;
2. 2 relativno visoka specifičnost;
3. 3 enostavnost izvedbe;
4. 4 nizki stroški reagentov;
5. 5 hiter odgovor.

Pomanjkljivost VDRL je njegova relativno visoka frekvenca lažno pozitivni rezultati.

Njihovi vzroki so vse zgoraj navedene bolezni.

Treponemalni testi se izvajajo s specifičnimi antigeni Treponema pallidum. Za vzpostavitev so potrebni in obvezni končna diagnoza... To je imunofluorescenčna reakcija (RIF), posredna reakcija hemaglutinacije (RPHA), encimsko vezan imunosorbentni test (ELISA) itd.

Po pozitivnem rezultatu netreponemalnega testa (RPR, MP, VDRL) je treba vedno opraviti treponemalne teste (pogosteje kombinacijo - RPHA, ELISA, RIF).

Treponemalni testi so težje izvedljivi kot hitri testi in so dragi Denar.

10. RIF

Ta reakcija (skrajšano RIF) se uporablja za diagnosticiranje sifilisa, vključno z latentnimi oblikami, in ponovno preverjanje pozitivnih in lažno pozitivnih vzorcev.

RIF temelji na sijaju označenih protiteles v kombinaciji s kompleksom antigen-protitelo pod kremenčevo svetilko. Metoda se je začela uporabljati v 60. letih, odlikovala pa jo je enostavnost izvajanja in visoka specifičnost (kar je nekoliko slabše od RIBT).

Ima več sprememb: RIF-10, RIF-200 in RIF-abs.

RIF je najbolj občutljiv, če ga razredčimo 10 -krat, ostali pa so bolj specifični. RIF se izvaja v dveh fazah. Hipertenziji se doda bolnikov krvni serum. Nastane kompleksen AG-AT, ki ga raziskujemo v naslednji fazi. Nadalje je kompleks, označen s fluoohromom, identificiran z mikroskopijo. Če luminiscenca ni opažena, to kaže na odsotnost specifičnih protiteles v krvnem serumu.

RIF-200 je najbolj dragocen od vseh razredčitev. Metoda je namenjena diagnostiki različne oblike sifilis, zlasti latentni sifilis in navzkrižno preverjanje pozitivnih vzorcev.

11. RIBT

Reakcija imobilizacije bledih treponem (skrajšano RIBT, RIT) je eden najtežjih seroloških testov, ki zahteva znatna prizadevanja in finančne stroške. RIBT se uporablja vedno manj, vendar ostaja pomemben pri diagnozi latentnega sifilisa.

Je zelo pomemben pri prepoznavanju lažno pozitivnih rezultatov pri nosečnicah in temelji na imobilizaciji bakterij v prisotnosti imobilizinov - poznih protiteles.

Rezultat se oceni glede na odstotek (%) imobiliziranih treponem s pomočjo posebne tabele:

1. 1 Od 0 do 20 - negativen vzorec.
2. 2 Od 21 do 50 - šibko pozitiven test.
3. 3 Od 50 do 100 - pozitivna reakcija.

Lažno pozitivni rezultati so možni tudi z RIBT. Torej je napačen odgovor možen pri okužbi s tropsko trepanematozo, pa tudi pri tuberkulozi, cirozi jeter, sarkoidozi in starejših bolnikih.

12. RPGA

Ta krvni test za sifilis se imenuje pasivna reakcija hemaglutinacije (skrajšano kot kri za RPHA, TRPHA).

Antigen za RPHA je pripravljen iz ovčjih eritrocitov, prevlečenih z drobci bledo treponeme (pridobljene iz okuženih zajcev (glej sliko 4)). Analiza uporablja pacientovo vensko kri (plazmo ali inaktiviran serum).

Pri dodajanju antigena v serum bolnika s sifilisom nastane kompleks AG-AT, ki vodi v aglutinacijo eritrocitov. aglutinacijo subjektivno določi laboratorijski sodelavec.



Slika 3 - Shema RPHA (reakcija pasivne hemaglutinacije)

Vzorec se oceni kot pozitiven, ko se pojavijo aglutinati enotne rožnate barve. Rdeče obarvanje oborine kaže na odlaganje eritrocitov. RPHA je zelo občutljiv in zelo specifičen.

12.1. Reakcija mikrohemaglutinacije

To je poenostavljena različica RPGA. Od zgoraj opisanega vzorca se razlikuje po tem, da je za izvedbo reakcije manj antigena, razredčila in krvnega seruma. 4 ure po inkubaciji seruma je mogoče oceniti vzorec. Uporablja se za presejalne in množične teste na sifilis.

13. Encimski imunski test

Encimski imunosorbentni test (na kratko ELISA) temelji na specifični reakciji antigen-protitelo. V vdolbinice se vnese biološki material (pacientov krvni serum, cerebrospinalna tekočina), na trdo površino katerega so pritrjeni antigeni treponeme pallidum. Preskusni material se inkubira, nato se izperejo protitelesa, ki se ne vežejo na antigene (glej sliko 5).

Nastali kompleks identificiramo v fazi fermentacije z uporabo encimsko označenega imunskega seruma. V kemični reakciji encim obarva nastale komplekse. Intenzivnost obarvanja je odvisna od količine specifičnih protiteles v bolnikovi krvi in ​​se zabeleži s spektrofotometrom.



Slika 4 - Shema ELISA (encimsko vezani imunosorbentni test)

Občutljivost ELISA je več kot 95%. Metoda se uporablja v avtomatiziranem načinu za preučevanje določenih skupin prebivalstva: darovalcev, nosečnic in drugih, za pojasnitev diagnoze s pozitivnimi in lažno pozitivnimi netreponemalnimi testi.

14. Imunobloting

Imunobloting je zelo občutljiva metoda, modifikacija preprostega ELISA. Reakcija temelji na elektroforezi z ločevanjem antigenov bledih treponem.

Ločeni imunodeterminanti se prenesejo na nitrocelulozni papir in razvijejo v ELISA. Nato se serum inkubira in nevezana protitelesa sperejo. Nastali material obdelamo z encimsko označenimi imunoglobulini (IgM ali IgG).

15. Klinična ocena rezultatov laboratorijske diagnoze sifilisa

V spodnji tabeli 1 smo prikazali možne rezultate preskusov in njihovo razlago. Kot lahko vidite v tabeli, je celovita ocena testov primarnega pomena pri dekodiranju.



Tabela 1 - Interpretacija rezultatov seroloških reakcij (krvni testi za sifilis). Za ogled kliknite tabelo

Ocenjevanje reaktivnosti preskusov se izvaja tudi s "križci":

1. 1 Največji odziv (močno pozitiven test) je označen s 4 križci.
2. 2 Pozitiven vzorec je označen s 3 križanci.
3. 3 Slabo pozitivno reakcijo označujeta dva križca.
4. 4 En križ označuje dvomljiv in negativen rezultat.
5. 5 Negativni odgovor je označen z znakom minus.

Problem optimizacije laboratorijske diagnostike sifilisa do danes ni izgubil svojega pomena. Sodobne metode diagnostika kljub želji znanstvenikov, da diagnostiko pripeljejo do čim večje občutljivosti in specifičnosti, zahtevata kontrolni pregled in individualni pristop.

Značilnost sifilitične okužbe je pojav serorezistence, ki nikoli ni dobil znanstvene razlage. Diagnoza se postavi po celovitem pregledu bolnika z epidemiološkimi, kliničnimi, laboratorijskimi metodami.

V ozadju gospodarskega in tehničnega razvoja medicine je napredek tudi pri razvoju novih meril za diagnozo sifilisa. Vse to vam bo omogočilo hitro, uspešno in natančno zdravljenje bolnikov.

Punkcija regionalnih bezgavk

Serološka diagnostika

• Wassermanova reakcija (RV),
• sedimentne reakcije Kahna in Sachs-Vitebsk (citoholne),
• reakcija na steklo (hitra metoda),

• reakcija imobilizacije bledih treponem (RIBT),
• imunofluorescenčna reakcija (RIF).

Wassermanova reakcija (RV)

Običajno se RV daje z dvema ali tremi antigeni. Najpogosteje se uporabljata visoko občutljiv kardiolipinski antigen (izvleček govejega srca, obogaten s holesterolom in lecitinom) in treponemalni antigen (ultrazvočno obdelana suspenzija anatogenih kulturno bledih treponem). Skupaj z reagini pacientovega krvnega seruma ti antigeni tvorijo imunski kompleks, ki je sposoben adsorbirati in vezati komplement. Za vizualno določitev nastalega kompleksa (reagini + antigen + komplement) se kot indikator uporablja hemolitični sistem (mešanica ovčjih eritrocitov s hemolitičnim serumom). Če je komplement povezan v 1. fazi reakcije (reagini + antigen + komplement), ne pride do hemolize - eritrociti se oborijo v zlahka opazen sediment (PB pozitiven). Če komplement v fazi 1 ni vezan zaradi odsotnosti reaginov v testiranem serumu, ga bo hemolitični sistem uporabil in prišlo bo do hemolize (PB negativen). Resnost hemolize pri postavitvi RV je ocenjena z njenimi prednostmi: popolna odsotnost hemolize ++++ ali 4+ (RV je močno pozitiven); komaj začela hemoliza +++ ali 3+ (PB pozitiven); pomembna hemoliza ++ ali 2+ (PB je šibko pozitiven); nerazumljiva slika hemolize ± (PB je dvomljiv); popolna hemoliza - (Wassermanova reakcija je negativna).

Poleg kvalitativne ocene RV obstaja tudi kvantitativna formulacija z različnimi razredčitvami seruma (1:10, 1:20, 1:80, 1: 160, 1: 320). Titr reaginov je določen z največjim redčenjem, ki še vedno daje močno pozitiven (4+) rezultat. Količinska nastavitev RV je pomembna pri diagnozi nekaterih kliničnih oblik sifilitične okužbe, pa tudi pri spremljanju učinkovitosti zdravljenja. Trenutno je Wassermanova reakcija postavljena z dvema antigenoma (kardiolipinski in treponemalno zveneč Reiterjev sev). RV praviloma postane pozitiven pri 5-6 tednih po okužbi pri 25-60%bolnikov, pri 7-8 tednih-pri 75-96%, pri 9-19 tednih-pri 100%, čeprav pri Zadnja leta včasih prej ali slej. Hkrati se titer reaginov postopoma povečuje in doseže največjo vrednost (1: 160-1: 320 in več) v primeru pojava generaliziranih izpuščajev (sekundarni sveži sifilis). Ko je RV pozitiven, se postavi diagnoza primarnega seropozitivnega sifilisa.
S sekundarno svežo in sekundarni ponavljajoči se sifilis, je RV pozitiven pri 100% bolnikov, pri izčrpanih bolnikih s oslabljeno imunostjo pa je mogoče opaziti negativen rezultat. Nato se titer reaginov postopoma zmanjšuje in pri sekundarnem ponavljajočem sifilisu običajno ne presega 1: 80-1: 120.
S terciarnim sifilisom RV je pozitiven pri 65-70% bolnikov in ponavadi je nizek titer reaginov (1: 20-1: 40). Pri poznih oblikah sifilisa (sifilis notranjih organov, živčni sistem) pozitiven RV opazimo v 50-80% primerov. Titri reaginov so od 1: 5 do 1: 320.
Z latentnim sifilisom pozitiven RV opazimo pri 100% bolnikov. Tigar reaginov je od 1:80 do 1: 640, pri poznem latentnem sifilisu pa od 1:10 do 1:20. Hitro zmanjšanje titra reaginov (do popolne negativnosti) med zdravljenjem kaže na učinkovitost zdravljenja.

Slabosti Wassermanove reakcije- pomanjkanje občutljivosti (v začetna faza primarni sifilis je negativen). Negativen je tudi pri 1/3 bolnikov, če so bili v preteklosti zdravljeni z antibiotiki, pri bolnikih s terciarno aktivnim sifilisom z lezijami kože in sluznic, osteoartikularnega aparata, notranjih organov, centralnega živčnega sistema, s poznim prirojeni sifilis.
Pomanjkanje specifičnosti- Wassermanova reakcija je lahko pozitivna pri osebah, ki prej niso bile bolne ali imajo sifilis. Lažno pozitivne (nespecifične) rezultate RV opazimo pri bolnikih, ki trpijo za sistemskim eritematoznim lupusom, gobavostjo, malarijo, malignimi novotvorbami, poškodbami jeter, obsežnim miokardnim infarktom in drugimi boleznimi, včasih pa tudi pri popolnoma zdravih ljudeh.
Odkrije se kratkotrajna lažno pozitivna Wassermanova reakcija pri nekaterih ženskah pred ali po porodu, pri uživalcih drog, po anesteziji, uživanju alkohola. Lažno pozitivni RV je praviloma šibko izražen, pogosteje z nizkim titrom reaginov (1: 5-1: 20), pozitiven (3+) ali šibko pozitiven (2+). Pri množičnih seroloških preiskavah je pogostnost lažno pozitivnih rezultatov 0,1-0,15%. Za premagovanje pomanjkanja občutljivosti uporabljajo nastavitev na mrazu (ovratnikova reakcija), hkrati pa jo uprizarjajo z drugimi serološkimi reakcijami.

Sedimentacijske reakcije Kahna in Sachs-Vitebskega

Reakcija imobilizacije treponeme pallidum (RIBT)

Imunofluorescenčna reakcija (RIF)

Reakcija pasivne hemaglutinacije (RPHA)

Tehnika odvzema krvi za serološke teste

Serološka odpornost

• Prav(absolutno, brezpogojno)-potrebno je izvesti dodatno zdravljenje proti sifilitiku v kombinaciji z nespecifično terapijo za povečanje telesnih imunskih sil.
• Relativno-po popolnem zdravljenju bledi treponemi tvorijo ciste ali oblike L, ki so v telesu v nizko virulentnem stanju, zato dodatno zdravljenje ne spremeni kazalnikov seroloških reakcij, zlasti RIF in RIBT.

Psevdoodpornost- po zdravljenju kljub pozitivnim serološkim reakcijam v telesu ni blede treponeme. V telesu ni antigena, vendar se proizvodnja protiteles nadaljuje, kar se zabeleži, ko se določijo serološke reakcije.
Serološka odpornost se lahko razvije zaradi:

• neustrezno zdravljenje brez upoštevanja recepta in stopnje bolezni;
• nezadosten odmerek in zlasti zaradi neupoštevanja telesne mase bolnikov;
• kršitev intervala med dajanjem zdravil;
• ohranitev bledih treponem v telesu kljub celovitemu specifičnemu zdravljenju zaradi njihove odpornosti na penicilin in druga zdravila za kemoterapijo v primeru prisotnosti skritih, inkapsuliranih lezij v notranjih organih, živčnem sistemu, bezgavke za katere so nedostopni antibakterijska zdravila(pogosto blede treponeme najdemo v tkivih brazgotine mnogo let po koncu terapije, včasih pa lahko blede treponeme najdemo v bezgavkah 3-5 let po anti-sifilitični terapiji);
• upad zaščitne sile z različnimi boleznimi in zastrupitvami (endokrinopatija, alkoholizem, odvisnost od drog itd.);
• splošno izčrpanost (uživanje hrane, bogate z vitamini, beljakovinami, maščobami).

• sočasne nespecifične bolezni notranjih organov, motnje srčno -žilnega sistema, revmatizem, disfunkcije endokrinega in živčnega sistema, hude kronične dermatoze, maligne novotvorbe;
• lezije živčnega sistema (huda travma, pretres možganov, duševne travme);
• nosečnost; kronična zastrupitev z nikotinom, alkoholom; nalezljive bolezni(malarija, tuberkuloza, virusni hepatitis, dizenterija, tifus, tifus in ponavljajoča se vročina).

velikost pisave

ODLOČBA Ministrstva za zdravje ZSSR z dne 02-09-85 1161 O IZBOLJŠANJU SEROLOŠKE DIAGNOSTIKE SIFILISA (skupaj z NAVODILI O ... Dejansko leta 2018

Način nastavitve RIF - ABS

Testni serum

Krv za pridobivanje krvnega seruma se vzame iz kubitalne vene v čisto in suho epruveto v prostornini 5 ml in predeluje na enak način kot za nastavitev Wassermanove reakcije. Krvni serum se inaktivira enkrat pri temperaturi 56 ° 30 minut. Ker so RIF-abs nameščeni nesterilno, uporaba sterilnih posod in skladnost s pogoji sterilnosti pri shranjevanju krvnega seruma ni potrebna. Pomembno je le za daljše ohranjanje krvnega seruma pred študijo.

Kot antigen se uporablja suspenzija patogenih bledih treponem seva Nichols iz 7-dnevnega kunčjega orhitisa. Zdravi samci zajcev z negativnimi rezultati Wassermanove reakcije in RIT se okužijo intra-testikularno in ob pojavu orhitisa blede treponeme odstranimo iz testisov na enak način kot v primeru prejemanja antigena za RHS. Nastalo suspenzijo blede treponeme vlijemo iz kosov testisov v sterilne epruvete z bombažnimi čepi in pustimo v hladilniku pri 4 ° za en dan, nato pa jo ločimo od usedline in pod enakimi pogoji celotno obdobje uporaba je ohranjena.

Prejemanje in shranjevanje antigena zahteva skladnost s sterilnimi pogoji, ker z istim antigenom lahko reakcijo nastavimo v 2-4 mesecih. Za antigen je treba izbrati suspenzijo, v kateri ni opaziti aglutinacije treponem in jih je v zadostni količini. Antigen je mogoče dobiti v ampulah iz drugih laboratorijev. Pred vsako nastavitvijo reakcije suspenzijo dobro premešamo in pregledamo v mikroskopu s kondenzatorjem temnega polja, da ugotovimo njeno gostoto. Za nastavitev RIF-abs je potrebno imeti suspenzijo, ki vsebuje 40-60 treponemov v temnem vidnem polju; v prisotnosti debelejše suspenzije jo je treba razredčiti.

Kot sorbent za RIF-abs se lahko uporabi ultrazvočni treponemalni antigen za RSK, ki ga proizvaja podjetje Kaunas za proizvodnjo bakterijskih pripravkov Ministrstva za zdravje ZSSR. Je suspenzija mešanice kultiviranih sevov bledo treponeme V, VII, VIII, IX in Reiter, uničena z ultrazvokom. Vsako serijo sorbenta je treba pred uporabo v RIF-abs za diagnostične namene titrirati.

Titracija sorbentov

Sorbenti se titrirajo na krvne serume bolnikov s sifilisom, kar daje oster (4+) in šibko (2+) pozitiven rezultat v RIF v razredčitvi 1: 5, pa tudi na krvne serume oseb brez sifilisa okužbo, kar daje negativen rezultat pri RIF-5 in nespecifično pozitivnost (2+ ali več).

Primer določanja titra sorbenta

Celoten sorbent razredčimo s fosfatnim pufrom, pH = 7,2, 2, 3, 4 -krat ali več. Vzamejo 3 krvne serume pri bolnikih s sifilisom, od katerih eden daje izrazito pozitiven (4+) rezultat pri RIF -5, 2 - šibko pozitiven (2+) in 5 krvnih serumov pri ljudeh brez okužbe s sifilisom, 3 od tega 3 dajejo nespecifične rezultate in RIF-5 (2+ in več). Vsi krvni serumi se 5 -krat razredčijo s sorbentom, 2, 3, 4 in večkrat razredčijo s fosfatnim pufrom. Nato se v reakciji pregleda krvni serum. Po upoštevanju rezultatov je izbrana razredčitev sorbenta, v kateri serumirani krvni serumi bolnikov s sifilisom ohranijo stopnjo pozitivnosti, podobno tisti, pridobljeni s krvnimi serumi, razredčenimi s fosfatnim pufrom, in krvnim serumom oseb brez sifilitične okužbe ne oddaja luminescence. Ta razredčitev sorbenta je njegov titer.

Titr sorbenta je bil v tem primeru razredčitev 1: 3, v kateri so vsi krvni serumi pri bolnikih s sifilisom ohranili stopnjo pozitivnosti, pridobljeno pri kontroli, hkrati pa je bila nespecifična pozitivnost nesifilitičnih krvnih serumov zanesljivo odstraniti.

Luminiscenčni serum proti vrstam

Za preučevanje človeškega seruma v RIF-abs je potreben krvni serum, označen s fluorokromom, živali, imuniziranih s človeškimi serumskimi beljakovinami. Liofiliziran luminiscenčni serum raztopimo v sterilnih pogojih v destilirani vodi v količini, ki je navedena na nalepki ampule, vlijemo v sterilno epruveto z gumijastim zamaškom in med uporabo 1-2 meseca hranimo pri 4 ° C.

Na dan reakcije se zahtevana količina tega seruma razredči s titrom z destilirano vodo. Delovno razredčenje seruma, navedeno na etiketi, ni primerno za uprizarjanje reakcije za namene serodiagnoze sifilisa, zato je treba titer vsake serije določiti na novo.

Tabela N 13

Rezultati titracije sorbenta

Titracija luminiscenčnega seruma proti vrstam

Vzemite 5 krvnih serumov pri bolnikih s sifilisom in 5 krvnih serumov pri zdravih ljudeh, jih 5 -krat razredčite s sorbentom (ob upoštevanju njegovega titra) in nastavite reakcijo z uporabo v drugi fazi različnih razredčitev luminiscenčnega seruma proti humanim serumskim globulinom serije katerega titer je določen. Treba je opozoriti, da je titer luminiscenčnih serumov, ki jih trenutno proizvaja I.E. NF Gamalei, niha, ko je RIF-abs nastavljen od 1: 100 do 1: 140. Pri upoštevanju reakcije je treba pri predhodnem titru luminiscenčnega seruma upoštevati, da je razredčitev, če se uporablja s pozitivnimi krvnimi serumi, dobra fluorescenca treponemov smo dobili in z negativno fluorescenco antigena nismo prejeli. Večje redčenje luminiscenčnega seruma kot titer vodi do zmanjšanja občutljivosti reakcije, manjše redčenje pa do zmanjšanja specifičnosti. Po določitvi predhodnega titra ga je treba določiti na večjem številu pozitivnih in negativnih krvnih serumov. Za končni titer se lahko šteje tisti, ki je bil preizkušen na 100 krvnih serumih, od tega bi moralo biti vsaj 20 pri bolnikih s sifilisom.

Da bi preprečili kalitev po razredčitvi suhega luminiscenčnega seruma z destilirano vodo, mu je treba dodati mortiolat s količino 1 volumna njegove raztopine 1: 1000 do 9 volumnov luminiscenčnega seruma. Pri jemanju novih ampul iste serije je treba titer preveriti in določiti le za 10 očitno pozitivnih in negativnih krvnih serumov.

Primer za določitev predhodnega titra svetlečega seruma proti vrstam

Pripravite 60 pripravkov, oštevilčenih od 1 do 60. Vzemite 10 krvnih serumov - 5 pri bolnikih s sifilisom, 5 pri zdravih ljudeh. Vsi krvni serumi se 5 -krat razredčijo s sorbentom, razredčenim v titru.

Na pripravke s številkami 1-10, 11-20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60 se v prvi fazi reakcije nanese istih 10 krvnih serumov, razredčenih 5-krat s sorbentom. V II. Fazi reakcije za 1-10 pripravkov nanesemo luminiscenčni serum, razredčen 1: 100, pri 11-20 1: 110, pri 21-30-1: 120, pri 31-40-1: 130, pri 41-50 - 1: 140, pri 51-60 - 1: 150.

RIF-abs tehnika uprizoritve

Iz antigena pripravljamo pripravke na tankih, dobro razmaščenih steklenih stekelcih, na hrbtni strani katerih so s steklorezcem označeni krogi s premerom 0,7 cm (10 krogov na 1 steklenem stekelcu). Znotraj kroga se na steklo nanese antigenska suspenzija bledih treponem. S zaprtim koncem Pasteurjeve pipete se suspenzija s krožnimi gibi porazdeli po krogu, posuši na zraku in fiksira 10 minut v kemično čistem acetonu. Potem so zdravila oštevilčena. Inaktivirani krvni testi serumov se 5 -krat razredčijo s sorbentom, razredčenim v titru z pufersko raztopino. V stojalo je postavljena vrsta epruvet, katerih število in število ustreza številu in številu testiranih krvnih serumov. Sorbent, razredčen s titrom, vlijemo v epruvete s pipeto, 0,2 ml, nato dodamo 0,05 ml polnega krvnega seruma in dobro premešamo. Razredčenje krvnega seruma se lahko izvede z aparatom Florinsky. Krvni serum, razredčen s sorbentom, nanesemo na antigen, da enakomerno prekrije bris, pripravke pa postavimo v vlažno komoro, ki jo zapremo s pokrovom in postavimo v termostat pri 37 ° 30 minut (I. faza reakcija). Po prvi fazi pripravke previdno speremo v 2 porcijah fosfatnega pufra, v drugem delu pa pripravke postavimo 10 minut, posušimo, nato pa jih spet damo v vlažno komoro, luminiscenčni serum, razredčen s titrom, nanesemo in pustimo pri sobni temperaturi 30 minut (reakcije II faze). Na koncu druge faze pripravke speremo s fosfatnim pufrom, kot je opisano zgoraj, posušimo in nanesemo na površino brisov s kapljico nesvetlečega potopnega olja (dimetil ftalat).

Študija pripravkov poteka v fluorescenčnem mikroskopu z živosrebrno-kremenčevo svetilko DRSH-250 s potopnim sistemom, okularjem 4X ali 5X, filtri SZS-7 ali 14, FS-1. BS-8 in ZhS-18 ali T-2N. Reakcijo upoštevamo z ovrednotenjem luminiscence bledih treponem. Krvni serum se šteje za pozitiven pri RIF-abs, če daje sijaj za 4+, 3+ in 2+. Sijajni zeleno-rumeni sij je ocenjen s 4+, svetel sijaj je ocenjen z 3+, šibek sij pa z 2+. Serumi se štejejo za negativne, če dajejo 1+ sijaj (treponeme v pripravku so obarvane bolj intenzivno kot ozadje) ali pa ga ne dajo.

Pri vsaki nastavitvi RIF-abs je treba uporabiti naslednje kontrole:

Močno pozitiven nadzor. Krvni serum bolnika s sifilisom, ki daje 4+ sijaj, ko ga 5 -krat razredčimo s pufrom. Ko se 5 -krat razredči s sorbentom, krvni serum ne sme izgubiti stopnje pozitivnosti za več kot 1+.

Slabo pozitivna kontrola. Celoten ali razredčen krvni serum bolnika s sifilisom, dajanje šibka stopnja luminiscenca antigena za 2+, če jo 5 -krat razredčimo s pufrom. Pri razredčitvi s sorbentom je treba ohraniti njegovo pozitivnost.

Nespecifičen nadzor. Nesifilitični krvni serum, ki po razredčitvi s pufrom fluorescira vsaj 2+. Ko ga razredčimo s sorbentom, je treba njegovo pozitivnost odpraviti.

Nadzor antigena, sorbenta in luminiscenčnega seruma je mogoče nastaviti le pri uporabi novih serij teh sestavin.

Metoda določanja RIF-abs s kapilarno krvjo

Nastavitev RIF-abs je možna ne le s krvnim serumom, ampak tudi s krvjo, odvzeto s prsta. To spremembo RIF-abs lahko uporabimo pri pregledu otrok za sifilis, ko je pri odraslih težko pridobiti kri iz vene, med množičnim pregledom različnih kontingentov za sifilis.

Pri določanju RIF-abs s krvjo se uporabljajo iste reakcijske sestavine kot pri določanju RIF-abs s krvnim serumom (antigen, sorbent, luminescentni serum). Titer luminiscentnega seruma se določi v skladu z zgornjo shemo, toda ko pride do reakcije s krvjo. Po prebadanju bolnikovega prsta se z mikropipeto odvzame kri za preiskavo do oznake 0,1 ml, ki se hitro napihne v epruveto, ki vsebuje 0,3 ml destilirane vode, temeljito premeša s pipeto in filtrira skozi papirnati filter, navlažen z destilirano vodo . Reakcija z razredčeno krvjo je možna tako na dan jemanja zdravila, kot tudi po 1-2 dneh, pod pogojem, da je shranjena pri 4 °.

Neposredno pred pripravo reakcije 0,1 ml celotnega vzorca krvi, vključenega v reakcijo, dodamo 0,1 ml celotnega sorbenta, premešamo s pipeto in stresamo, postavimo v termostat pri 37 ° 30 minut. Nato kri, obdelano s sorbentom, nanesemo na brise antigena in postavimo v vlažno komoro pri 37 ° (1 faza reakcije). Po izteku obdobja izpostavljenosti pripravke speremo v prvem delu fosfatnega pufra, tako da na stekelcih ne ostanejo sledi krvi, in jih za 10 minut postavimo v drugi del pufra. Po sušenju brisov izvedemo fazo II reakcije. V tem primeru se na pripravke nanese luminiscenčni serum proti človeškim globulinom, razredčen s titrom, določenim za to spremembo RIF. Diapozitive v vlažni komori ponovno postavimo v termostat pri 37 °.

Po 30 minutah pripravke ponovno speremo v 2 porcijah fosfatnega pufra 10 minut, posušimo in namestimo na fluorescenčno mikroskopijo. Študija zdravil in evidentiranje rezultatov reakcije se izvajata na enak način kot pri določanju RIF-abs s krvnim serumom.

Tehnika nastavitve RIF-200

Tehniki nastavitve RIF-abs in RIF-200 sta si podobni. Pri nastavitvi RIF-200 se obdelava testiranih krvnih serumov, priprava antigena, priprava luminiscenčnega seruma proti vrstam in njegova titracija izvedejo na enak način kot pri nastavljanju RIF-abs. Upoštevati je treba le, da so titri luminiscenčnega seruma, ki so trenutno proizvedeni v RIF-200, od 1: 20 do 1: 50.

RIF-200 uprizoritvena tehnika

Testirani krvni serumi se 200 -krat razredčijo s fosfatnim pufrom. V ta namen so v stojalo postavljene 3 vrste epruvet, katerih število in oštevilčenje v vsaki vrstici ustreza številu in oštevilčenju testiranih krvnih serumov v delovnem zvezku. V prvi vrsti se vlijejo celi testni krvni serumi, v drugi vrsti se v epruvete vlije 0,45 ml pufra, v tretji - 0,95 ml pufra. V drugi vrsti se pripravi 10-kratna razredčitev krvnih serumov, za katero se iz vsake epruvete prve vrste vzame 0,05 ml preskusnega krvnega seruma z ločeno 1 ml merilno pipeto, preneseno v ustrezno epruveto drugega vrstico in premešamo z tam na voljo vmesnim pomnilnikom. Iz vsake epruvete druge vrste z isto pipeto prenesite 0,05 ml že 10 -krat razredčenega krvnega seruma v ustrezno epruveto tretje vrstice in dobite 200 -krat redčenje.

Pri uprizoritvi reakcije na pripravke, nameščene v vlažno komoro, uporabimo 200 -krat razredčene krvne serume, tako da njihovo število, navedeno na epruvetah, ustreza številkam na steklenih stekelcih. Po nanosu na pripravke v krvnem serumu se mokra komora za 30 minut postavi v termostat s temperaturo 37 ° (faza I reakcije). Nato pripravke speremo 10 minut v 2 porcijah pufra in posušimo. Po tem jih spet postavimo v vlažno komoro in na vse nanesemo luminiscenčni serum, razredčen s titrom (faza II reakcije). Drugo fazo izvajamo 30 minut pri sobni temperaturi, nato pripravke speremo 10 minut, posušimo in namestimo na fluorescenčno mikroskopijo.

Rezultati RIF-200 se upoštevajo na enak način kot RIF-abs.

V primeru, da zdravnike zanima titer fluorescenčnih protiteles v krvnem serumu bolnika, je treba RIF-abs in RIF-200 nastaviti z zaporednim redčenjem testiranih krvnih serumov in titrom fluorescenčnih protiteles, da se upošteva največja redčenje krvni serum, ki še vedno daje pozitiven rezultat reakcije. Običajno je titer označen s številko, ki označuje stopnjo razredčitve testiranega krvnega seruma, na primer 5, 10, 20, 40 itd. (RIF-abs) ali 200, 400, 800 itd. (RIF-200).

Pri uprizoritvi obeh sprememb reakcije za redčenje preskušenih krvnih serumov in za izpiranje pripravkov po fazah I in II je treba uporabiti fototski pufer naslednje sestave: 1 L destilirane vode, 6,8 g natrijevega klorida, 1,48 g natrijeve disupstituirane fosforne kisline, 0, 43 g monosubstituiranega kalijevega fosfata (pH = 7,2). Pripravljeno raztopino hranimo pri sobni temperaturi največ en teden.

Zaradi možnosti pridobitve negativnih rezultatov v prisotnosti fluorescenčnih protiteles krvi in ​​seruma med zdravljenjem s penicilinom ne bi smeli preiskati v RIF-abs in RIF-200.

Metodologija vzpostavitve sistema RIF-c

Zgodnja diagnoza lezij živčnega sistema pri sifilisu je nujno vprašanje v boju proti tej bolezni. Ker ima RIF-c večjo občutljivost kot vsi drugi testi, ki se uporabljajo za diagnosticiranje alkoholizma sifilisa, se lahko ta sprememba RIF priporoči za diagnozo sifilitičnih lezij centralnega živčnega sistema pri vseh oblikah sifilisa.

Za nastavitev RIF-c se uporablja isti antigen, luminiscenčni serum, kot za nastavitev RIF-abs in RIF-200 s krvnim serumom. Določanje fluorescenčnih protiteles v cerebrospinalni tekočini in krvnem serumu ter upoštevanje reakcije so prav tako podobni.

Cerebrospinalna tekočina se v reakcijo vnese neaktivirana in cela. Preden reakcijo nastavite, jo lahko shranite v zamrzovalnem prostoru hladilnika v epruvetah pod gumijastimi zamaški do 2 tedna. Odtaljevanje se izvaja pri sobni temperaturi.

Tehnika uprizoritve RIF-c

V I. fazi reakcije na antigen nanesemo 0,05 ml nerazredčene preskusne cerebrospinalne tekočine, pripravke postavimo v vlažno komoro 30 minut pri sobni temperaturi. Nato jih 10 minut speremo s fosfatnim pufrom, pH = 7,2, posušimo. V fazi II se na pripravke nanese luminiscenčni serum, razredčen s titrom, ki se titrira pri nastavitvi reakcije z cerebrospinalna tekočina... Pripravke hranimo pri sobni temperaturi 30 minut v vlažni komori, speremo, posušimo in namestimo na fluorescenčno mikroskopijo.

Viri napak

1. Neupoštevanje pogojev priprave, shranjevanja reagentov in nastavitve reakcije.

2. Slaba kakovost luminescentnega seruma in nenatančna določitev njegovega titra.

3. Nanos preskusnega materiala ali luminiscenčnega seruma, ko se odzove reakcija ne na zdravilo, ampak na drugo stran stekelca.

4. Nepravilna nastavitev osvetlitve v fluorescenčnem mikroskopu.

5. Nizkokakovostni antigen.

Analiza sifilisa se izvaja z uporabo različnih metod za odkrivanje patogena. Z razvojem patologije se pojavi veliko število posebnih znakov, zato se za vzpostavitev natančne diagnoze bolna oseba celovito pregleda. Splošna analiza kri ni zelo informativna, ne uporablja se pri diagnosticiranju te spolne okužbe.

Vrste raziskav in biomateriali za analizo

Za odkrivanje bolezni se uporabljajo različne tehnike in biomateriali. V zgodnjih fazah se sifilis ugotovi z bakterioskopskim testom. Vzorce pregledamo pod mikroskopom. Naprava vam omogoča odkrivanje sevov patogena. Kasneje izvajajo serološki testi kri. Zahvaljujoč njim se v vzorcih odkrijejo antigeni in protitelesa proti sifilisu.

Metode za določanje genitalne okužbe so razdeljene v dve kategoriji:

• Neposredno, ki razkriva patogeni mikroorganizem. Ti vključujejo: mikroskopijo temnega polja, RIT-analizo (okužba kuncev z biomaterialom za raziskave), PCR metoda- verižna reakcija s polimerazo (z njeno pomočjo se odkrijejo genetski elementi patogena).
• Posredno (serološko) odkrije protitelesa proti patogenu. Proizvajajo se imunski sistem kot odziv na okužbo.

Serološke tehnike so razdeljene v dve kategoriji: treponemalne in netreponemalne.

• Netreponemalni, vključno z: toluidinsko rdečim testom, analizo RSK, RPR testom, krvnim testom po metodi hitrega raka na mehurju.
• Treponemal, vključno z imunoblotingom, RSK testom, analizo RIT, študijo RIF, testom RPGA, analizo ELISA.

Informacijska vsebina testov okužbe je drugačna. Pogosteje opravljajo glavne vrste testov za sifilis, ki vključujejo serološke metode.

Biomaterial za raziskave

Za identifikacijo blede treponeme, patogena, ki izgleda kot spirala in povzroča sifilis, se vzamejo vzorci:

• venska kri;
• cerebrospinalna tekočina (izločanje iz hrbteničnega kanala);
• vsebina bezgavk;
• razjedno tkivo.

Če je treba opraviti teste za odkrivanje sifilisa, se kri ne daje le iz kubitalne vene, ampak tudi iz prsta. Na izbiro biomateriala in način raziskovanja vplivata resnost poteka okužbe in oprema diagnostičnega centra.

Neposredne raziskave

Prepričljiv dokaz sifilisa je identifikacija povzročiteljev bolezni pod mikroskopom. Na ta način patogen najdemo pri 8 od 10. Negativen rezultat pri preostalih 2 bolnikih ne pomeni, da niso okuženi.

Študija se izvaja na primarni in sekundarni stopnji (stopnji) bolezni, za katero je značilen pojav izpuščajev na koži in sifilisa (razjede) na epitelnih tkivih ali sluznicah. V izcedku iz lezij najdemo patogene, ki povzročajo spolne bolezni.

Natančneje, kompleksen test, označen kot RIF - reakcija imunofluorescence, se spopada z definicijo treponemov. Vzorec za raziskave predhodno obdelamo s fluorescenčnimi protitelesi. Žarijoče spojine se držijo skupaj z bakterijami. Laboratorijski pomočnik pri pregledu vzorcev pod mikroskopom opazi peneče patogene.

Test se uporablja za zgodnjo diagnozo bolezni. Dlje ko bolezen traja, manjša je občutljivost raziskovalnih metod. Poleg tega pade po zdravljenju izpuščajev in razjed z antiseptiki ter pri bolnikih, ki so bili na zdravljenju. Včasih raziskave dajo lažno negativne in lažno pozitivne rezultate.

Analiza RIT je zelo natančna metoda za odkrivanje sifilisa. Pri izvajanju testa je treba na rezultate čakati dolgo. Dokler okuženi kunec ne pokaže znakov okužbe. Test se uporablja zelo redko, kljub dejstvu, da je zelo natančen.

Z uporabo verižna reakcija polimeraze za sifilis se določijo genetski elementi patogenov. Edina pomanjkljivost PCR je njegova visoka cena.

Ne-treponemalni testi

Ti krvni testi pomagajo odkriti protitelesa, ki se pojavijo kot odziv na kardiolipin, spojino, povezano s splošno strukturo membran patogenov.

Wassermanova reakcija (PB ali RW)

Najbolj znana študija o sifilisu je Wassermanova reakcija. RV je vključen v kategorijo reakcij fiksacije komplementa (CAC). Nove metode RSC se bistveno razlikujejo od tradicionalnih RW. Toda kot doslej jih označuje koncept "Wassermanove reakcije".

Imunski sistem sintetizira protitelesa (markerje) kot odgovor na invazijo treponemov. Odkrijejo jih med preiskavo krvi za sifilis z Wassermanovo reakcijsko metodo. Pozitiven rezultat RW potrjuje, da je subjekt okužen.

Reakcija hemolize - indeks analize RV. Z njim sodelujeta 2 snovi: hemolitični serum in ovnovski eritrociti. Serum nastane z imunizacijo zajca z ovnovimi eritrociti. Dejavnost biološke tekočine se zmanjša s segrevanjem.

Indikatorji RV so odvisni od tega, ali je hemoliza minila ali ne. V vzorcu brez markerjev pride do hemolize. V tem primeru je reakcija na antigene nemogoča. Komplement porabimo za interakcijo z ovčjimi eritrociti. Ko so v vzorcu markerji, kompliment reagira z antigeni. V tem primeru ne pride do hemolize.