Sifilisul este o boală infecțioasă cauzată de spirocheta Treponema pallidum, predispusă la progresivă curs cronic, cu o periodizare clară a simptomelor clinice.

Predominanța căii de transmitere sexuală peste cea de contact și cea transplacentară plasează această boală într-o serie de boli cu transmitere sexuală (BTS, ITS). Pe lângă aceste metode de transmitere a infecției, o cale artificială (din latinescul „artificio” - creat artificial) joacă un rol special.

Este tipic pentru instituțiile medicale, implementat în principal într-un spital. Infecția apare în timpul transfuziilor de sânge, a diferitelor operații chirurgicale, a metodelor de diagnostic invazive.

În ciuda carantinei de sânge donat, problema detectării sifilisului la donatori în diferite stadii ale bolii este încă relevantă.

De aceea măsuri de diagnosticîn sifilis, acestea necesită standardizarea, introducerea de noi metode de identificare sensibile și informative, precum și minimizarea erorilor și interpretarea greșită a rezultatelor testelor.

Arata tot

1. Clasificarea metodelor de diagnosticare de laborator

Diagnosticul sifilisului are unele particularități și diferă de diagnosticul altor infecții bacteriene. Structura complexă și proprietățile antigenice ale treponemului palid provoacă erori în interpretarea rezultatelor reacțiilor serologice.

Un test de sânge pentru sifilis este oferit pentru 3 grupe principale de pacienți:

1. 1 Screening și examinare clinică a grupurilor de populație (inclusiv sarcina, înregistrarea la clinicile prenatale, angajarea și înregistrarea unei înregistrări medicale etc.).
2. 2 Screening în grupurile de risc (sex neprotejat cu o persoană infectată cu sifilis, persoane după sex forțat, infectate cu HIV etc.).
3. 3 Persoane cu simptome sau suspiciune de infecție sifilitică.

Tot metode de laborator subdivizat condiționat în direct și indirect.

1.1. Metode directe

1. 1 Identificarea Treponema pallidum într-un câmp întunecat (microscopie în câmp întunecat).
2. 2 Infecția animalelor experimentale (cultivarea la animalele de laborator).
3. 3 PCR (reacție în lanț a polimerazei).
4. 4 sondă ADN sau hibridizare acizi nucleici.

1.2. Metode indirecte

Testele serologice sunt metode diagnostic de laborator, bazat pe detectarea anticorpilor (prescurtat AT) la antigenii treponemelor pal (prescurtat ca AH). Sunt esențiale pentru confirmarea diagnosticului.

1. 1 Teste non-treponemice:
   • Reacția Wasserman (RSK);
   • Reacția de microprecipitare (MR, RMP) și analogii săi, care sunt prezentați mai jos;
   • Test rapid de reacție plasmatică (RPR, RPR);
   • Test de ser roșu de toluidină (TRUST);
   • Test non-treponemal al Laboratorului de cercetare a bolilor cu transmitere sexuală - VDRL.
2. 2 teste treponemice:
   • P-tion de imobilizare a Treponema pallidum - RIBT / RIT;
   • P-tion de imunofluorescență - RIF, FTA (diluarea serului RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • P-tion de hemaglutinare pasivă (RPHA, TRPGA, TPHA);
   • Test imunosorbent legat de enzime (ELISA, EIA);
   • Imunoblotarea.



Figura 1 - Algoritm pentru serodiagnosticul sifilisului

1.3. Metode histomorfologice

Aceste metode se reduc la identificarea trăsăturilor histomorfologiei manifestărilor sifilitice. Se acordă atenție complexității structurii șancului dur. Cu toate acestea, diagnosticul diferențial al infecției cu histologie este foarte dificil. Histomorfologia este utilizată cu alte teste de laborator și clinice.

2. Microscopia Treponema pallidum într-un câmp întunecat

Această metodă se bazează pe detectarea directă a treponemului pal în materialul de testat folosind un microscop și dispozitive speciale (cel mai adesea descărcare de eroziuni și ulcere, mai rar lichid cefalorahidian și alte substraturi).

Cu ajutorul scarificării, răzuirii, stoarcerii de eroziuni și defecte ulcerative, se obține exsudat, apoi preparatul preparat este examinat la microscop.

De obicei, treponemele palide sunt detectate într-un preparat obținut dintr-un șancru, din focare de sifilis secundar proaspăt, secundar recurent, precum și punctate ale ganglionilor limfatici, placentă.

Bazat pe fenomenul strălucirii particulelor mici într-un câmp întunecat atunci când o rază de lumină lovește (fenomenul lui Tyndall), metoda vă permite perfect să diferențiați agentul cauzal al sifilisului de alte treponeme pe baza diferențelor morfologice și a diferențelor în modalități de mișcare a bacteriei.

Pentru microscopie, se folosește un condensator special pe câmp întunecat cu rezoluție optică adecvată. Preparatul se obține prin metoda picăturii zdrobite (o picătură de material se aplică pe o lamă de sticlă degresată curată și acoperită cu o lamă de acoperire foarte subțire).

Uleiul de imersie este scăpat pe sticla de acoperire. Prin rotirea tubului și rotirea lentilei de mărire, iluminarea dorită este reglată.

În câmpul întunecat al microscopului, se găsesc celule sanguine, celule epiteliale și agentul cauzal al sifilisului. Treponema pallidum arată ca o spirală, foarte subțire, care emite o culoare argintie, cu mișcări netede.



Figura 2 - Microscopie în câmp întunecat ca modalitate de a vizualiza treponema palidă în materialul de testat. Sursă de ilustrație - CDC

Treponema pallidum trebuie distinsă de alte treponeme, inclusiv Tr. refringens, care se găsește în orofaringe și pe mucoasa genitală. Această bacterie face mișcări haotice, are bucle largi și asimetrice, destul de grosiere. În plus, Treponema pallidum se distinge de Tr. Microdentium, Tr. Buccalis și Tr. vincenti.

Vizualizarea bacteriilor într-un câmp întunecat este uneori completată de un răspuns de fluorescență. Pentru aceasta, la materialul nativ se adaugă anticorpi anti-treponemali marcați cu un colorant fluorescent. Acesta formează un complex numit antigen-anticorp (prescurtat ca AG-AT), care este obiectul examinării cu ajutorul unui microscop fluorescent.

3. Metoda reacției în lanț a polimerazei (PCR)

PCR, dezvoltat în 1991 pentru a detecta molecula de acid dezoxiribonucleic (ADN) a treponemului pal, este foarte sensibilă și specifică, vă permite să detectați fragmente de ADN ale agentului patogen.

Această analiză se bazează pe copierea secțiunilor scurte ale ADN-ului spirochetului pallidum, care îndeplinește parametrii specificați și este prezent în eșantion. Toate acestea se fac in vitro. Reacția se efectuează într-un dispozitiv - un amplificator, care asigură periodizarea ciclurilor de temperatură. Se produce răcirea, urmată de încălzirea tuburilor cu o eroare de 0,1˚С.

Șablonul ADN este încălzit timp de 2 minute la o temperatură de 92-98 ° C (temperatura maximă este utilizată dacă polimeraza este termostabilă). Când sunt încălzite, firele de ADN diverg datorită defalcării legăturilor de hidrogen dintre ele. În etapa de recoacere, temperatura de reacție este redusă pentru a lega grundul de șablonul monocatenar.

Recocirea durează aproximativ 30 de secunde, timp în care sunt sintetizate sute de nucleotide. Moleculele nou sintetizate sunt copiate de polimerază, ca urmare, fragmentele specifice de acid dezoxiribonucleic sunt multiplicate. Detectarea ulterioară a fragmentelor se efectuează utilizând electroforeza pe gel de agar.

Diagnosticul PCR al sifilisului este încă de natură experimentală, dar se justifică atunci când este detectată o infecție congenitală, în cazuri dificile de diagnostic sau cu un conținut minim de treponeme palide în materialul testat.

4. Hibridizare ADN

Hibridizarea ADN se realizează in vitro și se bazează pe combinația completă sau parțială a două molecule de ADN monocatenare într-o singură moleculă. În cazul unei potriviri complete a fragmentelor complementare, unirea este ușoară. Dacă potrivirea complementară este parțială, atunci unificarea firelor de ADN este lentă. Pe baza calendarului de fuziune a firelor, gradul de complementaritate poate fi evaluat.

Când ADN-ul este încălzit într-o soluție tampon, legăturile de hidrogen sunt rupte de baze azotate, care sunt complementare, ca urmare, lanțurile ADN diverg. Apoi, se obține un preparat din doi acizi dezoxiribonucleici denaturați. La răcire, regiunile monocatenare sunt renaturate. Se formează așa-numitul hibrid ADN.

Metoda permite evaluarea și analiza ratei de recoacere, luând în considerare caracteristicile (similitudini și diferențe) ale ADN-ului între specii sau în cadrul unei specii.

Utilizarea unei sonde ADN constă în hibridizarea unui fragment de ADN marcat cu o regiune ADN specifică pentru a identifica secvențe de nucleotide complementare. Pentru etichetarea sondei se utilizează un grup de atomi nesaturați (cromofori) sau izotopi radioactivi.

O sondă ADN este utilizată pentru detectarea eterogenă și omogenă a acizilor nucleici. Rolul sondei este de a identifica zonele în care s-a produs fuziunea țintă-sondă. Detectarea într-un sistem omogen are avantajul că vă permite să urmăriți hibridizarea moleculelor de ADN în timp real.

Esența metodei este redusă la denaturarea și renaturarea ADN (reunificarea firelor de ADN). Procesul de renaturare a acidului nucleic și a sondei ADN se încheie cu formarea unui „hibrid”.

Secvențe specifice de acid nucleic hibridizează cu o sondă ADN și, astfel, sunt identificate și permit estimarea cantității de ADN din materialul testat.

5. Infecția animalelor de laborator

Sensibilitatea ridicată a iepurilor la Treponema pallidum (aproximativ 99,9%) le permite să fie utilizate în diagnosticul infecției sifilitice.

Infecția iepurilor se efectuează în centrele de cercetare și reprezintă „etalonul de aur” pentru evaluarea sensibilității altor metode.

Să revenim la testele treponemale și non-treponemale, deoarece acestea sunt utilizate cel mai des. Să luăm în considerare avantajele și dezavantajele acestora, precum și erorile în interpretarea rezultatelor.

6. Teste non-treponemice

Acestea sunt teste de definiție Anticorpi IgGși IgM la antigenul cardiolipinei standardizat. Dezavantajul lor semnificativ este specificitatea lor relativ scăzută.

Costul redus și ușurința performanței fac ca aceste teste să fie calificate pentru testele de diagnostic necesare pentru stabilirea unui diagnostic preliminar și screening în populație.

Testele non-treponemice sunt trecute la înregistrarea unei cărți medicale, la aplicarea unui loc de muncă, la înregistrarea la o clinică prenatală.

Dezavantaje:

1. 1 Sensibilitatea minimă în stadiul sifilisului primar este de 70%;
2. 2 Sensibilitate minimă în stadiul sifilisului târziu - 30%;
3. 3 Posibilitatea rezultatelor fals negative și fals pozitive;
4. 4 Complexitatea implementării RSK.

Avantaje:

1. 1 Cost relativ scăzut al producției de testare;
2. 2 Obținerea unui răspuns rapid;
3. 3 Posibilitatea utilizării lor pentru screening.

Obținerea de probe fals pozitive sau slabe pozitive este posibilă în următoarele cazuri:

1. 1 Încălcarea tehnologiei de execuție, la blocarea complexului AG-AT.
2. 2 Prezența bolilor autoimune la pacient (poliartrită reumatoidă, reumatism, sclerodermie, lupus eritematos sistemic, sarcoidoză etc.).
3. 3 Neoplasme maligne.
4. 4 Infecții virale și bacteriene.
5. 5 boli endocrine ( tiroidita autoimună, Diabet).
6. 6 Sarcina.
7. 7 Consumul de alcool.
8. 8 Primirea alimentelor grase.
9. 9 vârsta senilă.

După cum puteți vedea din listă, există suficiente motive pentru rezultatul greșit. Prin urmare, ar trebui să fim foarte atenți la asta. Luați în considerare, împreună cu RSK, încă două mostre. Aceasta este o reacție de microprecipitare și VDLR (modificarea sa).

7. Reacția complementului de legare (RSK, Wasserman, RW)

Acesta este un test bazat pe capacitatea complementului de a se lega de complexele AG-AT. Complexul format este identificat folosind sistemul hemolitic. Antigenul cardiolipinei crește semnificativ sensibilitatea probei.

Reacția lui Kolmer este, de asemenea, sensibilă, care constă în efectuarea la diferite condiții de temperatură. Deci, prima fază a reacției Kolmer se desfășoară la o temperatură de 20 ° C timp de o jumătate de oră, a doua fază la o temperatură de 4-8 ° C timp de 20 de ore. În acest timp, are loc legarea complementului.

Când efectuați RSK, este posibil să obțineți rezultate puternic pozitive. Motivul este probabil titrul ridicat de anticorpi din serul nediluat. În acest caz, probele sunt prelevate cu doze scăzute.

Pentru a diferenția etapele sifilisului și a evalua eficacitatea tratamentului antisifilitic, se determină cantitatea de AT din ser.

Pozitivitatea eșantionului este evaluată folosind încrucișări, iar diluția serică este indicată și în reacțiile Wasserman, Colmer și Kann.

8. Reacția de microprecipitare

Deoarece laboriozitatea efectuării testelor de mai sus este excelentă, a fost dezvoltată o metodă accelerată pentru serodiagnosticul sifilisului pentru a acoperi diferitele grupuri de populație prin examinarea medicală, așa-numita metodă expresă - o reacție de microprecipitare (prescurtată ca MR , RMP).

Se efectuează cu antigen cardiolipin și excipienți. Avantajul său este colectarea de sânge periferic pentru cercetare. Acest lucru accelerează semnificativ atât tehnica în sine, cât și munca tehnicienilor de laborator.



Figura 2 - Reacția de microprecipitare (schemă)

Pentru RMN, este necesară plasmă sau ser de sânge inactivat al pacientului (acestea conțin anticorpi). Apoi plasma este plasată în godeurile marcate. Apoi, o picătură de antigen cardiolipin este adăugată la materialul de testat, amestecată și agitată. Ca urmare, fulgii caracteristici apar în serul unei persoane infectate, variind ca intensitate.

Acesta este un test de calitate. Cuantificarea utilizează 10 diluții de ser plasate în 10 godeuri etichetate corespunzător. Cu MR calitativ, răspunsul este indicat sub formă de cruci (plus) sau minus, cu cantitativ, este indicat titrul anticorpului (1: 2, 1: 4 și așa mai departe).

Prezența fulgilor este considerată ca un răspuns pozitiv sau slab pozitiv. Apariția unui floculat este posibilă și în absența unei boli, prin urmare, evaluarea finală a rezultatului obținut se efectuează după un studiu de control sau alte reacții (RIBT, RIF, ELISA, RPGA).

9.VDRL

Metoda de organizare a unei reacții cu un antigen lipoid (AG), recomandată de Organizația Mondială a Sănătății, este considerată pe bună dreptate cea mai bună dintre alte teste standard non-treponemale. Dezvoltat în SUA, Georgia în laboratoarele de cercetare a bolilor venerale.

Abrevierea instituției a servit drept nume pentru eșantion - VDRL. VDRL este o modificare a MP. Serul unui pacient cu sifilis este inactivat și plasat pe o lamă de sticlă. Antigenul utilizat este format din cardiolipină, colesterol și lecitină în procente variabile. Răspunsul este înregistrat aproape imediat.

Flocularea distinctă are loc în prezența anticorpilor în ser. Serul devine reactiv la 4 săptămâni după infecție. Pentru a evalua cantitatea de anticorpi, serul este diluat preliminar exponențial.

Avantajele VDRL:

1. 1 sensibilitate relativ ridicată;
2. 2 specificitate relativ ridicată;
3. 3 ușurința implementării;
4. 4 cost redus al reactivilor;
5. 5 obținerea unui răspuns rapid.

Dezavantajul VDRL este relativ frecventa inalta rezultate fals pozitive.

Cauzele lor sunt aceleași boli enumerate mai sus.

Testele treponemice se efectuează cu antigeni specifici Treponema pallidum. Sunt necesare și obligatorii pentru stabilire diagnosticul final... Aceasta este o reacție de imunofluorescență (RIF), o reacție de hemaglutinare indirectă (RPHA), o analiză imunosorbentă legată de enzime (ELISA) etc.

După un rezultat pozitiv al unui test non-treponemal (RPR, MP, VDRL), trebuie efectuate întotdeauna teste treponemale (mai des o combinație - RPGA, ELISA, RIF).

Testele treponemice sunt mai dificil de realizat decât testele rapide și sunt costisitoare Bani.

10. RIF

Această reacție (prescurtată RIF) este utilizată pentru a diagnostica sifilisul, inclusiv formele latente, și pentru a verifica din nou probele pozitive și fals pozitive.

RIF se bazează pe strălucirea anticorpilor marcați atunci când este combinată cu un complex antigen-anticorp sub o lampă de cuarț. Metoda a început să fie aplicată în anii 60 și s-a remarcat prin ușurința sa de implementare și specificitatea ridicată (care este puțin inferioară RIBT).

Are mai multe modificări: RIF-10, RIF-200 și RIF-abs.

RIF este cel mai sensibil atunci când este diluat de 10 ori, iar restul sunt mai specifice. RIF se desfășoară în două faze. Serul sanguin al pacientului se adaugă la hipertensiune. Se formează un AG-AT complex, care este investigat în faza următoare. Apoi, complexul marcat cu fluorocrom este identificat prin microscopie. Dacă nu se observă luminescență, aceasta indică absența anticorpilor specifici în serul sanguin.

RIF-200 este cea mai valoroasă dintre toate diluțiile. Metoda este destinată diagnosticării diferite forme sifilis, în special sifilis latent și verificarea încrucișată a probelor pozitive.

11. RIBT

Reacția de imobilizare a treponemelor palide (prescurtată ca RIBT, RIT) este unul dintre cele mai dificile teste serologice care necesită eforturi semnificative și costuri financiare. RIBT este utilizat din ce în ce mai puțin, dar relevanța sa rămâne în diagnosticul sifilisului latent.

Este de o mare importanță în recunoașterea rezultatelor fals pozitive la femeile gravide și se bazează pe imobilizarea bacteriilor în prezența imobilizinelor - anticorpi tardivi.

Rezultatul este evaluat pe procentul (%) de treponeme imobilizate folosind un tabel special:

1. 1 De la 0 la 20 - eșantion negativ.
2. 2 De la 21 la 50 - test slab pozitiv.
3. 3 De la 50 la 100 - o reacție pozitivă.

Rezultate fals pozitive sunt posibile și cu RIBT. Deci, un răspuns incorect este posibil cu infecția cu trepanematoză tropicală, precum și cu tuberculoză, ciroză hepatică, sarcoidoză și pacienți vârstnici.

12. RPGA

Acest test de sânge pentru sifilis se numește reacție de hemaglutinare pasivă (prescurtat ca sânge pentru RPHA, TRPHA).

Antigenul pentru RPHA este preparat din eritrocite de oaie acoperite cu fragmente de treponema palidă (obținute de la iepuri infectați (vezi Figura 4)). Analiza utilizează sângele venos al pacientului (plasmă sau ser inactivat).

Când se adaugă antigen la serul unui pacient cu sifilis, se formează un complex AG-AT, care duce la aglutinarea eritrocitelor. aglutinarea este determinată subiectiv de un asistent de laborator.



Figura 3 - Schema RPHA (reacție de hemaglutinare pasivă)

Proba este evaluată ca pozitivă atunci când apar aglutinate de culoare roz uniformă. Colorarea roșie a precipitatului indică depunerea eritrocitelor. RPHA este extrem de sensibil și foarte specific.

12.1. Reacție de microhemaglutinare

Este o versiune simplificată a RPGA. Diferă de proba descrisă mai sus prin faptul că există mai puțini antigeni, diluanți și ser din sânge pentru a efectua reacția. La 4 ore după incubarea serului, proba poate fi evaluată. Este utilizat pentru screening și teste de masă pentru sifilis.

13. Imunotest enzimatic

Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA pe scurt) se bazează pe o reacție specifică antigen-anticorp. Materialul biologic (serul de sânge al pacientului, lichidul cefalorahidian) este introdus în puțuri, pe suprafața solidă a căreia sunt fixate antigenele treponema pallidum. Materialul testat este incubat, apoi anticorpii care nu se leagă de antigeni sunt spălați (vezi Figura 5).

Complexul rezultat este identificat în stadiul de fermentare folosind ser imun marcat cu enzime. Într-o reacție chimică, enzima colorează complexele rezultate. Intensitatea colorării depinde de cantitatea de anticorpi specifici din sângele pacientului și este înregistrată cu un spectrofotometru.



Figura 4 - Schema ELISA (test imunosorbent legat de enzime)

Sensibilitatea ELISA este mai mare de 95%. Metoda este utilizată într-un mod automatizat pentru a studia grupurile de populație decretate: donatori, femei însărcinate și altele, pentru a clarifica diagnosticul cu teste pozitive și fals pozitive non-treponemale.

14. Imunoblotarea

Imunoblotarea este o metodă extrem de sensibilă, o modificare a unui ELISA simplu. Reacția se bazează pe electroforeză cu separarea antigenelor treponemelor palide.

Imunodeterminantele separate sunt transferate pe hârtie cu nitroceluloză și dezvoltate în ELISA. Apoi, serul este incubat și anticorpii nelegați sunt spălați. Materialul rezultat este tratat cu imunoglobuline marcate cu enzime (IgM sau IgG).

15. Evaluarea clinică a rezultatelor diagnosticului de laborator al sifilisului

În tabelul 1 de mai jos, am arătat rezultatele posibile ale testelor și interpretarea lor. După cum puteți vedea în tabel, o evaluare cuprinzătoare a testelor este de primă importanță în decodificare.



Tabelul 1 - Interpretarea rezultatelor reacțiilor serologice (teste de sânge pentru sifilis). Pentru a vizualiza, faceți clic pe tabel

Evaluarea reactivității testelor se efectuează și cu „încrucișări”:

1. 1 Răspunsul maxim (test puternic pozitiv) este indicat de 4 încrucișări.
2. 2 O probă pozitivă este indicată cu 3 încrucișări.
3. 3 O reacție slab pozitivă este indicată de două cruci.
4. 4 O cruce indică un rezultat dubios și negativ.
5. 5 Un răspuns negativ este marcat cu un semn minus.

Problema optimizării diagnosticului de laborator al sifilisului nu și-a pierdut relevanța până în prezent. Metode moderne diagnosticul, în ciuda dorinței oamenilor de știință de a aduce diagnosticul la cea mai înaltă sensibilitate și specificitate posibilă, necesită o verificare de control și o abordare individuală.

O caracteristică a infecției sifilitice este fenomenul de serorezistență, care nu a primit niciodată o explicație științifică. Diagnosticul se face după o examinare completă a pacientului prin metode epidemiologice, clinice, de laborator.

Pe fondul dezvoltării economice și tehnice a medicinei, există și progrese în dezvoltarea de noi criterii pentru diagnosticul sifilisului. Toate acestea vă vor permite să tratați rapid, cu succes și cu precizie pacienții.

Puncția ganglionilor limfatici regionali

Diagnostic serologic

• Reacția lui Wasserman (RV),
• reacții sedimentare ale lui Kahn și Sachs-Vitebsk (citocolice),
• reacție pe sticlă (metodă expresă),

• reacția de imobilizare a treponemelor palide (RIBT),
• reacție de imunofluorescență (RIF).

Reacția lui Wasserman (RV)

De obicei RV se administrează cu doi sau trei antigeni. Cele mai frecvent utilizate sunt antigenul cardiolipinei extrem de sensibil (extract de inimă bovină îmbogățit cu colesterol și lecitină) și antigenul treponemal (suspendarea tratată cu ultrasunete a treponemelor palide culturale anatogene). Împreună cu reaginele serului sanguin al pacientului, acești antigeni formează un complex imunitar capabil de adsorbție și legare a complementului. Pentru a determina vizual complexul format (reagin + antigen + complement), se utilizează ca indicator un sistem hemolitic (un amestec de eritrocite de oaie cu ser hemolitic). Dacă complementul este asociat în faza 1 a reacției (reagine + antigen + complement), hemoliza nu apare - eritrocitele precipită într-un sediment ușor de remarcat (PB pozitiv). Dacă în faza 1 complementul nu este legat din cauza absenței de reagine în serul testat, acesta va fi utilizat de sistemul hemolitic și va avea loc hemoliza (PB negativ). Severitatea hemolizei în setarea RV este evaluată prin avantajele sale: absența completă a hemolizei ++++ sau 4+ (RV este puternic pozitivă); abia a început hemoliza +++ sau 3+ (PB pozitiv); hemoliză semnificativă ++ sau 2+ (PB este slab pozitiv); imagine de neînțeles a hemolizei ± (PB este îndoielnic); hemoliza completă - (reacția Wasserman este negativă).

În plus față de evaluarea calitativă a RV, există o formulare cantitativă cu diferite diluții de ser (1:10, 1:20, 1:80, 1: 160, 1: 320). Titrul de reagine este determinat de diluarea maximă, care dă totuși un rezultat puternic pozitiv (4+). Setarea cantitativă a RV este importantă în diagnosticul unor forme clinice de infecție sifilitică, precum și în monitorizarea eficacității tratamentului. În prezent, reacția Wasserman este prezentată cu doi antigeni (cardiolipina și treponemul au sunat tulpina lui Reiter). De regulă, RV devine pozitiv la 5-6 săptămâni după infecție la 25-60% dintre pacienți, la 7-8 săptămâni - la 75-96%, la 9-19 săptămâni - la 100%, deși în anul trecut uneori mai devreme sau mai târziu. În același timp, titrul de reagine crește treptat și atinge o valoare maximă (1: 160-1: 320 și peste) în cazul apariției erupțiilor generalizate (sifilis secundar proaspăt). Când RV este pozitiv, se pune un diagnostic de sifilis seropozitiv primar.
Cu proaspete secundare iar sifilisul recurent secundar, RV este pozitiv la 100% dintre pacienți, dar la pacienții subnutriți cu imunitate slăbită, se poate observa un rezultat negativ. Ulterior, titrul de reagine scade treptat și cu sifilis secundar recurent nu depășește de obicei 1: 80-1: 120.
Cu sifilis terțiar RV este pozitiv la 65-70% dintre pacienți și, de obicei, există un titru scăzut de reagine (1: 20-1: 40). Cu forme tardive de sifilis (sifilisul organelor interne, sistem nervos) RV pozitiv se observă în 50-80% din cazuri. Titrul de reagine variază de la 1: 5 la 1: 320.
Cu sifilis latent RV pozitiv se observă la 100% dintre pacienți. Titrul de reagine este de la 1:80 la 1: 640, iar în sifilisul latent târziu de la 1:10 la 1:20. O scădere rapidă a titlului de reagine (până la negativitate completă) în timpul tratamentului indică eficacitatea tratamentului.

Dezavantaje ale reacției Wasserman- lipsa de sensibilitate (in stadiul inițial sifilisul primar este negativ). De asemenea, este negativ la 1/3 din pacienți dacă au fost tratați cu antibiotice în trecut, la pacienții cu sifilis activ terțiar cu leziuni ale pielii și membranelor mucoase, aparat osteoarticular, organe interne, sistemul nervos central, cu sifilis congenital.
Lipsa de specificitate- Reacția lui Wasserman poate fi pozitivă la persoanele care nu au fost anterior bolnave sau au sifilis. În special, rezultatele fals pozitive (nespecifice) ale RV sunt observate la pacienții care suferă de lupus eritematos sistemic, lepră, malarie, neoplasme maligne, leziuni hepatice, infarct miocardic extins și alte boli și, uneori, la persoane complet sănătoase.
Este detectată o reacție Wasserman fals pozitivă pe termen scurt la unele femei înainte sau după naștere, la consumatorii de droguri, după anestezie, consum de alcool. De regulă, RV fals pozitiv este slab exprimat, mai des cu un titru scăzut de reagine (1: 5-1: 20), pozitiv (3+) sau slab pozitiv (2+). În examinările serologice de masă, frecvența rezultatelor fals pozitive este de 0,1-0,15%. Pentru a depăși lipsa de sensibilitate, utilizează setarea la rece (reacția gulerului) și, în același timp, este pusă în scenă cu alte reacții serologice.

Reacțiile sedimentare ale lui Kahn și Sachs-Vitebsky

Reacție de imobilizare Treponema pallidum (RIBT)

Reacție de imunofluorescență (RIF)

Reacție de hemaglutinare pasivă (RPHA)

Tehnica de recoltare a sângelui pentru teste serologice

Rezistența serologică

• Adevărat(absolut, necondiționat) - este necesar să se efectueze un tratament antisifilitic suplimentar, combinat cu o terapie nespecifică pentru a crește forțele imune ale corpului.
• Relativ- după tratamentul complet, treponemele palide formează forme chistice sau L, care se află în organism într-o stare virulentă scăzută și, ca urmare, un tratament suplimentar nu modifică indicatorii reacțiilor serologice, în special RIF și RIBT.

Pseudo-rezistență- după tratament, în ciuda reacțiilor serologice pozitive, treponema palidă în organism este absentă. Nu există antigen în organism, dar producția de anticorpi continuă, care se înregistrează atunci când sunt setate reacții serologice.
Rezistența serologică se poate dezvolta datorită:

• tratament inadecvat fără a lua în considerare prescripția și stadiul bolii;
• doză insuficientă și, în special, din cauza nerespectării greutății corporale a pacienților;
• încălcarea intervalului dintre administrarea medicamentelor;
• conservarea treponemelor palide în organism în ciuda tratamentului specific deplin, datorită rezistenței lor la penicilină și la alte medicamente chimioterapice în cazul prezenței leziunilor ascunse, încapsulate în organele interne, sistemul nervos, noduli limfatici, care sunt inaccesibile pentru medicamente antibacteriene(adesea treponemele palide se găsesc în țesuturile cicatricei la mulți ani după terminarea terapiei, în ganglionii limfatici este uneori posibilă detectarea treponemelor palide la 3-5 ani după terapia antisifilitică);
• declin forțe de protecție cu diverse boli și intoxicații (endocrinopatie, alcoolism, dependență de droguri etc.);
• epuizare generală (consumul de alimente sărace în vitamine, proteine, grăsimi).

• boli nespecifice concomitente ale organelor interne, tulburări ale sistemului cardiovascular, reumatism, disfuncții ale sistemului endocrin și nervos, dermatoze cronice severe, neoplasme maligne;
• leziuni ale sistemului nervos (traume severe, comotie cerebrală, traume mentale);
• sarcina; intoxicație cronică cu alcool, droguri cu nicotină; boli infecțioase(malarie, tuberculoză, hepatita virala, dizenterie, tifos, febra tifoidă și recidivantă).

marimea fontului

ORDIN al Ministerului Sănătății al URSS din data de 02-09-85 1161 PRIVIND ÎMBUNĂTĂȚIREA DIAGNOSTICULUI SEROLOGIC AL SIFILISULUI (împreună cu INSTRUCȚIUNI PENTRU ... Actual în 2018

Metoda de setare RIF - ABS

Testează serul

Sângele pentru obținerea serului de sânge este preluat din vena cubitală într-o eprubetă curată și uscată într-un volum de 5 ml și procesat în același mod ca și pentru stabilirea reacției Wasserman. Serul sanguin este inactivat o dată la temperatura de 56 ° timp de 30 de minute. Datorită faptului că RIF-abs este plasat nesteril, nu este necesară utilizarea vaselor sterile și respectarea condițiilor de sterilitate la depozitarea serului de sânge. Este important doar pentru o conservare mai lungă a serului sanguin înainte de studiu.

Ca antigen, se utilizează o suspensie de treponeme palide patogene ale tulpinii Nichols dintr-o orhită de iepure de 7 zile. Iepurii masculi sănătoși, cu rezultate negative ale reacției Wasserman și RIT, sunt infectați intratesticular și, atunci când apare orhita, treponemele palide sunt îndepărtate din testicule în același mod ca și în cazul primirii antigenului pentru RHS. Suspensia rezultată a treponemului pal este turnată din bucățile testiculelor în tuburi sterile cu dopuri de bumbac și lăsată la frigider la 4 ° pentru o zi, după care este separată de sediment și în aceleași condiții se păstrează întreaga perioadă de utilizare. .

Primirea și stocarea antigenului necesită respectarea condițiilor de sterilitate, deoarece cu același antigen, reacția poate fi setată în termen de 2-4 luni. Pentru antigen, trebuie să alegeți suspensia în care nu se observă aglutinarea treponemelor și există o cantitate suficientă din acestea. Antigenul poate fi obținut în fiole de la alte laboratoare. Înainte de fiecare setare a reacției, suspensia este amestecată bine și examinată la microscop cu un condensator de câmp întunecat pentru a determina densitatea acesteia. Pentru setarea RIF-abs, este necesar să aveți o suspensie care conține 40-60 treponeme în câmpul vizual întunecat; în prezența unei suspensii mai groase, aceasta trebuie diluată.

Ca sorbent pentru RIF-abs, poate fi utilizat un antigen ultrasonic treponemal pentru RSK, produs de întreprinderea Kaunas pentru producerea preparatelor bacteriene ale Ministerului Sănătății al URSS. Este o suspensie a unui amestec de tulpini de treponema pal cultivate V, VII, VIII, IX și Reiter, distruse prin ultrasunete. Fiecare lot de sorbent trebuie titrat înainte de a fi utilizat în RIF-abs în scopuri de diagnostic.

Titrare sorbentă

Sorbanții sunt titrați pe serul sanguin al pacienților cu sifilis, dând un rezultat ascuțit (4+) și slab (2+) pozitiv în RIF la o diluție de 1: 5, precum și pe serul sanguin al persoanelor libere de sifilis. infecție, dând un rezultat negativ în RIF-5 și pozitivitate nespecifică (2+ sau mai mult).

Un exemplu de determinare a titlului unui sorbent

Întregul absorbant este diluat cu tampon fosfat, pH = 7,2, 2, 3, 4 ori sau mai mult. Luați 3 seruri de sânge de la pacienții cu sifilis, dintre care unul dă un rezultat puternic pozitiv (4+) în RIF-5, 2 - slab pozitiv (2+) și 5 seruri de sânge de la persoane libere de infecție cu sifilis, dintre care 3 dați rezultate nespecifice și RIF-5 (2+ și mai mult). Toate serurile de sânge sunt diluate de 5 ori cu un sorbent, diluate la rândul lor de 2, 3, 4 și de mai multe ori cu tampon fosfat. Apoi, serul de sânge este examinat în reacție. După luarea în considerare a rezultatelor, se selectează o diluție sorbentă, în care serurile de sânge sorbate ale pacienților cu sifilis păstrează un grad de pozitivitate similar cu cel obținut cu serurile de sânge diluate cu tampon fosfat și serul sanguin al persoanelor libere de infecție sifilitică nu emite luminescență. Această diluție a absorbantului este titlul său.

Titrul sorbentului în acest caz a fost o diluție de 1: 3, în care toate serurile de sânge ale pacienților cu sifilis au păstrat gradul de pozitivitate obținut la control și, în același timp, pozitivitatea nespecifică a serurilor de sânge nesifilitice a fost eliminat în mod fiabil.

Ser luminescent anti-specie

Pentru a studia serul uman în RIF-abs, este necesar un ser sanguin marcat cu fluorocrom al animalelor imunizate cu proteine ​​serice umane. Serul luminiscent liofilizat se dizolvă în condiții de sterilitate în apă distilată în volumul indicat pe eticheta fiolei, se toarnă într-un tub steril cu dop de cauciuc și se păstrează la 4 ° C timp de 1-2 luni în timpul utilizării.

În ziua reacției, cantitatea necesară din acest ser este diluată prin titru cu apă distilată. Diluția de lucru a serului indicată pe etichetă nu este adecvată pentru organizarea unei reacții în scopul serodiagnosticării sifilisului, prin urmare titrul fiecărui lot trebuie determinat din nou.

Tabelul N 13

Rezultatele titrării sorbente

Titrarea serului luminescent anti-specie

Luați 5 seruri de sânge de la pacienți cu sifilis și 5 seruri de sânge de la persoane sănătoase, diluați-le de 5 ori cu un sorbent (ținând cont de titlul acestuia) și configurați o reacție folosind în faza II diferite diluții de ser luminescent împotriva globulinelor serice umane din serie al cărui titru este determinat. Trebuie remarcat faptul că titlul serurilor luminescente produse în prezent de I.E. NF Gamalei, fluctuează atunci când RIF-abs este setat de la 1: 100 la 1: 140. Când se ia în considerare reacția, titrul preliminar al serului luminescent ar trebui să fie considerat diluarea, atunci când este utilizat cu seruri sanguine pozitive, o bună fluorescență a treponemelor a fost obținut și cu fluorescență negativă a antigenului nu a fost primit. O diluție mai mare a serului luminescent decât titrul duce la o scădere a sensibilității reacției și o diluție mai mică la o scădere a specificității. După determinarea titrului preliminar, acesta trebuie specificat pe un număr mai mare de seruri sanguine pozitive și negative. Titlul final poate fi considerat cel care a fost testat pe 100 seruri de sânge, iar dintre acestea, cel puțin 20 ar trebui să provină de la pacienți cu sifilis.

Pentru a preveni germinarea după diluarea serului luminiscent uscat cu apă distilată, este necesar să i se adauge morthiolat la o rată de 1 volum de soluție 1: 1000 până la 9 volume de ser luminescent. Atunci când se iau fiole noi din aceeași serie, titrul trebuie verificat și specificat doar pentru 10 seruri de sânge evident pozitive și negative.

Exemplu pentru determinarea titrului preliminar al unui ser luminescent anti-specie

Pregătiți 60 de preparate, numerotate de la 1 la 60. Luați 10 seruri de sânge - 5 de la pacienții cu sifilis, 5 de la oameni sănătoși. Toate serurile de sânge sunt diluate de 5 ori cu un sorbent diluat în titru.

Pe preparatele numerotate 1-10, 11-20, 21-30, 31-40, 41-50, 51-60, în prima fază a reacției se aplică aceleași 10 seruri de sânge diluate de 5 ori cu absorbantul. În faza II a reacției pentru 1-10 preparate, serul luminiscent se aplică diluat 1: 100, la 11-20 1: 110, la 21-30 - 1: 120, la 31-40 - 1: 130, la 41 -50 - 1: 140, la 51-60 - 1: 150.

Tehnica de punere în scenă RIF-abs

Din antigen, preparatele sunt preparate pe lamele de sticlă subțiri, bine degresate, pe spatele cărora cercurile cu diametrul de 0,7 cm sunt marcate cu un tăietor de sticlă (10 cercuri pe 1 lamă de sticlă). În cerc, o sticlă se aplică o suspensie antigenică a treponemelor palide. Cu capătul sigilat al unei pipete Pasteur, suspensia este distribuită într-o mișcare circulară în interiorul cercului, uscată în aer și fixată timp de 10 minute în acetonă chimic pură. Apoi, medicamentele sunt numerotate. Serurile de sânge testate inactivate sunt diluate de 5 ori cu un sorbent diluat în titru cu o soluție tampon. Un rând de tuburi este plasat într-un raft, al cărui număr și număr corespund cu numărul și numărul serurilor de sânge testate. Absorbantul diluat în titru este turnat în eprubete cu o pipetă, 0,2 ml, apoi se adaugă 0,05 ml de ser de sânge de testare complet și se amestecă bine. Diluarea serului sanguin poate fi efectuată cu aparatul Florinsky. Serul de sânge diluat cu absorbantul se aplică pe antigen astfel încât să acopere uniform frotiul, iar preparatele sunt plasate într-o cameră umedă, care este închisă cu un capac și plasată într-un termostat la 37 ° timp de 30 de minute (faza de reacție Eu). După prima fază, preparatele sunt spălate cu atenție în 2 porțiuni de tampon fosfat, iar în a doua porție, preparatele sunt plasate timp de 10 minute, uscate, după care sunt plasate din nou într-o cameră umedă, serul luminiscent diluat prin titru este aplicat și lăsat la temperatura camerei timp de 30 de minute (reacții de fază II). La sfârșitul celei de-a doua faze, preparatele sunt spălate cu tampon fosfat, așa cum s-a descris mai sus, uscate și aplicate pe suprafața frotiurilor cu o picătură de ulei de imersie neluminiscent (dimetil ftalat).

Studiul preparatelor se efectuează într-un microscop fluorescent cu o lampă cu mercur cuarț DRSH-250 cu sistem de imersie, ocular 4X sau 5X, filtre SZS-7 sau 14, FS-1. BS-8 și ZhS-18 sau T-2N. Reacția este luată în considerare prin evaluarea luminescenței treponemelor palide. Serul sanguin este considerat pozitiv în abs RIF dacă dă o strălucire pentru 4+, 3+ și 2+. O strălucire verde-galbenă strălucitoare este evaluată cu 4+, o strălucire strălucitoare este evaluată cu 3+ și o strălucire slabă este cu 2+. Serurile sunt considerate negative dacă dau o strălucire de peste 1 (treponemele din preparat sunt colorate mai intens decât fundalul) sau nu o dau.

În fiecare setare a RIF-abs, trebuie utilizate următoarele controale:

Control puternic pozitiv. Ser sanguin al unui pacient cu sifilis, care dă o strălucire de 4+ când este diluat cu tampon de 5 ori. Când este diluat de 5 ori cu sorbent, serul sanguin nu trebuie să piardă gradul de pozitivitate cu mai mult de 1+.

Control slab pozitiv. Ser de sânge întreg sau diluat al unui pacient cu sifilis, administrând grad slab luminiscența antigenului cu 2+ atunci când este diluată cu tampon de 5 ori. Când este diluat cu un sorbent, pozitivitatea acestuia trebuie păstrată.

Control nespecific. Ser din sânge nesifilitic, care, atunci când este diluat cu un tampon, fluorescență de cel puțin 2+. Când este diluat cu un sorbent, pozitivitatea acestuia trebuie eliminată.

Controalele serului antigen, sorbent, luminescent pot fi setate numai atunci când se utilizează o serie nouă de ingrediente.

Metoda de setare a RIF-abs cu sânge capilar

Setarea RIF-abs este posibilă nu numai cu serul de sânge, ci și cu sângele luat de la deget. Această modificare a RIF-abs poate fi utilizată la examinarea copiilor pentru sifilis, atunci când este dificil să se obțină sânge dintr-o venă la adulți, în timpul unei examinări în masă a diferiților contingenți pentru sifilis.

La setarea RIF-abs cu sânge, se folosesc aceleași ingrediente de reacție ca la setarea RIF-abs cu ser din sânge (antigen, sorbent, ser luminiscent). Titrul serului luminescent este determinat conform schemei de mai sus, dar atunci când se produce o reacție cu sânge. După ce degetul pacientului este perforat, sângele pentru examinare este luat cu o micropipetă până la semnul de 0,1 ml, suflat rapid într-o eprubetă care conține 0,3 ml de apă distilată, amestecat bine cu o pipetă și filtrat printr-un filtru de hârtie umezit cu apă distilată . Configurarea unei reacții cu sânge diluat este posibilă atât în ​​ziua luării acestuia, cât și după 1-2 zile, cu condiția să fie păstrat la 4 °.

Imediat înainte de etapizarea reacției, se adaugă 0,1 ml din întregul sorbent la toate probele de sânge incluse în reacție, amestecate cu o pipetă și agitare, plasate într-un termostat la 37 ° timp de 30 de minute. Apoi sângele tratat cu absorbantul este aplicat pe frotiurile antigenului și plasat într-o cameră umedă la 37 ° (1 fază a reacției). După expirarea perioadei de expunere, preparatele sunt spălate în prima porție de tampon fosfat astfel încât să nu existe urme de sânge pe diapozitive și să fie plasate în a doua porție de tampon timp de 10 minute. După uscarea frotiurilor, se efectuează faza II a reacției. În acest caz, serul luminescent împotriva globulinelor umane, diluat de titrul stabilit pentru această modificare a RIF, se aplică preparatelor. Diapozitivele din camera umedă sunt plasate din nou într-un termostat la 37 °.

După 30 de minute, preparatele sunt spălate din nou în 2 porțiuni de tampon fosfat timp de 10 minute, uscate și montate pentru microscopie cu fluorescență. Studiul medicamentelor și înregistrarea rezultatelor reacției se efectuează în același mod ca atunci când se setează RIF-abs cu ser de sânge.

Tehnica de setare RIF-200

Tehnicile de setare RIF-abs și RIF-200 sunt similare. La setarea RIF-200, prelucrarea serurilor de sânge testate, prepararea antigenului, prepararea serului luminescent anti-specie și titrarea acestuia se efectuează în același mod ca la setarea RIF-abs. Trebuie luat în considerare doar faptul că titrurile serului luminescent produse în prezent în intervalul RIF-200 variază de la 1: 20 la 1: 50.

Tehnica de punere în scenă RIF-200

Serurile de sânge testate sunt diluate de 200 de ori cu tampon fosfat. Pentru aceasta, 3 rânduri de eprubete sunt plasate într-un raft, al căror număr și numerotare în fiecare rând corespunde numărului și numerotării serurilor de sânge testate din registrul de lucru. În primul rând, se toarnă seruri de sânge de test întreg, în al doilea rând, 0,45 ml de tampon sunt turnate în tuburi, în al treilea - 0,95 ml de tampon. În al doilea rând, se prepară o diluție de 10 ori a serurilor din sânge, pentru care se iau 0,05 ml de ser de sânge testat din fiecare tub din primul rând cu o pipetă gradată separată de 1 ml, transferată în tubul corespunzător din al doilea rând și amestecat cu tamponul disponibil acolo. Din fiecare eprubetă din al doilea rând, cu aceeași pipetă, transferați 0,05 ml de ser de sânge testat diluat deja de 10 ori în eprubeta corespunzătoare din al treilea rând și obțineți o diluare de 200 de ori.

Când se organizează o reacție la preparatele plasate într-o cameră umedă, se aplică seruri de sânge testate diluate de 200 de ori astfel încât numărul lor indicat pe eprubete să corespundă cu numerele de pe lamele de sticlă. După aplicare pe preparate serice din sânge, camera umedă este plasată timp de 30 de minute într-un termostat cu temperatura de 37 ° (faza I a reacției). Apoi preparatele sunt spălate timp de 10 minute în 2 porțiuni de tampon și uscate. După aceea, acestea sunt plasate din nou într-o cameră umedă, iar serul luminescent diluat prin titru se aplică la toate (faza II a reacției). A doua fază se desfășoară timp de 30 de minute la temperatura camerei, după care preparatele sunt spălate timp de 10 minute, uscate și montate pentru microscopie cu fluorescență.

Rezultatele RIF-200 sunt luate în considerare la fel ca RIF-abs.

În cazul în care clinicienii sunt interesați de titrul anticorpilor fluorescenți din serul sanguin al pacientului, RIF-abs și RIF-200 trebuie stabilite cu o diluție secvențială a serurilor de sânge testate și titrul anticorpilor fluorescenți pentru a lua în considerare cea mai mare diluție a ser de sânge care încă dă un rezultat pozitiv al reacției. Titrul este de obicei notat printr-un număr care caracterizează gradul de diluare al serului sanguin testat, de exemplu, 5, 10, 20, 40 etc. (RIF-abs) sau 200, 400, 800 etc. (RIF-200).

La etapizarea ambelor modificări ale reacției pentru diluarea serurilor de sânge testate și pentru spălarea preparatelor după fazele I și II, trebuie utilizat un tampon fotatic cu următoarea compoziție: 1 l apă distilată, 6,8 g clorură de sodiu, 1,48 g acid fosforic disubstituit sodic, 0, 43 g fosfat de potasiu monosubstituit (pH = 7,2). Soluția preparată se păstrează la temperatura camerei timp de cel mult o săptămână.

Datorită posibilității de a obține rezultate negative în prezența anticorpilor fluorescenți, sângele și serul nu trebuie examinate în RIF-abs și RIF-200 în timpul tratamentului pacienților cu penicilină.

Metodologie pentru configurarea RIF-c

Diagnosticul precoce al leziunilor sistemului nervos în sifilis este o problemă urgentă în lupta împotriva acestei boli. Datorită faptului că RIF-c are o sensibilitate mai mare decât toate celelalte teste utilizate pentru diagnosticul de lichid al sifilisului, această modificare a RIF poate fi recomandată pentru diagnosticul leziunilor sifilitice ale sistemului nervos central în toate formele de sifilis.

Pentru setarea RIF-c, se utilizează același antigen, ser luminescent, ca pentru setarea RIF-abs și RIF-200 cu ser din sânge. Determinarea anticorpilor fluorescenți în lichidul cefalorahidian și serul sanguin și contabilizarea reacției sunt, de asemenea, similare.

Lichidul cefalorahidian este introdus în reacție neinactivat și întreg. Înainte de a seta reacția, acesta poate fi păstrat în compartimentul congelator al frigiderului în eprubete sub dopuri de cauciuc timp de până la 2 săptămâni. Decongelarea se efectuează la temperatura camerei.

Tehnica de punere în scenă RIF-c

În faza I a reacției, 0,05 ml de lichid cefalorahidian nediluat se aplică pe antigen, preparatele sunt plasate într-o cameră umedă timp de 30 de minute la temperatura camerei. Apoi sunt spălate cu tampon fosfat, pH = 7,2, timp de 10 minute, uscate. În faza II, un ser luminiscent diluat prin titru este aplicat preparatelor, care este titrat la stabilirea unei reacții cu fluid cerebrospinal... Preparatele sunt păstrate la temperatura camerei timp de 30 de minute într-o cameră umedă, spălate, uscate și montate pentru microscopie cu fluorescență.

Surse de erori

1. Nerespectarea condițiilor de preparare, depozitare a reactivilor și stabilirea reacției.

2. Calitatea slabă a serului luminescent și determinarea inexactă a titlului său.

3. Aplicarea materialului de testat sau a serului luminescent atunci când se organizează o reacție nu la medicament, ci la cealaltă parte a lamelei.

4. Reglarea incorectă a iluminării la microscopul fluorescent.

5. Antigen de calitate scăzută.

Analiza sifilisului se face folosind o varietate de metode de detectare a agentului patogen. Odată cu dezvoltarea patologiei, apar un număr mare de semne specifice, prin urmare, pentru a stabili un diagnostic precis, o persoană bolnavă este examinată într-un mod cuprinzător. Analiza generală sângele nu este foarte informativ, nu este utilizat la diagnosticarea acestei infecții venerice.

Tipuri de cercetare și biomateriale pentru analiză

Diverse tehnici și biomateriale sunt utilizate pentru a identifica boala. În stadiile incipiente, sifilisul este determinat folosind un test bacterioscopic. Probele sunt examinate la microscop. Dispozitivul vă permite să detectați tulpini de agent patogen. Mai târziu își desfășoară activitatea teste serologice sânge. Datorită acestora, antigenele și anticorpii de sifilis sunt detectați în probe.

Metodele pentru determinarea unei infecții genitale sunt împărțite în 2 categorii:

• Direct, dezvăluind un microorganism patogen. Acestea includ: microscopia în câmp întunecat, analiza RIT (infecția iepurilor cu biomaterial pentru cercetare), Metoda PCR- reacția în lanț a polimerazei (cu ajutorul său, se găsesc elementele genetice ale agentului patogen).
• Indirect (serologic) detectează anticorpi împotriva agentului patogen. Sunt produse sistem imunitar ca răspuns la infecție.

Tehnicile serologice sunt împărțite în 2 categorii: treponemale și non-treponemale.

• Non-treponemal, incluzând: testul roșu toluidinic, analiza RSK, testul RPR, testul de sânge prin metoda de cancer rapid al vezicii urinare.
• Treponemal, inclusiv: imunoblotare, test RSK, analiză RIT, studiu RIF, test RPGA, analiză ELISA.

Conținutul informațional al testelor de infecție este diferit. Mai des fac principalele tipuri de teste pentru sifilis, care includ metode serologice.

Biomaterial pentru cercetare

Pentru a identifica treponema palidă, un agent patogen care arată ca o spirală și provoacă sifilis, se prelevează probe:

• sânge venos;
• lichid cefalorahidian (secreție din canalul spinal);
• conținutul ganglionilor limfatici;
• tesut de ulceratie.

Dacă este necesar să se efectueze teste pentru detectarea sifilisului, sângele este donat nu numai din vena cubitală, ci și din deget. Alegerea biomaterialului și metoda de cercetare este influențată de severitatea cursului infecției și a echipamentului centrului de diagnostic.

Cercetare directă

Dovezile convingătoare ale sifilisului sunt identificarea agenților infecțioși la microscop. În acest fel, un agent patogen se găsește în 8 din 10. Un rezultat negativ la restul de 2 pacienți nu înseamnă că nu sunt infectați.

Studiul se face în stadiul primar și secundar (stadiul) bolii, care se caracterizează prin apariția erupțiilor pe piele și a sifilisului (ulcerație) pe țesuturile epiteliale sau pe membranele mucoase. Agenții patogeni care cauzează boli venerice se găsesc în deversarea din leziuni.

Mai exact, un test complex, notat ca RIF - reacția imunofluorescenței, face față definiției treponemelor. Proba pentru cercetare este pretratată cu anticorpi fluorescenți. Compușii capabili să strălucească se lipesc împreună cu bacteriile. Examinând probele la microscop, în caz de infecție, asistentul de laborator vede agenți patogeni spumante.

Testul este utilizat pentru diagnosticarea precoce a bolii. Cu cât durează mai mult boala, cu atât este mai mică sensibilitatea metodelor de cercetare. În plus, cade după tratamentul erupțiilor cutanate și ulcerelor cu antiseptice și la pacienții care au fost supuși tratamentului. Ocazional cercetările dau rezultate fals negative și fals pozitive.

Analiza RIT este o metodă extrem de precisă pentru detectarea sifilisului. La efectuarea unui test, rezultatele trebuie să aștepte mult timp. Până când iepurele infectat prezintă semne de infecție. Testul este folosit foarte rar, în ciuda faptului că este foarte precis.

Prin utilizarea reacție în lanț a polimerazei pentru sifilis sunt determinate elementele genetice ale agenților patogeni. Singurul dezavantaj al PCR este costul ridicat.

Teste non-treponemice

Aceste teste de sânge ajută la detectarea anticorpilor care apar ca răspuns la cardiolipină, un compus legat de structura generală a membranelor agenților patogeni.

Reacție Wasserman (PB sau RW)

Cel mai faimos studiu pentru sifilis este reacția Wasserman. RV este inclus în categoria reacțiilor de fixare a complementului (CAC). Noile metode RSC au diferențe semnificative față de RW tradițional. Dar sunt desemnați, ca și până acum, prin conceptul de „reacție Wasserman”.

Sistemul imunitar sintetizează anticorpi (markeri) ca răspuns la invazia treponemelor. Acestea sunt detectate în timpul unui test de sânge pentru sifilis prin metoda de reacție Wasserman. Un rezultat RW pozitiv confirmă faptul că subiectul este infectat.

Reacția de hemoliză - indicele analizei RV. Cu el, interacționează 2 substanțe: ser hemolitic și eritrocite de berbec. Serul se face prin imunizarea unui iepure cu eritrocite de berbec. Activitatea fluidului biologic este redusă prin încălzire.

Indicatorii RV depind de dacă hemoliza a trecut sau nu. Hemoliza are loc în proba fără markeri. În acest caz, o reacție la antigeni este imposibilă. Complementul este cheltuit interacționând cu eritrocitele de oaie. Când există markeri în eșantion, complimentul reacționează cu antigenii. În acest caz, hemoliza nu apare.